外源性谷氨酸致新生鼠脑兴奋毒性神经变性的形态学研究

目的 :探讨外源性谷氨酸对新生鼠脑细胞的兴奋毒性作用。方法 :新生 7天SD大鼠 ,背部皮下注射单钠谷氨酸 (MSG) 2mg/ g ,在 2h、6～ 8h、2 4～ 2 8h分别光镜和电镜观察脑细胞的形态改变。结果 :光镜下 ,2h未见明显异常 ,此后可见多处脑细胞肿胀 ,进而细胞固缩。电镜着重观察海马神经元 ,变化一为神经元胞体和树突巨大膨胀 ,伴随着内质网膜的空泡化及线粒体由最早期的浓缩到巨大膨胀 ,轴突基本正常 ,核染色质由簇状集聚于核膜下呈钟面排列到向中央积聚成轮廓不规则的团块 ;变化二为胞浆和胞核均浓缩 ,胞奖中有大小不等的空泡。结论 :外源性谷氨酸能引起未成熟脑细胞的死亡 ,为某些食品添加剂对儿童脑细胞的影响的相关研究提供一定的形态学基础。

人参皂甙对兴奋毒损伤的保护作用研究

目的 探讨人参皂甙对兴奋毒损伤神经细胞的保护作用。方法 应用在体外建立的谷氨酸对原代培养海马神经细胞兴奋毒的损伤模型和Fura - 2 /AM检测海马神经细胞胞内游离Ca2 + 浓度的方法 ,来探讨人参皂甙对兴奋毒损伤的保护作用及其作用机制。结果 人参皂甙可明显降低谷氨酸引起神经细胞乳酸脱氢酶泄漏率的升高 (P <0 .0 1) ,可以选择性降低大剂量谷氨酸引起的神经细胞胞内Ca2 + 浓度异常升高 (P <0 .0 1)。结论 人参皂甙可通过降低神经细胞胞内Ca2 + 浓度来对抗谷氨酸的神经性兴奋毒作用 ,进而保护神经细胞。

兴奋毒作用下皮层神经细胞Ca^(2+)变化机制

目的 检测谷氨酸兴奋毒损伤时 ,在胞外有 Ca2 +或无 Ca2 + ,或有尼莫地平和 Ca2 +条件下 ,神经细胞内〔Ca2 +〕i的变化。方法 用Fura- 2 / AM体外检测新生大鼠皮层神经细胞胞内游离钙离子浓度的方法。结果 发现谷氨酸兴奋毒可使皮层神经细胞〔Ca2 + 〕i上升并有剂量依赖性 ,胞外无 Ca2 +或加入尼莫地平时神经细胞〔Ca2 +〕i虽也上升 ,但幅度降低 ;三种条件下神经细胞在兴奋毒作用下〔Ca2 +〕i变化各不相同。结论 表明谷氨酸活化神经细胞膜上受体 ,使胞内钙库动员和细胞膜 Ca2 +通道开放 ,导致〔Ca2 +〕i在短时间内总体表现为持续上升。存在兴奋毒损伤过程中有磷脂酶 A2 活化过度参与的信使基础。

桂利嗪对兴奋毒损伤的海马神经元保护作用及其机制的实验研究

目的研究桂利嗪(Cin)对兴奋毒喹啉酸(QA)损伤的海马神经元是否有保护作用,并研究其相关机制。方法采用海马神经元原代培养,检测培养神经元的存活率、乳酸脱氧酶(LDH)活性,并观察其病理形态学改变,利用海马神经元损伤细胞模型,通过检测各组神经元的丙二醛(MDA)含量、一氧化氮合酶(NOS)活性及细胞内游离Ca2+浓度来探讨Cin对QA损伤海马神经元保护作用及其相关作用因素。结果Cin可提高QA损伤的原代培养海马神经元的脑细胞存活率,减少神经元LDH释放,并能减轻神经元的病理形态学损伤,可降低QA损伤海马神经元的MDA含量、NOS活性及胞内游离Ca2+浓度。结论Cin对QA所致的海马神经元损伤有明显的保护作用,其保护作用可能与下列因素有关:①降低细胞内Ca2+浓度;②减少自由基生成,促进自由基的清除;③降低NOS的活性,减少NO的生成。

