共转化法剔除转基因小麦中的bar基因

利用PCR检测了 2 6 8株转小麦黄花叶病病毒复制酶基因T3代植株 ,初步筛选出只含有功能基因 (WYMV Nib8基因 )而不含有筛选标记基因 (bar基因 )的转基因小麦植株 2 8棵 ,为转基因小麦的安全性种植提供了保障。同时对无标记基因的转基因植株进行了叶片涂抹除草剂验证 。

农杆菌介导的水稻双载体共转化法中部分影响因素的研究

以T-DNA区分别只含有潮霉素选择标记基因(HPT)和GUS报告基因的双元载体pCAMBIA1300和pCAMBIA0301用于农杆菌介导的水稻共转化试验。根据经农杆菌浸染并共培养3d后水稻愈伤组织中的GUS瞬间表达情况及其稳定共转化率,测定了不同农杆菌菌株搭配及其不同浓度配比对共转化效率的影响。结果表明,在两种农杆菌菌液浓度比为1:1的情况下,农杆菌EHA105/pCAMBIA1300与EHA105/pCAMBIA0301组合共转化水稻的效率要高于其他菌株的组合;在以农杆菌EHA105/pCAMBIA1300与EHA105/pCAMBIA0301进行共转化时,两种菌液浓度比为1:2时共转化效率最高。

共转化法删除转基因植物筛选标记基因的研究

筛选标记基因因其在植物基因工程中的重要作用而得到了普遍应用,目前使用的筛选标记主要是抗生素抗性基因或抗除草剂基因,然而一旦获得转基因植株,它的存在不但没有必要,而且还引起人们的种种顾虑。因此如何从转基因植物中删除筛选标记基因成为植物基因工程研究的重要内容。目前已有多个系统用来删除选择标记基因,从而获得无筛选标记基因的转基因植株。其中共转化法操作简便因而得到了广泛的应用。本文综述了共转化法研究的最新进展并对其实际应用的可行性进行探讨。

共转化法及其在转基因植物研究中的应用

随着转基因植物研究的深入,越来越多的转基因植物将问世,其安全性和稳定性也倍受关注。共转化法作为一种简单可行的培育无选择标记转基因植物的方法,以其操作简单和较高的共转化率,较好地解决了生物安全性的问题,而倍受青睐。综述了几种已获成功的共转化方法,并讨论了其在转基因植物研究中的应用和前景。

用共转化法培育无选择标记转基因植物研究进展

介绍了用农杆菌介导的共转化法培育无选择标记基因转基因植物的原理、方法、影响因素以及其国内外研究进展。

气相共转化碘化法高收率合成三氟碘甲烷

开发了一种共转化碘化法合成CF_(3)I的方法,探索CF_(3)COOH的加入对合成CF_(3)I的影响,研究了反应温度、物料比等条件对反应收率的影响,同时考察了催化剂的寿命。试验结果表明,共转化碘化法的碘单程收率、催化剂寿命、反应温度均优于传统的气相催化合成技术。

基因枪法介导的转KN2基因小麦的获得及鉴定

【目的】获得转KN2基因的小麦植株,为研究KN2基因对提高转基因小麦抗寒性的作用,以及为利用基因工程提高小麦抗逆性奠定基础。【方法】以弱冬性小麦品种小偃22为供试材料,通过基因枪法,用含有KN2基因的植物表达载体和筛选标记基因bar共转化小麦幼胚愈伤组织,经过除草剂(Phosphinothricin,草丁膦)筛选和愈伤组织分化获得再生植株,并对得到的再生小麦植株进行PCR检测。【结果】采用基因枪法共轰击小偃22的幼胚愈伤组织1 680个,共获得再生植株17株,移栽到花盆中成活15株;根据目标基因序列设计特异引物,对成活的小麦植株进行PCR检测,结果表明获得含有bar基因和KN2基因的转基因阳性植株分别为6株和4株,转化率分别为0.36%和0.24%,bar和KN2的共转化率为0.24%。【结论】KN2基因成功地转入到小麦品种小偃22中。

转基因植物标记基因的研究进展

随着商业化植物转基因品种的不断出现 ,人们对转基因植物的安全问题谈论得越来越多 ,其中争论的焦点之一即筛选标记基因的安全性。科学工作者尝试培育具安全选择标记基因或无选择标记的转基因植物 ,目的是提高转基因植物安全性 ,使之更易为广大消费者所接受。本文就这方面的研究进展作一综述。

基因枪介导的转PYL5基因小麦的获得与鉴定

【目的】通过基因枪介导共转化,获得转拟南芥抗旱基因PYL5的小麦植株,为转基因小麦的抗旱功能研究奠定基础。【方法】以小麦品种西农889、绵阳19和宁春16为供试材料,通过基因枪介导法将诱导型启动子Rd29A启动的PYL5基因和筛选标记基因Bar共转化到小麦幼胚愈伤组织中,经过除草剂PPT(Phosphinothricin)筛选和愈伤组织分化,获得再生植株。根据目标基因PYL5和Bar基因序列分别设计特异引物,对移栽成活的小麦T0代再生植株进行基因特异性PCR检测。【结果】采用基因枪分别轰击西农889的1800个、绵阳19的800个和宁春16的800个幼胚愈伤组织,经过筛选和分化分别获得了9,5和14株小麦再生植株;对转基因小麦T0代再生植株的基因特异性PCR检测结果表明,西农889、绵阳19和宁春16 Bar基因的转化率分别为0.280%,0.500%和0.750%,PYL5基因的转化率分别为0.110%,0.125%和0.500%,Bar和PYL5基因的共转化率分别为0.110%,0.125%和0.500%。【结论】PYL5基因成功转入到了小麦品种西农889、绵阳19和宁春16中。

同源转基因作物育种技术研究进展

目前,传统的转基因技术对环境和食品存在潜在风险,同源转基因技术(Cisgenesis technology)作为传统转基因技术的替代技术,可以通过重组同一交配亲本和近缘种属的特定基因功能元件,使用P-DNA序列替换T-DNA区域,进而产生无标记基因,无载体骨架的基因修饰作物。本综述总结了此技术应用过程中比较成功的3种方法:无标记基因转化法、删除选择标记基因以及利用ipt标记基因选择无载体骨架转化体,并介绍了利用植物来源的P-DNA替换T-DNA的原理和策略。同源转基因技术的应用与发展,对于转基因技术的完善和转基因作物的商业化有积极的推动作用。