痛风宁对痛风大鼠关节滑膜细胞环氧化酶的影响

目的 :通过观察痛风宁对急性痛风滑膜细胞环氧化酶 (COX)异构体的影响 ,进一步探讨其抗炎镇痛作用机理。方法 :30只大鼠随机分成正常对照组 6只 ,模型对照 1组 6只 ,模型对照 2组 6只 ,痛风宁组 6只 ,秋水仙碱组 6只。分别予生理氯化钠溶液、痛风宁药液、秋水仙碱悬浮液灌胃 3天 ,第 4天建立急性痛风模型 ,正常对照组、痛风宁组、秋水仙碱组在造模后 3h切取踝关节滑膜 ,模型对照组则分别于 3h、 6h后取材。免疫组化法观察滑膜细胞COX 1 /COX 2的表达。结果 :造模后受试关节滑膜细胞COX 1 /COX 2表达都有显著增强 ,以COX 2更为明显。痛风宁与秋水仙碱均可下调COX 1 /COX 2的表达 ,二者间无显著性差异。结论 :痛风宁通过下调COX 1 /COX 2的表达 。

独活寄生汤含药血清细胞外囊泡对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的影响

背景:独活寄生汤是治疗类风湿关节炎的经典方剂,但具体作用机制尚不清楚,细胞外囊泡具有细胞间通讯及传递信号的强大功能,可能是该方剂发挥作用的信号载体。目的:探讨独活寄生汤含药血清细胞外囊泡对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。方法:肿瘤坏死因子α体外诱导构建类风湿关节炎滑膜成纤维细胞模型,实验分为5组:正常组、模型组、独活寄生汤含药血清组、独活寄生汤含药血清细胞外囊泡组、生理盐水血清细胞外囊泡组。采用CCK-8法筛选独活寄生汤含药血清及独活寄生汤含药血清细胞外囊泡作用的最佳浓度及时间;ELISA检测细胞上清炎症因子水平;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力及迁移能力;Hoechst染色检测细胞凋亡情况;qRT-PCR及Western blot检测细胞凋亡相关基因及蛋白表达。结果与结论:(1)独活寄生汤含药血清作用的最佳体积分数为10%,独活寄生汤含药血清细胞外囊泡作用的最佳质量浓度为10 ng/mL,二者作用的最佳时间均为24 h;(2)与模型组相比,独活寄生汤含药血清、独活寄生汤含药血清细胞外囊泡及生理盐水血清细胞外囊泡均能抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的炎症因子表达(P<0.05)、划痕愈合(P<0.05)、迁移及侵袭(P<0.05),且独活寄生汤含药血清细胞外囊泡的抑制作用更为突出(P<0.05);(3)独活寄生汤含药血清及独活寄生汤含药血清细胞外囊泡均可促进类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的凋亡;(4)与模型组相比,独活寄生汤含药血清、独活寄生汤含药血清细胞外囊泡及生理盐水血清细胞外囊泡均可增加促凋亡因子Caspase-3、Caspase-9、Bax表达(P<0.05),降低抑凋亡因子Bcl-2表达(P<0.05),且独活寄生汤含药血清细胞外囊泡对凋亡相关因子的调节作用更显著。上述实验结果表明独活寄生汤含药血清细胞外囊泡可以抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的过度增殖、迁移、侵袭并促进其凋亡。

15d—PGJ2对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞环氧化酶-2和诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的研究15d-PGJ2对类风湿性关节炎(RA)滑膜成纤维细胞环氧化酶-2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(iN-OS)表达的影响。方法分离并培养RA患者及正常对照者的滑膜成纤维细胞，用15d-PGJ2处理RA患者的滑膜成纤维细胞。用硝酸酶还原法和酶联免疫吸附法分别检测滑膜细胞培养上清液中NO和PGB的水平。用半定量RT—PCR检测15d-PGJ2处理及对照组滑膜细胞中COX-2和iNOS mRNA的表达。结果(1)RA患者滑膜成纤维细胞中COX-2和iNOS mRNA的表达均明显高于正常对照组(P<0．01)；且RA滑膜细胞产生NO和PGB的水平也高于对照组(P<0．01)。(2)15d-PGJ2干预后可使RA滑膜成纤维细胞COX-2和iNOS的表达显著性降低(P<0．05)；同时伴有滑膜细胞产生NO和PGB量的下降(P<0．05)。结论15d-PGJ2可下调RA滑膜成纤维细胞环氧化酶-2和诱导型一氧化氮合酶的表达及降低滑膜细胞产生NO和PGB的水平。