傅里叶变换红外光谱分析NMDA受体单克隆抗体抗兴奋毒损伤机理

人N 甲基 D 门冬氨酸受体 (NMDAR ,NR)单克隆抗体MABN1具有明确的抗兴奋毒保护作用 ,但其机制不明 .以MABN1和MK 80 1分别预处理海马细胞 ,拮抗谷氨酸兴奋毒损伤作用 ,采用傅里叶变换红外光谱(FTIR)技术 ,对不同处理后的海马细胞红外光谱特性进行比较 .将去卷积的酰胺Ⅰ带进行曲线拟合后发现 ,MABN1组与MK 80 1组的蛋白质二级结构有明显不同 。

兴奋毒损伤海马神经细胞机制的研究

目的 探讨谷氨酸 (Glutamicacid ,Glu)的神经性兴奋毒损伤作用机制。方法 在体外快速剥离新生大鼠 (0 1天 )双侧海马 ,制成海马神经细胞悬液 ,用Fura 2 /AM负载 ,建立了Fura 2 /AM检测海马神经细胞胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 + ]i)的方法 ,并检测Glu兴奋毒对海马神经细胞 [Ca2 + ]i的影响。结果 Fura 2单细胞检测表明 ,静息状态下海马神经细胞 [Ca2 + ]i=2 5 2 .6± 36 .1(nmol/L) ,Glu可使海马神经细胞 [Ca2 + ]i明显升高。大剂量Glu可使 [Ca2 + ]i升高几倍。结论 Glu导致神经细胞损伤的原因与细胞 [Ca2 + ]i超载有关。

桂利嗪对兴奋毒致痴呆大鼠模型海马单胺类神经递质的影响

目的研究桂利嗪(Cin)对兴奋毒诱导的阿尔茨海默病(AD)模型学习记忆能力的改善及其对海马单胺类神经递质的影响。方法应用微量注射方法,将喹啉酸(QA)注入大鼠双侧海马CA1区,建立大鼠AD学习记忆障碍模型,观察Cin对实验大鼠行为学、病理组织形态学和神经生化学相关指标的影响。结果 Cin可降低模型大鼠Morris水迷宫实验中其寻找平台平均潜伏期及穿梭箱实验中回避潜伏期,并明显减轻其脑组织病理损伤;可剂量依赖性地增加模型大鼠海马中酪氨酸羟化酶(TH)、色氨酸羟化酶(TPH)的阳性细胞的数量,而去甲肾上腺素(NA)、多巴胺(DA)和5-羟色胺(5-HT)含量也有明显的增加。结论 Cin能通过增加单胺类神经递质的含量来改善AD大鼠学习记忆能力。

谷氨酸兴奋毒与噪声性耳聋

谷氨酸是中枢神经系统重要的神经递质。在缺血或低氧时,谷氨酸过量释放,导致神经元死亡,称为"兴奋毒"。本文从谷氨酸的正常代谢、谷氨酸受体的亚型、低氧或缺血时谷氨酸过度释放的可能机制、兴奋毒可能的分子机制、如何预防噪声性耳聋及其应用前景方面综述了国内外谷氨酸的相关性研究的进展。

