16S rRNA基因序列分析在非典型菌株鉴定中的应用

目的:建立16S rRNA基因序列分析鉴定细菌的方法,评价其对常规方法不能鉴定菌株的鉴定效果。方法:选择细菌的16S rRNA基因为靶序列,在两端保守区设计引物,对三株生化、形态不典型菌株提取模板进行PCR扩增,PCR产物纯化后进行克隆,测序。结果:三株细菌的16S rRNA基因序列与Genbank比较,YC1序列与大肠杆菌相似性>99%,YC2序列与肺炎克雷伯菌相似性>99%,YC3序列与缓症链球菌相似性>98%。结论:16S rRNA基因序列分析的方法可以较好地鉴定常规方法难以鉴定的不典型菌株。

新型A/O/A/O-SBR中DPB的富集及其典型菌株特性研究

为能更好地达到同步除磷脱氮的目的,对反硝化聚磷菌(Den-itrifying Phosphorus Removal Bacteria,DPB)进行了富集培养,并对其中的典型菌株进行了特性研究。以校园生活区污水为研究对象,在温度为25℃,pH值为7.5,乙酸钠为碳源,进水COD为316.5 mg/L的条件下,采用三阶段的污泥驯化,对反硝化聚磷菌种进行了分离纯化,并对富集的典型菌株进行了生理生化试验、吸磷试验、硝酸盐还原产气试验。结果表明,富集培养后的DPB在A/O/A/O-SBR系统(厌氧2 h,好氧1.5 h,缺氧1.5 h,后置曝气0.5 h)中成为优势菌群,系统中COD、NH4+-N、TN、TP的出水质量浓度分别为28.35 mg/L、0.87 mg/L、4.05mg/L和0.37 mg/L。分离鉴定出具有反硝化除磷能力的Z7、Z9两株典型菌株,其吸磷率均在50%左右。经细菌形态观察、生理特性分析及16S rDNA序列测定,鉴定Z7、Z9为缺氧反硝化聚磷菌,与假单胞菌(Pseudomonas)最相似,其同源性均达99.9%。

鸡蛋壳表面典型菌株的分离鉴定及其对全蛋液致腐能力分析

以市售鸡蛋为原料,建立鸡蛋壳表面菌落总数与全蛋液货架期之间的相关性,并采用梯度稀释法和划线纯化法对蛋壳表面典型菌种进行分离纯化。通过形态学特征观察、生理生化实验及16S rRNA分子生物学方法进行菌种鉴定,并将分离得到的典型菌株接种到全蛋液样品中,通过测定全蛋液在4℃贮藏期间典型菌株的生长动力学曲线及样品挥发性盐基氮(total volatile base nitrogen,TVB-N)值、pH值、质构特性和感官特性等,比较5种不同典型菌株对全蛋液样品的致腐能力。结果表明:鸡蛋壳表面微生物污染是影响全蛋液货架期的重要因素(P<0.05),且从鸡蛋壳表面分离纯化得到5株典型菌种,分别为大肠埃希氏菌(Escherichia coli)E、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B、考克氏菌(Kocuria marina)D及2株蜡样芽孢杆菌(B.cereus)A、C。接种菌株的全蛋液样品,4℃贮藏30 h后发生明显的腐败变质,样品的TVB-N值显著高于对照组样品;此外,样品pH值、凝胶硬度、凝胶持水性也显著低于对照组。通过比较样品贮藏品质变化确定腐败能力最强的为蜡样芽孢杆菌属A、C,其次为大肠杆菌E、枯草芽孢杆菌B及考克氏菌D。

布鲁氏菌非典型菌株生长状态的热谱学研究

针对大型水电站经济运行问题，在传统动态规划方法的基础上，提出了一种多重动态规划模型，通过求解模型，获得了在水库入流和水头为定值时的大型水电站各台机组的最佳负荷运行分配方案。实例研究表明，文中提出的模型是可行的，对大型水电站经济运行具有一定的意义，同时也说明，大型水电站的经济运行比常规运行更能取得效益。

疑似食物中毒患者标本一株侵袭性大肠埃希菌O_(29):K?的分离及实验探讨

目的对一株分离于疑似食物中毒腹泻患者的EIEC菌株进行生化特征、血清学及致病侵袭力实验探讨。方法参照GB/T4789.6—2003和卫生防疫细菌检验。结果3份标本分离到的同一血清型EIECO_(29)K?菌株,经全面生化反应,血清学及Sereny试验证实为一株非典型生化特征,丧失侵袭力的EIEC菌株。结论在肠道病原菌的鉴定中,非典型生化特征及丧失侵袭力的EIEC菌株应引起注意。

