卡介苗在关节炎模型小鼠诱导中的作用

目的:探讨在牛Ⅱ型胶原诱导性关节炎模型(Collagen-induced arthritis,CIA)小鼠的诱导过程中,弗氏完全佐剂(FCA)中的卡介苗(BCG)浓度和CIA小鼠关节炎严重程度的关系。方法:将牛Ⅱ型胶原蛋白溶液与含不同BCG的FCA等体积混合乳化,在小鼠尾根部注射进行免疫。免疫后观察小鼠的相关指标包括体重、发病率、血清TNF-α、关节炎指数及小鼠关节和脾脏的病理变化。结果:与1 mg/ml卡介苗组相比,4 mg/ml卡介苗组诱导的CIA小鼠发病早,关节炎指数、关节和脾脏病理评分升高及小鼠体重下降更明显,血清TGF-α明显升高,差异有统计学意义。结论:在进行CIA小鼠诱导时,BCG浓度和CIA小鼠关节炎严重程度呈正相关,实验中可以根据对动物的要求,选择含不同BCG的佐剂来诱导CIA小鼠。

补骨脂素对类风湿性关节炎小鼠模型的免疫调节作用

目的探讨补骨脂素对II型胶原诱导的小鼠类风湿性关节炎的作用并初步探讨其作用的分子机制。方法选用DBA/1J小鼠,利用牛II型胶原诱导构建类风湿性关节炎小鼠模型。将造模成功的小鼠随机分为补骨脂素(PSO)、甲氨蝶呤(MTX)和模型对照(vehicle)三组,灌胃给药,观察关节改变情况并评分。称重并计算脾指数;流式细胞术测定脾淋巴细胞中Th1、Th2细胞数;ELISA检测血清相关炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的表达量变化。结果与vehicle组相比,PSO组足踝肿胀、活动受限程度明显减轻;PSO组脾指数显著低于模型对照组,Th1淋巴细胞所占比例亦较Vehicle组显著下降,Th2淋巴细胞比例差异无显著性;ELISA结果显示PSO组血清TNF-α、IL-6和IL-1β显著低于Vehicle组。各项结果 PSO组与MTX组无统计学差别。结论补骨脂素通过调节Th1/Th2细胞平衡及抑制TNF-α、IL-6和IL-1β起到免疫调节作用,从而缓解RA进程。

链脲佐菌素诱导的糖尿病模型小鼠对炎症性关节炎的影响

目的探讨链脲佐菌素(STZ)诱导的Ⅰ型糖尿病模型对小鼠炎症性关节炎的影响。方法将16只6周龄SPF级雄性C57BL/6J小鼠随机分成两组,每组8只。糖尿病组小鼠采用于6周龄时一次性腹腔注射链脲佐菌素150 mg/kg建立小鼠Ⅰ型糖尿病模型;对照组注射同等体积柠檬酸盐缓冲液。在7周龄时对两组小鼠均于双侧后足足垫注射牛Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂的完全乳化剂,每只足0.5 mL建立小鼠关节炎模型。采用电子游标卡尺测量小鼠双足足趾厚度。采用实时荧光定量PCR检测两组小鼠踝关节OPG、RANKL基因mRNA的表达水平。采用western blot检测踝关节OPG、RANKL的蛋白表达水平。结果与CON组比较,STZ组小鼠空腹血糖升高(P<0.001),成功建立糖尿病模型。CIA模型建立后,小鼠双侧后足均出现明显红、肿和关节运动障碍,且CON+CIA组小鼠关节炎发展较快,在第2、3周时差异有统计学意义(P<0.05)。RT-qPCR和Western blot结果显示,与CON+CIA组相比,STZ+CIA组小鼠关节组织中OPG、RANKL表达明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。且RANKL/OPG比值>1,表明骨吸收过程显著高于骨生成过程。结论在胶原诱导炎症性关节炎模型小鼠中,虽然非糖尿病小鼠的关节炎发展更快、肿胀程度更严重,而糖尿病小鼠关节炎持续时间更长,且骨吸收过程更严重。

LTB4和BLT1在类风湿关节炎中的作用

类风湿关节炎是一种慢性的、系统性的、以关节滑膜炎为主要特征的自身免疫疾病,发病机制尚未完全明确,是临床难以治愈的疾病之一。白三烯B4(LTB4)是一种炎症脂质介体,其受体有两类分别为BLT1和BLT2。LTB4与BLT1亲和力较高,研究表明LTB4和BLT1在小鼠类风湿关节炎发病机制中具有非常关键的作用,因此探索LTB4-BLT1途径在关节炎发病中的作用及机制,可为关节炎的临床治疗提供新的方向,本文对LTB4和BLT1在类风湿关节炎的作用进行综述。

断藤益母汤对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞MEKK2及CIA小鼠关节炎的影响

目的:为了研究断藤益母汤(DTYMD)在类风湿关节炎中对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)上游激酶的调控作用,阐明DTYMD抗炎的分子机制。方法:培养成纤维样滑膜细胞,将细胞分为空白组,模型组,DTYMD高、中、低质量浓度组(1000,800,600 mg·L^-1),甲氨蝶呤(MTX)组(20μmol·L^-1)组,采用蛋白免疫印迹法(Western blot),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)对丝分裂原活化蛋白激酶激酶激酶2(MEKK2)的蛋白和mRNA表达进行分析。将42只雄性DBA/1J小鼠随机分为6组,每组7只,分别为正常组,模型组,MTX组(2 mg·kg-1),DTYMD低、中、高剂量组(6.25,12.5,25 mg·kg-1)。除正常组外,其他5组均采用二次免疫法构建胶原诱导型关节炎(CIA)模型。给药结束后,取小鼠后肢踝关节行苏木素-伊红(HE)染色并进行关节病理评分。结果:与模型组比较,DTYMD以浓度依赖方式抑制成纤维样滑膜细胞活性(P<0.01);与空白组比较,模型组细胞增殖率升高(P<0.01)。与模型组比较,DTYMD高、中质量浓度组降低MEKK2蛋白及mRNA的表达(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,DTYMD不同剂量组均降低细胞基质金属蛋白酶-1(MMP-1),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)的表达(P<0.01);与空白组比较,模型组MMP-1,IL-6,TNF-α表达明显上升(P<0.05,P<0.01)。在动物实验中,与模型组比较,DTYMD高、中剂量组可以降低CIA小鼠关节肿胀度(P<0.05,P<0.01);与正常组比较,模型组小鼠二次免疫后关节明显肿胀(P<0.05)。在CIA小鼠踝关节HE染色中,与空白组比较,模型组小鼠病理学评分升高(P<0.01);与模型组比较,DTYMD高、中剂量小鼠关节病理评分明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论:DTYMD可能通过下调MEKK2对细胞因子IL-6,TNF-α,MMP-1负性调控,从而缓解类风湿关节炎的炎症反应。