兴奋毒损伤尾核致认知障碍的动物模型

用微量兴奋毒———海人酸损伤大鼠尾核后 ,自发活动及一般状况不受影响 ,其被动回避反应的短时和长时记忆下降 ,主动回避反应的学习能力差 ,空间转换作业能力也下降

NMDA对新生大鼠皮层神经元的兴奋毒作用

目的:建立NMDA诱导原代培养皮层神经元兴奋毒损伤模型,探讨NMDA对NMDA受体过度活化诱导兴奋性神经毒的可能途径。方法:原代培养新生大鼠大脑皮层神经元,通过倒置显微镜形态学观察、细胞活力检测(MTT及LDH释放的检测)及胞内Ca2+的动态测定,探索NMDA诱导毒性作用的适当浓度及时间。通过对ROS、NO检测,分析NMDA诱导毒性作用于线粒体的损伤情况。结果:NMDA(100μmol/L/2 h)引起皮层神经元形态学改变,且引起神经元细胞活力时间和浓度依赖性的下降,由同时伴随LDH释放增加(P<0.05),ROS和NO的生成量明显增加(P<0.05),皮层神经元内Ca2+的快速升高,并维持在高水平。结论:NMDA诱发皮层神经元明显的细胞毒性作用,提示NMDA过度活化NMDA受体后通过神经元膜内Ca2+超载造成ROS和NO的生成量增加,导致皮层神经元产生毒性损伤。

谷氨酸对原代培养海马神经细胞兴奋毒作用的研究

为更清楚地了解药物对神经元的损伤和保护作用，在体外对新生大鼠（０～１ｄ）海马神经细胞进行原代培养，建立了谷氨酸对原代培养海马神经细胞兴奋性神经毒损伤模型。通过检测神经细胞乳酸脱氢酶泄漏率和在相差显微镜下对神经细胞形态变化的观察，发现只有发育成熟的神经元对谷氨酸兴奋毒损伤最敏感，神经元的兴奋毒损伤对谷氨酸在一定范围内有剂量依赖性或接触时间依赖性关系，提示谷氨酸通过与其受体结合造成神经元兴奋毒损伤。

自由基介导兴奋性氨基酸对培养皮层神经细胞毒性的研究

本文在体外对新生大鼠（０～１ｄ）大脑皮层神经细胞进行原代培养的基础上，建立谷氨酸（Ｇｌｕ）对培养的皮层神经细胞兴奋毒损伤模型。通过检测乳酸脱氢酶释出率和形态学观察，证实了Ｇｌｕ对神经细胞存在兴奋毒作用。通过测定不同条件下Ｇｌｕ兴奋毒对培养的神经细胞造成损伤时细胞膜脂质过氧化物（ＬＰＯ）浓度，发现膜ＬＰＯ浓度与Ｇｌｕ剂量及作用时间紧密相关，表明Ｇｌｕ对神经细胞兴奋毒作用有自由基产生并介导了神经细胞的损伤。

Egb761抑制谷氨酸受体拮抗大鼠海马神经元兴奋毒损伤

目的观察银杏叶提取物Egb761对海马神经元谷氨酸(Glu)兴奋毒性损伤的保护作用及其机制。方法采用DAPI染色和TUNEL法检测Glu诱导的海马神经元细胞凋亡及Egb761的保护作用,采用全细胞膜片钳技术记录Egb761对大鼠海马神经元Glu受体电流的抑制作用。结果 Egb761拮抗Glu孵育诱导的海马神经元凋亡样死亡,其分子机制可能是抑制N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)型和海人酸(KA)型Glu受体。结论 银杏叶提取物Egb761通过抑制Glu离子通道而拮抗Glu对海马神经元的兴奋毒作用。

红藻氨酸诱导原代培养皮质神经元兴奋毒中p21变化及机制的研究

目的:探讨p21在红藻氨酸诱导的原代培养皮质神经元兴奋毒中的变化及可能机制。方法:原代培养大鼠皮质神经元经红藻氨酸(KA)处理24h后,激光共聚焦显微镜透射光下观察细胞损伤,应用Western blotting方法检测p21与p53蛋白表达的变化,用染色质免疫共沉淀(ChIP)-聚合酶链反应(PCR)方法检测p53与p21基因启动子上p53反应元件1结合情况。结果:KA处理后神经元明显损伤,部分细胞胞体缩小、变圆,突起变短、减少或消失,p21与p53蛋白表达上调,并且p53与p21基因启动子上的p53反应元件1结合增加。结论:在KA诱导的原代培养皮质神经元兴奋毒作用中p21蛋白表达上调,而p53直接参与了p21的激活。