慈苓化浊方对痛风大鼠滑膜组织环氧化酶-2、热休克蛋白70表达的影响

目的:分析慈苓化浊方对痛风大鼠滑膜组织中环氧化酶-2(COX-2)、热休克蛋白70(HSP70)表达的影响。方法:选取50只SPF级SD大鼠,10只大鼠作为对照组,另外40只建立痛风模型,将30只建模成功的大鼠分为模型组、药物对照组、慈苓化浊方组,每组10只。观察各组大鼠组织病理学、关节肿胀度、COX-2、HSP70表达、炎症因子、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/叉头框转录因子O亚族1(FoxO1)通路相关因子及其mRNA表达量。结果:与对照组相比,模型组、药物对照组、慈苓化浊方组关节肿胀度、COX-2、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、PI3K mRNA、AKT mRNA、FoxO1 mRNA表达量升高,HSP70 mRNA、Caspase-3 mRNA表达量降低(均P<0.05)。与模型组相比,药物对照组、慈苓化浊方组关节肿胀度、COX-2、TNF-α、IL-1β、IL-6、PI3K mRNA、AKT mRNA、FoxO1 mRNA表达量降低,HSP70 mRNA、Caspase-3 mRNA表达量升高(均P<0.05)。与药物对照组相比,慈苓化浊方组关节肿胀度、COX-2、TNF-α、IL-1β、IL-6、PI3K mRNA、AKT mRNA、FoxO1 mRNA表达量降低,HSP70 mRNA、Caspase-3 mRNA表达量升高(均P<0.05)。结论:采用慈苓化浊方干预痛风大鼠,可降低大鼠关节肿胀程度,降低滑膜组织COX-2、HSP70表达,抑制炎症反应,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT/FoxO1通路有关。

环状RNA_0032131靶向微小RNA-145-5p调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨环状RNA_003213(hsa_circ_003213)靶向微小RNA-145-5p(miR-145-5p)对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RA-FLSs)增殖、迁移和侵袭的影响。方法检测RA患者和健康体检者外周血、RA-FLSs、人正常滑膜成纤维细胞中hsa_circ_0032131和miR-145-5p的水平。将RA-FLSs分为对照(NC)组、si-NC组、si-hsa_circ_0032131组、miR-NC组、miR-145-5p组、anti-miR-NC+si-hsa_circ_0032131组、anti-miR-145-5p+si-hsa_circ_0032131组、pcDNA组、pcDNA-hsa_circ_0032131组。采用CCK-8和Transwell法检测RA-FLSs活力、迁移和侵袭数。通过双荧光素酶报告实验确定hsa_circ_0032131与miR-145-5p的靶向关系。结果与健康体检者相比,RA患者外周血中hsa_circ_0032131表达增加,miR-145-5p表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与人正常滑膜成纤维细胞相比,RA-FLSs中hsa_circ_0032131表达增加,miR-145-5p表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与NC组比较,si-hsa_circ_0032131组RA-FLSs的活力和迁移、侵袭数目降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-145-5p组RA-FLSs的活力和迁移、侵袭数目降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与anti-miR-NC+si-hsa_circ_0032131组比较,anti-miR-145-5p+si-hsa_circ_0032131组RA-FLSs的活力和迁移、侵袭数目增高,差异有统计学意义(P<0.05)。与pcDNA组比较,pcDNA-hsa_circ_0032131组RA-FLSs中miR-145-5p水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-145-5p是hsa_circ_0032131的直接靶点。结论敲低hsa_circ_0032131通过上调miR-145-5p抑制RA-FLSs的增殖、迁移和侵袭。