天津地区临床分离株结核分枝杆菌分子流行病学研究

目的探讨天津地区结核分枝杆菌临床分离株分子流行病学特征。方法连续收集天津市海河医院2005年8月16日～11月25日就诊病人痰培养阳性的结核分枝杆菌100株，采用间隔区寡核苷酸分型（Spoligotyping）和数目可变串联重复序列（VNTR）两种方法进行基因分型，并运用软件对二者的结果进行分析。依据北京分化支的定义。运用多重和实时定量PCR方法将其区分为W菌/典型北京家族菌株和非典型北京菌株，x^2检验分析两种亚群与患者年龄和耐药性之间的联系。结果排除污染菌株，共对96株结核分枝杆菌临床分离株进行两种方法的基因分型，Spoligotyping结果为91．7％为北京基因型（含3株类北京基因型）结核分枝杆菌（88／96）。VNTR分型可将北京基因型分为60种基因型。在北京分化支结核分枝杆菌中，W菌/典型北京家族菌株占93．2％（82／88）。两种北京分化支亚群与患者年龄和耐药性没有显著性统计学差异（P〉0.05）。结论天津地区结核病患者临床分离的结核分枝杆菌中，北京基因型呈现较为明显的优势。VNTR的分辨率明显高于Spoligotyping。北京分化支的两种亚群在天津地区临床结核病患者中均存在流行，但以W菌/典型北京家族菌株为主。

李斯特菌毒力因子及其进化

李斯特菌属包含6个种,毒力各有差异。在细菌耐受外界环境、黏附侵袭及细胞内感染过程中,毒力因子各司其职又相互协作。毒力基因常聚集为毒力岛,其中PrfA依赖型毒力基因簇(LIPI-1)与内化素岛(LIPI-2)是致病种最重要的两个毒力岛。李斯特菌各个种可能来源于同一个携带有完整毒力岛的祖先,在长期进化过程中,通过基因水平转移或重组、整合等事件,演化为目前流行的6个种。噬菌体、转座子、质粒等可能扮演着毒力进化执行者的角色。一些天然非典型菌株是目前研究的热点,如含有LIPI-1的无害李斯特菌和缺失LIPI-1的塞氏李斯特菌,其演化进程可能尚未达到或已超越目前流行的状态,为李斯特菌毒力进化的研究提供了重要线索。

反硝化微生物在污水脱氮中的研究及应用进展

农药和化肥流失、养殖废水、生活污水等均会引起水体的氮污染。反硝化微生物在污染水体脱氮修复中起重要作用,它可将水体中的亚硝酸盐氮或硝酸盐氮还原为N2,排入大气,从而降低污染水体中含氮污染物的浓度,改善水质。因此,对反硝化微生物进行研究有重要的意义。文章从功能特性、典型菌株、反硝化酶系等方面对反硝化微生物及其作用机制进行了论述,对其在污水脱氮方面的研究及应用进展做了较为详细的介绍,最后阐明了目前存在的问题和发展趋势。

天津地区临床分离结核分枝杆菌分型的初步研究

目的探讨天津地区结核分枝杆菌临床分离株分子流行病学特征。方法连续收集天津市海河医院2005年8月16日-11月25日就诊患者痰培养阳性的结核分枝杆菌100株,采用间隔区寡核苷酸分型(sp01igotyping)和多位点可变串联重复序列(VNTR)两种方法进行基因分型,并运用软件对二者的结果进行分析。依据北京分化支的定义,运用多重和实时定量PCR方法将其区分为W菌/典型北京家族菌株和非典型北京菌株,X^2检验分析两种亚群与患者年龄和耐药性之间的联系。结果排除污染菌株,共对96株结核分枝杆菌临床分离株进行两种方法的基因分型,spoligotyping结果91.7%为北京基因型(含3株类北京基因型)结核分枝杆菌(88/96)。VNTR分型可将北京基因型分为60种基因型。在北京分化支结核分枝杆菌中,W菌/典型北京家族菌株占93.2%(82/88)。两种北京分化支亚群与患者年龄及耐药性之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论天津地区结核病患者临床分离的结核分枝杆菌中,北京基因型呈现较为明显的优势。VNTR的分辨率明显高于spoligotyping。北京分化支的两种亚群在天津地区临床结核病患者中均有流行,但以W菌/典型北京家族菌株为主。