基于网络药理学及动物实验验证探究养肝安魂汤治疗肝不藏魂型不寐作用机制

目的采用网络药理学方法探究养肝安魂汤治疗肝不藏魂型不寐的作用机制,并进行动物实验验证。方法通过TCMSP、BATMAN-TCM数据库检索养肝安魂汤的药物活性成分及靶点,借助GeneCards、NCBI、DisGeNET数据库检索肝不藏魂型不寐相关疾病靶点,通过蛋白相互作用(PPI)网络构建及GO、KEGG通路富集分析确定养肝安魂汤治疗肝不藏魂型不寐的信号通路,对主要活性成分与核心靶点进行分子对接。将24只SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药组、西药组,每组6只,采用复合多因素刺激法构建肝不藏魂型不寐模型,给药干预14 d;通过Morris水迷宫实验检测大鼠认知记忆能力,尼氏染色观察下丘脑尼氏体形态及数量,ELISA检测血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,免疫组化检测下丘脑IL-6、TNF-α、Bcl-2、Bax蛋白表达,Western blot检测下丘脑p38 MAPK、p-p38 MAPK、Bcl-2、Bax蛋白相对表达。结果共得到养肝安魂汤活性成分301个及其治疗肝不藏魂型不寐的潜在靶点321个,其中关键靶点92个,筛选得到槲皮素、山柰酚、毛地黄黄酮、黄芩素、乌臼酸、β-谷甾醇等关键活性成分及MAPK、IL6、TNF等核心靶点,关键靶点主要集中在TNF信号通路、MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路、多巴胺能突触、神经活性配体-受体相互作用等信号通路;山柰酚、槲皮素、毛地黄黄酮等与MAPK、TNF、IL6等均具有较好的结合活性及稳定性。动物实验结果显示,与正常组比较,模型组大鼠认知记忆能力下降(P<0.05),尼氏体染色较浅、密度较低、胞体皱缩变形、胞核出现破碎及溶解,血清及下丘脑IL-6、TNF-α升高(P<0.05),下丘脑p-p38 MAPK/p38 MAPK、Bax表达升高(P<0.05),Bcl-2、Bcl-2/Bax表达降低(P<0.05);与模型组比较,中药组、西药组认知记忆能力有所改善,尼氏体数量明显增多,胞核清楚、胞体皱缩及变形情况好转,血清及下丘脑IL-6、TNF-α降低(P<0.05),p-p38 MAPK/p38 MAPK、Bax表达均降低,Bcl-2、Bcl-2/Bax表达均升高(P<0.05)。结论养肝安魂汤可能通过调控MAPK、TNF、IL6、Bcl-2、Bax等核心靶点及干预p38MAPK信号通路,发挥治疗肝不藏魂型不寐作用。