miR-34a-5p靶向调控MMP-9对类风湿关节炎大鼠氧化应激及滑膜细胞分化的作用机制

目的探究微小RNA34a5p(miR-34a-5p)靶向调控基质金属蛋白酶(MMP)-9对类风湿关节炎(RA)大鼠氧化应激及滑膜细胞分化的作用机制。方法选取60只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常(A)组,模型(B)组,miR-NC(C)组,miR-34a-5p mimic(D)组,MMP-9抑制剂(E)组,miR-34a-5p mimic+MMP-9抑制剂(F)组,每组10只,对B、C、D、E、F组采用弗氏完全佐剂法进行RA建模,A组不建立该模型,建模成功后,对C组给予尾静脉注射0.5 ml 1×10^(5)/ml的miR-NC,对D组给予尾静脉注射0.5 ml 1×10^(5)/ml的miR-34a-5p mimic,对E组给予尾静脉注射30 mg/kg的盐酸多西环素,对F组给予miR-34a-5p mimic联合盐酸多西环素,A、B组同期给予尾静脉注射同体积生理盐水,苏木素-伊红(HE)染色检测大鼠滑膜组织病理形态,实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测大鼠滑膜组织中miR-34a-5p、MMP-9 mRNA相对表达,黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法检测血清中氧化应激相关指标,免疫荧光法检测大鼠滑膜组织中滑膜细胞分化相关指标。结果A组滑膜组织细胞结构正常且排列整齐,未见关节腔渗出、水肿、充血及炎性细胞浸润现象,B、C组出现弥漫性滑膜细胞和纤维组织增生,并可见大量血管翳形成及大量炎性细胞浸润现象,D、E、F组可见滑膜细胞轻度增生及少量炎性细胞浸润和新生毛细血管形成,水肿、充血情况明显改善;与A组比较,B、C组滑膜组织中miR-34a-5p mRNA表达、血清中超氧化物歧化酶(SOD)含量显著降低,MMP-9 mRNA表达、血清中丙二醛(MDA)含量、降钙素受体(CTR)蛋白表达明显升高(P<0.05),B组与C组相比无明显差异(P>0.05),与C组相比,D、E、F组miR-34a-5 mRNA表达、SOD含量显著升高,MMP-9 mRNA表达、MDA含量、CTR蛋白表达显著降低(P<0.05),且D组与E组相比无明显差异(P>0.05),而F组较E组变化显著(P<0.05);miR-34a-5p与MMP-9呈负相关(r=-0.952,P<0.001)。结论促进miR-34a-5p可对RA起到治疗作用,其可有效抑制氧化应激,并抑制滑膜细胞向破骨细胞分化,其机制可能与靶向调控MMP-9有关。

miR-let-7d-HMGA2通路调控缺氧诱导的类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞增殖

目的 研究缺氧在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜成纤维样细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)增殖中的作用及机制。方法 采用HE染色法检测RA和对照骨关节炎(osteoarthritis,OA)滑膜组织FLS增生情况。分离原代RA-FLS并采用流式细胞术鉴定;将RA-FLS置于常氧(21%O_(2))或缺氧环境(3%O_(2))中培养,CCK-8法检测细胞增殖水平的变化,RT-PCR检测miR-let-7d表达的变化。通过类似物或抑制物改变miR-let-7d的表达,观察其对RA-FLS增殖、凋亡的影响;探究miR-let-7d靶基因在缺氧诱导的RA-FLS增殖中的作用。结果 FLS在RA滑膜中增生明显,在缺氧环境下RA-FLS增殖加快,miR-let-7d表达水平降低;过表达miR-let-7d抑制RA-FLS增殖,但对细胞凋亡水平无明显影响;进一步的研究证实miR-let-7d靶基因HMGA2参与缺氧诱导的RA-FLS增殖。结论 miR-let-7d-HMGA2通路调控缺氧诱导的RA-FLS增殖。

