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分子伴侣共表达对核糖核酸酶R可溶性表达的影响
被引量:
2
1
作者
李轲
李站胜
韩双艳
《现代食品科技》
EI
CAS
北大核心
2019年第11期93-99,共7页
核糖核酸外切酶R(RNase R)可降解几乎所有的线性RNA分子和Y结构RNA,但不易降解环形RNA(circ RNA)、套索结构(lariatRNA)和3’突出末端少于7个核苷酸的双链RNA分子,因此可以构建内含子c DNA文库用于可变剪切研究。本研究构建了含rnr基因...
核糖核酸外切酶R(RNase R)可降解几乎所有的线性RNA分子和Y结构RNA,但不易降解环形RNA(circ RNA)、套索结构(lariatRNA)和3’突出末端少于7个核苷酸的双链RNA分子,因此可以构建内含子c DNA文库用于可变剪切研究。本研究构建了含rnr基因的重组表达质粒pET-22b(+)-rnr,并将其表达产物纯化后通过SDS-PAGE分析和酶活性评价,确认rnr基因在大肠杆菌中已实现表达。之后构建4种分子伴侣共表达系统(pGro7、pKJE7、pTf16和pG-Tf2)。4种分子伴侣质粒分别与重组表达质粒pET-22b(+)-rnr共表达,筛选最适分子伴侣质粒,并优化共表达条件,提高目的蛋白可溶性表达。实验表明,分子伴侣质粒pGro7使蛋白表达量提高了43.80%,效果最为显著;20℃诱导时目的蛋白的可溶性表达最高;当L-阿拉伯糖浓度为0.50 mg/mL时,分子伴侣质粒pGro7使蛋白表达量提高了54.50%。通过使用分子伴侣共表达系统及优化表达条件提高了RNase R的可溶性表达,为该酶进一步研究奠定了基础。
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关键词
RNASE
R
可溶性
表达
分子伴侣
共表达系统
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职称材料
分子伴侣共表达对嗜热环糊精葡萄糖基转移酶异源可溶性表达的影响
被引量:
3
2
作者
郭永华
陈济琛
+1 位作者
贾宪波
林新坚
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第3期518-526,共9页
【目的】通过优化表达条件,提高嗜热环糊精葡萄糖基转移酶(CGTase)的可溶性表达和胞外酶活性。【方法】构建含cgt基因的重组表达质粒p ET-28a(+)-omp A-cgt,筛选最适诱导温度,并构建5种分子伴侣共表达系统(p KJE8、p KJE7、p Gro7、p T...
【目的】通过优化表达条件,提高嗜热环糊精葡萄糖基转移酶(CGTase)的可溶性表达和胞外酶活性。【方法】构建含cgt基因的重组表达质粒p ET-28a(+)-omp A-cgt,筛选最适诱导温度,并构建5种分子伴侣共表达系统(p KJE8、p KJE7、p Gro7、p Tf16和p G-Tf2,5种分子伴侣质粒分别与重组表达质粒p ET-28a(+)-omp A-cgt共表达),筛选最适分子伴侣质粒,优化共表达条件。【结果】通过SDS-PAGE分析和测定胞外酶活,CGTase基因在大肠杆菌中实现表达,且具有一定量的重组CGTase分泌至胞外;25°C诱导时CGTase的可溶性表达和在胞外上清中的酶活都最高;分子伴侣质粒p KJE8使酶的胞外活性提高了48.6%,效果最为显著;当L-阿拉伯糖浓度为0.5 g/L时,分子伴侣质粒p KJE8使酶的胞外活性提高了68.5%。【结论】通过优化表达条件及使用分子伴侣共表达系统提高了环糊精葡萄糖基转移酶的可溶性表达和胞外酶活,为该酶进一步相关研究奠定了基础。
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关键词
嗜热环糊精葡萄糖基转移酶
可溶性
表达
分子伴侣
共表达系统
原文传递
题名
分子伴侣共表达对核糖核酸酶R可溶性表达的影响
被引量:
2
1
作者
李轲
李站胜
韩双艳
机构
华南理工大学生物科学与工程学院
出处
《现代食品科技》
