神经保护药物对脑缺血致神经细胞兴奋性中毒作用机制的研究

脑卒中和神经退化性疾病的神经兴奋性中毒是由细胞外谷氨酸盐水平增加所致,可导致钙离子超载和线粒体功能障碍,线粒体缺失可以导致能量供应的缺失或不足以及生成高浓度的氧化物,这些现象是通过细胞坏死和凋亡机制导致细胞死亡的关键因素。

突触后致密物蛋白质95基因沉默及对神经病理性疼痛大鼠疼痛行为的干预

目的评估小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对突触后致密物蛋白质95(postsynaptic density protein95,PSD-95)基因的沉默效率及PSD-95基因沉默对谷氨酸诱导的神经细胞毒性与信号转导的影响,观察用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默大鼠脊髓PSD-95基因治疗神经病理性疼痛的效果。方法用神经母细胞瘤/大鼠神经胶质细胞瘤杂交瘤细胞(NG108-15细胞)筛选大鼠PSD-95基因特异的siRNA,并用谷氨酸刺激PSD-95基因沉默的NG108-15细胞,检测细胞生长活力与信号通路蛋白质表达与磷酸化的改变。建立大鼠神经病理性疼痛的坐骨神经慢性压迫(chronic constrictioni njury,CCI)模型,预防性及治疗性鞘内给予PSD-95siRNA,留取脊髓标本,实时定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)分析PSD-95 mRNA表达水平,并测定大鼠后足机械痛阈及热痛阈的变化。结果序列特异性最高的siRNA在最佳转染条件下使PSD-95基因表达水平下降91.5%;PSD-95基因沉默既可增强神经细胞对谷氨酸毒性的耐受能力,又可抑制Ca2+/钙调蛋白依赖的蛋白质激酶IIα(CaMKIIα)异构型磷酸化。正常大鼠鞘内注射PSD-95siRNA可降低大鼠脊髓背角PSD-95mRNA的表达水平38%(P<0.05),但对痛阈无显著影响;CCI模型大鼠鞘内注射PSD-95 siRNA可明显缓解神经病理性疼痛。结论 PSD-95基因在神经病理性疼痛的发生中起重要作用。鞘内注射PSD-95siRNA可以显著缓解CCI模型大鼠机械性和热痛觉过敏,PSD-95 siRNA可能成为有效控制神经病理性疼痛的基因治疗方法。

胰岛素增加培养的星形胶质细胞中谷氨酸转运体GLT1的表达

目的研究胰岛素对GLT1表达的影响。方法对原代星形胶质细胞培养后加入胰岛素刺激,再采用免疫印迹法、细胞表面生物素酰化、实时定量PCR、免疫染色、电生理学等方法,检测GLT1的表达变化。结果研究结果发现用胰岛素短期刺激会导致总的和细胞膜表面的GLT1表达均增加。胰岛素处理后会增加Akt磷酸化,而Akt磷酸化的抑制剂triciribine具有明显抑制胰岛素的作用。研究还发现GLT1表达上调与KBBP表达增加和GLT1mRNA水平增加相关。结论胰岛素会调控星形胶质细胞GLT1的表达,这可能在中枢神经系统损伤后的星形胶质细胞反应中起着重要作用。

红细胞生成素及其衍生物治疗脊髓损伤的研究进展

脊髓损伤（spinal cord injury，SCI）后，除创伤造成的直接损伤外，脊髓局部还将发生一系列继发性病理改变．如血管病变、缺血再灌注、谷氨酸兴奋性中毒、离子稳态失衡、细胞氧化损伤、严重的炎症应答及细胞凋亡等，而且造成的损害超过原发性损伤．最终会导致脊髓的进行性变性。针对以上直接损伤及继发性病理变化目前尚没有很好的治疗方案，这是脊柱外科以及临床康复亟待解决的难题。

氯胺酮对不同性质脑损伤影响的实验研究

目的 观察氯胺酮对细胞能量代谢障碍、兴奋性氨基酸中毒和氧自由基损伤三种不同性质脑损伤的作用。方法 制备大鼠皮层和海马脑片 ,培养胎鼠皮层神经元 ,建立缺氧缺糖 (OGD)、谷氨酸和过氧化氢 (H2 O2 )三类损伤模型 ,采用脑片TTC染色和神经元MTT比色法 ,酶标仪测定4 90nm处吸光度 (A值 ) ,定量考察损伤程度和氯胺酮的作用。结果 三类损伤能够明显降低皮层、海马脑片TTC染色和神经元MTT比色吸光度A值 (P <0 0 5 )。氯胺酮对正常孵育脑片和培养神经元染色无影响 ,明显减轻OGD与谷氨酸损伤脑片和神经元所致A值降低 (P <0 0 5 ) ,对H2 O2 损伤所致A值降低无作用。结论 氯胺酮保护细胞能量代谢障碍和兴奋性氨基酸中毒所致脑损伤 ,对氧自由基损伤无保护作用。

运动神经元病的谷氨酸中毒学说

肌萎缩侧索硬化 (AmyotrophicLateralSclerosis,ALS)是选择性侵犯上下运动神经元的神经系统变性疾病 ,病因不明 ,目前尚无有效治疗。主要的发病机制假说之一为谷氨酸中毒学说。目前已经证实肌萎缩侧索硬化存在谷氨酸代谢、摄取异常 ,认为其选择性运动神经元损伤可能是通过Ca2 + -AMPA/Kanait受体介导的兴奋性中毒发生的 。

低压低氧暴露对大鼠空间记忆及海马谷氨酸受体表达的影响

目的:观察低压低氧暴露对成年大鼠空间记忆及谷氨酸递质系统受体(AMPA,NMDA)的影响。方法:SD大鼠随机分成两组,对照组和低氧组(n=10),经过5天的Moriis水迷宫训练,分别接受常压和低压低氧暴露7天,再通过Morris水迷宫观察暴露后的空间记忆,western blot检测GluR1,NMDA受体表达情况。结果:水迷宫结果显示低压低氧暴露后,平均逃脱潜伏期增长,平台搜索能力下降。Western blot结果显示磷酸化的GLUR1受体和NMDA受体水平升高。结论:低压低氧暴露可诱导大鼠的空间记忆损伤,其机制可能与谷氨酸递质系统紊乱造成的兴奋性中毒有关。

激肽释放酶-激肽系统在创伤性脑损伤治疗康复中的研究进展

创伤性脑损伤（traumatic brain injury，TBI）大多发生于青壮年，通常是由交通事故或运动损伤造成的外部脑损伤，是青壮年致死和致残的主要原因。所有外伤中约有20％是TBI，治疗TBI相关花费较高，但是治疗方案却是少之又少，目前最有效的措施就是预防。TBI后数分钟内，细胞内外离子梯度失衡，同时机体产生毒性自由基增多，导致细胞毒性水肿，发生兴奋性中毒。