miR-27a通过TLR4/NF-κB信号通路对类风湿关节炎滑膜细胞生物学行为的影响

目的:探讨miR-27a通过Toll样受体(TLR)4/NF-κB信号通路对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞生物学行为的影响。方法:选择行膝关节置换术的30例RA患者(RA组)和同期因创伤急诊截肢的18例患者(对照组)的滑膜组织,采用qRT-PCR法检测miR-27a的表达。将RA成纤维样滑膜细胞MH7A分为4组:空白对照组,不进行任何处理;TNF-α组,加入终浓度为20μg/L的TNF-α处理24 h;TNF-α+miR-NC组,加入终浓度为20μg/L的TNF-α处理后转染miR-NC;TNF-α+miR-27a mimic组,加入终浓度为20μg/L的TNF-α处理后转染miR-27a mimic,采用qRT-PCR法检测组织或细胞中miR-27a的表达量,CCK-8法检测细胞增殖情况,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡情况,双荧光素酶报告实验验证TLR4 mRNA与miR-27a的靶向关系,Western blot法检测细胞中TLR4、NF-κB、磷酸化TLR4(p-TLR4)和磷酸化NF-κB(p-NF-κB)蛋白的表达情况。结果:对照组和RA组滑膜组织中miR-27a的表达量分别为(1.00±0.08)和(0.36±0.05),RA组低于对照组(P<0.001)。与空白对照组比较,TNF-α组和TNF-α+miR-NC组细胞中miR-27a表达量下降,TNF-α+miR-27a mimic组miR-27a表达量升高;与TNF-α组和TNF-α+miR-NC组比较,TNF-α+miR-27a mimic组细胞中miR-27a表达量升高(P<0.05)。与空白对照组比较,TNF-α组和TNF-α+miR-NC组细胞增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力增强,细胞凋亡率降低;与TNF-α组和TNF-α+miR-NC组比较,TNF-α+miR-27a mimic组细胞增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力减弱,细胞凋亡率升高(P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实TLR4是miR-27a的靶基因。与空白对照组比较,TNF-α组和TNF-α+miR-NC组p-TLR4/TLR4、p-NF-κB/NF-κB升高;与TNF-α组和TNF-α+miR-NC组比较,TNF-α+miR-27a mimics组p-TLR4/TLR4、p-NF-κB/NF-κB降低(P<0.05)。结论:miR-27a可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,降低RA成纤维样滑膜细胞的增殖、侵袭和迁移能力,促进其凋亡。

滑膜巨噬细胞在类风湿关节炎中的研究进展

类风湿关节炎(RA)是以侵蚀性、对称性多关节炎为主要临床表现的自身免疫性疾病,基本病理改变为滑膜炎和血管翳形成。在RA患者的滑膜组织中有多种免疫细胞浸润,包括巨噬细胞、T淋巴细胞和B淋巴细胞等。滑膜巨噬细胞(SMs)在RA的发生和发展中起至关重要的作用。目前SMs主要有两种来源,一种来源于外周血单核细胞浸润到滑膜组织的巨噬细胞,另一种是滑膜组织驻留巨噬细胞。由于SMs的异质性,其在RA的发生和发展中起不同作用,SMs可以加速RA的疾病进展,但具有不同细胞表面标志物的SMs亚群也可以形成保护屏障,延缓RA的发生和发展。因此,未来应深入探讨SMs的来源及不同细胞表面标志物的SMs在RA疾病进展中的作用机制,以为RA的治疗提供依据。

从NF-κB/Bcl-2信号通路调控成纤维样滑膜细胞凋亡角度探讨中医药抑制类风湿关节炎滑膜炎症机制的研究进展

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以关节滑膜炎症为主要特征的自身免疫性疾病,成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)的抗凋亡是导致该病病情发展的主要因素。如何促进FLS凋亡并抑制炎症反应是目前RA治疗和研究的重点。核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)/B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)信号通路在RA发病过程中发挥了关键作用,其与FLS炎症倾向、抗凋亡等密切相关。研究并探讨NF-κB/Bcl-2信号通路调控FLS凋亡的机制及作用,介绍中医药靶向该通路促进FLS凋亡进而抑制RA滑膜炎症的研究现状,旨在为中医药治疗RA的研究提供一定基础。