EI
CAS
北大核心
2019年第11期93-99,共7页
基金
国家科技支撑计划项目(2012AA022205)
文摘
核糖核酸外切酶R(RNase R)可降解几乎所有的线性RNA分子和Y结构RNA,但不易降解环形RNA(circ RNA)、套索结构(lariatRNA)和3’突出末端少于7个核苷酸的双链RNA分子,因此可以构建内含子c DNA文库用于可变剪切研究。本研究构建了含rnr基因的重组表达质粒pET-22b(+)-rnr,并将其表达产物纯化后通过SDS-PAGE分析和酶活性评价,确认rnr基因在大肠杆菌中已实现表达。之后构建4种分子伴侣共表达系统(pGro7、pKJE7、pTf16和pG-Tf2)。4种分子伴侣质粒分别与重组表达质粒pET-22b(+)-rnr共表达,筛选最适分子伴侣质粒,并优化共表达条件,提高目的蛋白可溶性表达。实验表明,分子伴侣质粒pGro7使蛋白表达量提高了43.80%,效果最为显著;20℃诱导时目的蛋白的可溶性表达最高;当L-阿拉伯糖浓度为0.50 mg/mL时,分子伴侣质粒pGro7使蛋白表达量提高了54.50%。通过使用分子伴侣共表达系统及优化表达条件提高了RNase R的可溶性表达,为该酶进一步研究奠定了基础。
关键词
RNASE
R
可溶性
表达
分子伴侣
共表达系统
Keywords
RNase R
soluble expression
molecular chaperone
co-expression system
分类号
R73 [医药卫生—肿瘤]
下载PDF
职称材料
题名
分子伴侣共表达对嗜热环糊精葡萄糖基转移酶异源可溶性表达的影响
被引量:
3
2
作者
郭永华
陈济琛
贾宪波
林新坚
机构
福建农林大学生命科学学院
福建省农业科学院土壤肥料研究所
出处
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第3期518-526,共9页
基金
国家公益性农业科研专项项目(No.201303094-05)
福建财政社会公益研究项目(No.2060302)~~
文摘
【目的】通过优化表达条件,提高嗜热环糊精葡萄糖基转移酶(CGTase)的可溶性表达和胞外酶活性。【方法】构建含cgt基因的重组表达质粒p ET-28a(+)-omp A-cgt,筛选最适诱导温度,并构建5种分子伴侣共表达系统(p KJE8、p KJE7、p Gro7、p Tf16和p G-Tf2,5种分子伴侣质粒分别与重组表达质粒p ET-28a(+)-omp A-cgt共表达),筛选最适分子伴侣质粒,优化共表达条件。【结果】通过SDS-PAGE分析和测定胞外酶活,CGTase基因在大肠杆菌中实现表达,且具有一定量的重组CGTase分泌至胞外;25°C诱导时CGTase的可溶性表达和在胞外上清中的酶活都最高;分子伴侣质粒p KJE8使酶的胞外活性提高了48.6%,效果最为显著;当L-阿拉伯糖浓度为0.5 g/L时,分子伴侣质粒p KJE8使酶的胞外活性提高了68.5%。【结论】通过优化表达条件及使用分子伴侣共表达系统提高了环糊精葡萄糖基转移酶的可溶性表达和胞外酶活,为该酶进一步相关研究奠定了基础。
关键词
嗜热环糊精葡萄糖基转移酶
可溶性
表达
分子伴侣
共表达系统
Keywords
Thermophilic cyclodextrin glucosetransferase
Soluble expression
Molecular chaperone
Co-expression system
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
分子伴侣共表达对核糖核酸酶R可溶性表达的影响
李轲
李站胜
韩双艳
《现代食品科技》
EI
CAS
北大核心
2019
2
下载PDF
职称材料
2
分子伴侣共表达对嗜热环糊精葡萄糖基转移酶异源可溶性表达的影响
郭永华
陈济琛
贾宪波
林新坚
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
3
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