一氧化氮在兴奋毒损伤尾核所致记忆损害中的作用

为探明NO在辨奋毒性神经元损伤中作用。以海人酸(KA)损伤尾棱致学习记忆缺陷的动物模型中观察致兴奋毒损伤后．一氧化氮合酶活性呈现一个时间变化过程．6～8h略有降低；第三天显著升高到47.75%(P<0．05)；第五天仍轻度升高．但与对照组无差异。当早期多次应用L-硝基精氨酸甲酯，大鼠被动回避反应．电击后5min和24h．下台潜伏期明显延长；在学习过程中所犯错误明显减少，选标率增高。本实验结果表明过量生成NO舟导了KA致尾枝神经元的损伤作用井致学习记忆缺陷。早期多攻应用NOS抑制剂能改善KA损伤尾枋所致学习记忆缺陷。

Bax、NOS在NMDA诱导的兴奋性神经毒中的表达变化

目的探讨一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)及Bax在N-甲基-D-天(门)冬氨酸(N-Methyl-D-Asparate,NMDA)诱导的兴奋性神经毒中的作用及其可能的作用机制。方法原代培养SD新生大鼠皮层神经元,利用免疫荧光方法进行细胞纯度鉴定。神经元细胞随机分为正常组、NMDA组、NG-Nitro-L-arginine Methyl Este(r L-NAME)组,分别采用NO浓度测定、ELISA及Weastern blotting检测各组细胞中NO浓度、NOS的表达及Bax的表达。结果免疫荧光大多数细胞为NSE阳性细胞,L-NAME组中NO浓度、NOS及Bax的表达均高于正常组而低于NMDA组。结论 NO毒性在NMDA诱导的神经细胞凋亡中起重要的作用,其可能是通过上调Bax的表达发挥作用。

坏死性凋亡参与NMDA诱导大鼠皮层神经元的兴奋性神经毒作用

目的观察NMDA诱导的兴奋性神经毒中是否存在坏死性凋亡。方法利用Nec-1作为工具药,通过检测细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)释放及calcein-AM染色,观察NMDA的毒性作用,Nec-1对NMDA诱导的细胞损伤的抑制作用。结果 Nec-1(100μmol/L)抑制NMDA引起的细胞活力的降低,使其增加26%(P<0.01);抑制NMDA引起的活细胞数的减少,使活细胞数增加23%(P<0.01);抑制NMDA引起的LDH释放的增加,使LDH释放减少28%(P<0.01)。结论坏死性凋亡参与NMDA诱导的兴奋性神经毒。

兴奋性氨基酸与青光眼

近年来随着对青光眼性视神经病变机制的深入研究,已证实兴奋性氨基酸与青光眼视网膜神经节细胞凋亡密切相关。21世纪青光眼的治疗模式正从传统的单纯降眼压向降眼压的同时从其他途径进一步加强神经保护转变,基础实验及部分临床研究证实干扰兴奋性氨基酸产生神经毒性的各环节均对神经元有保护作用,由此可以推测通过对兴奋性氨基酸的研究有望实现青光眼治疗史上的重大突破。

辩证分析兴奋性氨基酸对神经细胞的双重作用

兴奋性氨基酸（ＥＡＡｓ） 广泛分布于中枢神经系统，参与多种生理过程包括学习、记忆和伤害感受等。然而，ＥＡＡｓ 受体的过度兴奋却可引发一系列细胞事件，最终导致神经元的损伤与死亡。许多神经退行性疾病如早老性痴呆、癫痫和肌侧索硬化症等都与ＥＡＡｓ 的兴奋毒作用有关。目前的研究表明，由ＥＡＡｓ