血栓素A_2受体通过介导环氧酶2的合成增强类风湿关节炎滑膜细胞的增殖作用

目的:研究血栓素A2受体(thromboxane A2receptor,TXA2R)作为环氧酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)下游产物对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜细胞增殖力和COX-2表达的影响。方法:利用细胞增殖与毒性检测试剂盒(MTS)检测TXA2R拮抗剂SQ29548和激动剂U46619对RA关节滑膜细胞MH7A增殖力的影响作用,并用real-time PCR检测它们对COX-2 mRNA表达的影响;利用BrdU细胞增殖检测法观察MH7A细胞在转染COX-2小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)后细胞增殖受抑制的情况及额外施加U46619的可能影响。结果:SQ29548和U46619分别具有抑制和促进MH7A细胞增殖力与COX-2 mRNA表达的作用,且U46619可在一定程度上重建由COX-2 siRNA所抑制的MH7A细胞增殖力。结论:TXA2通过其受体TXA2R既可控制COX-2的表达,又可介导COX-2的细胞增殖效应,有可能作为RA治疗较为理想的新靶标。

IL-10抑制人肾系膜细胞环氧化酶-2及其介导的前列腺素E_2的释放

目的观察白细胞介素 - 10 (IL - 10 )对 IL - 1β诱导的人系膜细胞 (HMC)前列腺素 E2 (PGE2 )释放及环氧化酶 - 2(COX- 2 )基因和蛋白表达的影响。方法应用放射免疫测定法检测 HMC培养上清中 PGE2 ,应用 RT- PCR和 western blot检测 COX- 2 m RNA和蛋白水平。结果 1IL - 1β显著上调 PGE2 释放及 COX- 2基因和蛋白的表达 (P均 <0 .0 1) ;2 IL - 10对基础状态下 PGE2 释放及 COX- 2基因和蛋白表达无明显影响 (P>0 .0 5 ) ;3 IL - 10可呈剂量依赖性地下调 IL - 1β诱导的 PGE2 释放及 COX- 2 m RNA和蛋白表达 (P<0 .0 1)。结论 IL - 10抑制 IL - 1β诱导的 HMC PGE2 释放及 COX- 2表达 ,提示 :IL -

独活寄生汤含药血清对白细胞介素1β诱导的退变关节软骨细胞中基质金属蛋白酶和环氧化酶2表达的影响

目的:观察独活寄生汤含药血清对白细胞介素1β(interleukin-1 beta,IL-1β)诱导的退变关节软骨细胞中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)和环氧化酶2(cyclooxygenase 2,COX-2)表达的影响。方法:将36只2月龄SD大鼠随机分为独活寄生汤血清组、壮骨关节丸血清组和空白血清组,每组12只。分别以独活寄生汤、壮骨关节丸溶液和生理盐水灌胃,每次0.6 m L,每天2次,连续7 d。末次给药后采血,分离血清备用。将体外培养的SD大鼠第3代关节软骨细胞分为空白组、模型组、独活寄生汤组和壮骨关节丸组。模型组、独活寄生汤组和壮骨关节丸组软骨细胞加入IL-1β干预24 h后,分别采用含10%空白血清组血清、独活寄生汤血清组血清和壮骨关节丸血清组血清的DMEM培养基培养;空白组软骨细胞不加IL-1β,直接以含10%空白血清组血清的DMEM培养基培养。培养72 h后采用Western Blot法测定各组细胞中MMP-1、MMP-3、MMP-9、MMP-13和COX-2的含量。结果:4组软骨细胞的MMP-1、MMP-3、MMP-9、MMP-13和COX-2含量比较,组间差异均有统计学意义(0.135±0.007,0.324±0.006,0.174±0.007,0.234±0.007,F=266.333,P=0.000;0.150±0.028,0.346±0.027,0.250±0.028,0.293±0.028,F=26.855,P=0.000;0.131±0.014,0.283±0.009,0.148±0.014,0.158±0.015,F=50.442,P=0.000;0.173±0.035,0.691±0.051,0.318±0.038,0.286±0.039,F=91.860,P=0.000;0.201±0.033,0.796±0.031,0.370±0.033,0.327±0.034,F=125.270,P=0.000)。空白组的MMP-1、MMP-3、MMP-9、MMP-13和COX-2含量均低于模型组(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000)。模型组的MMP-1、MMP-3、MMP-9、MMP-13和COX-2含量均高于独活寄生汤组和壮骨关节丸组(P=0.000,P=0.003,P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.047,P=0.000,P=0.000,P=0.000)。独活寄生汤组的MMP-1含量低于壮骨关节丸组(P=0.000);2组的MMP-3、MMP-9、MMP-13和COX-2含量比较,组间差异均无统计学意义(P=0.094,P=0.497,P=0.380,P=0.220)。结论:独活寄生汤含药血清可抑制IL-1β诱导的退变关节软骨细胞中MMP-1、MMP-3、MMP-9、MMP-13和COX-2的表达,其抑制MMP-1表达的作用优于壮骨关节丸含药血清。

三氧化二砷对类风湿关节炎滑膜细胞增殖及分泌作用的影响

目的观察三氧化二砷(As2O3)对体外培养的RA滑膜成纤维细胞的增殖及分泌功能的影响。方法体外培养RA滑膜成纤维细胞,用含As2O3浓度分别为0、0.5、2、5μmol/L的培养液分别作用于培养细胞,24 h后检测上清液TNF-α和IL-1的水平;采用TUNEL法和流式细胞仪测定细胞增殖情况。结果As2O3作用组TNF-α及IL-1水平均较对照组降低(P<0.05),随浓度梯度的增加作用增强。TUNEL法检测细胞增殖,As2O3作用第3天后各实验组均明显低于对照组(P<0.05),且其作用呈剂量依赖性。滑膜细胞细胞周期在As2O3作用组均与对照组有明显差异,其变化亦呈剂量依赖性。结论As2O3可促进RA滑膜B型细胞增殖,抑制TNF-α及IL-1的表达。

全反式维甲酸对转化生长因子诱导的肾小球系膜细胞环氧化酶2表达的影响

目的:研究全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)刺激系膜细胞环氧化酶2(COX-2)及Smad3,Smad7蛋白表达的影响,探讨ATRA在TGF-β/Smad信号通路中对系膜细胞表达COX-2的影响作用。方法:取培养第4代的大鼠肾小球系膜细胞分组:(1)对照组;(2)TGF-β刺激组(5、10ng/ml);(3)TGF-β+NS398[COX-2抑制剂组(10μmol/LNS398+10ng/mlTGF-β)];(4)TGF-β+Staurosporine(Smad抑制剂)组(5nmol/ml Staurosporine+10ng/mlTGF-β);(5)药物组:ATRA(10-3、10-6、10-9mol/L)组,在不同的作用时间(4h,12h,24h),WesternBlot印迹法测定各组COX-2、Smad3、Smad7蛋白的表达变化。结果:(1)在外源性TGF-β刺激下,COX-2、Smad3、Smad7蛋白的表达明显增加,各组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)加入COX-2抑制剂NS-398和Smad抑制剂Staurosporine后,COX-2、Smad3、Smad7表达均减少,与TGF-β组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)ATRA各浓度组和TGF-β组比较COX-2、Smad3、Smad7蛋白的表达明显减少(P<0.05),呈时间和浓度依赖性。(4)COX-2蛋白的表达与Smad3、Smad7蛋白的表达均呈显著正相关(r=0.978,r=0.942,P<0.05)。结论:ATRA可能通过TGF-β/Smad信号通路抑制系膜细胞COX-2的表达,显示其具有良好的抗纤维化和抗细胞增殖作用。

三氧化二砷对类风湿关节炎滑膜细胞凋亡的影响——附18例报告

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜细胞凋亡的影响。方法:对18份RA滑膜组织进行原代培养,采用四甲基偶氮唑盐法检测加入0μmol/L、0.10μmol/L、0.40μmol/L、0.80μmol/L As2O3对RA滑膜细胞活力影响,用流式细胞仪分析加入不同浓度As2O3后早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞、活细胞、坏死细胞所占的比例,观察加入不同浓度As2O3后RA滑膜细胞的半胱氨酸蛋白酶-3的活性变化。结果:与同一时段无加入As2O3的RA滑膜细胞比较,加入0.10μmol/L、0.40μmol/L、0.80μmol/L As2O3的RA滑膜细胞活力明显下降(均为P<0.05)。RA滑膜细胞中的早期凋亡细胞及坏死细胞所占比例随As2O3浓度升高而增高,活细胞所占比例随As2O3浓度升高而降低(均为P<0.05),其中,As2O3浓度为0.80μmol/L组的早期凋亡细胞及坏死细胞所占比例最高、活细胞所占比例最低(均为P<0.01)。半胱氨酸蛋白酶-3活性随As2O3浓度增加而增加(均为P<0.05)。结论:As2O3可抑制RA滑膜细胞的活力,在达到一定的药物浓度后可对滑膜细胞产生致死效应。As2O3所诱导滑膜细胞凋亡可能与半胱氨酸蛋白酶-3的活性增高有关。

洛沙坦对人类正常系膜细胞及糖尿病肾病大鼠肾脏组织环氧化酶2的影响(英文)

目的:观察高糖及洛沙坦对正常人类系膜细胞(NHMCs)增殖及环氧化酶表达的影响,及洛沙坦对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏环氧化酶(COX2)及转化生长因子β1(TGF-β1)的影响。方法:体外实验采用高糖培养NHMCs,分二组(洛沙坦组,非干预组),用WST-1法检测NHMCs增殖,Western印迹和RT-PCR检测COX2表达。体内实验采用链脲菌素方法制备DN大鼠模型,洛沙坦干预4周后,分别检测大鼠肾脏病理改变、尿血栓素B2(TXB2)、24 h尿蛋白定量,同时采用免疫组织化学及RT-PCR方法检测大鼠肾脏COX2及TGF-β1表达。结果:洛沙坦呈剂量依赖性地抑制高糖引起的NHMCs增殖,同时还能减少高糖及低糖引起的NHMCs的COX2高表达;体内实验中,DN大鼠组肾体质量指数、尿TXB2和24 h尿蛋白均较正常对照组明显升高,洛沙坦能减少DN大鼠肾体质量指数、尿TXB2、24小时尿蛋白,同时显著抑制肾组织COX2和TGF-β1表达。结论:洛沙坦能减少NHMCs的COX2表达,在高糖条件下更为明显。洛沙坦能抑制DN大鼠肾组织COX2和TGF-β1表达,从而改善DN肾损害。

三氧化二砷诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡作用的研究

目的观察三氧化二砷(ATO)对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)凋亡的作用。方法将HFLS-RA分为单纯培养基空白对照组和0.5、2、8μmol/LATO实验组。ATO作用72h后,电镜下观察细胞的病理改变,采用四唑氮法(MTT)检测ATO对HFLS-RA生长的影响。结果ATO可以诱导HFLS-RA的凋亡,ATO呈现时间和剂量依赖性抑制HFLS-RA生长的作用。结论ATO可以抑制HFLS-RA的生长,促进HFLS-RA的凋亡。

三氧化二砷诱导人类风湿性关节炎滑膜细胞凋亡研究

目的:研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对体外培养的人类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜细胞凋亡诱导作用。方法:酶消化法进行人关节滑膜细胞原代培养,MTT法研究As2O3对RA滑膜细胞活力影响;用光镜、电镜、DNA凝胶电泳等方法检测As2O3诱导RA滑膜细胞凋亡。结果:成功体外培养人关节滑膜细胞。MTT法显示As2O3可抑制RA滑膜细胞活力;光镜、电镜下发现As2O3作用于RA滑膜细胞可出现凋亡表现;DNA凝胶电泳显示有凋亡梯带出现。结论:As2O3可以诱导RA滑膜细胞凋亡。

RAP1B对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞生物学行为的影响研究

目的探讨RAP1B对体外培养的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-1ike synoviocyte,FLS)增殖、迁移以及炎症因子分泌能力的影响。方法通过构建RAP1B过表达及干扰表达的慢病毒载体,转染至人RA成纤维样滑膜细胞(MH7A),分别采用CCK8法、划痕实验、Transwell-迁移实验及ELISA法,对MH7A增殖、迁移及炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8)分泌能力进行检测。结果RAP1B表达上调后,MH7A增殖、迁移及炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8)分泌能力均明显增强(均P<0.01);RAP1B表达下调后,MH7A增殖、迁移及炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8)分泌能力均明显减弱(均P<0.05)。结论RAP1B具有促进RA-FLS增殖、迁移及炎症因子分泌的能力。