养血安胎方对复发性自然流产小鼠胎盘血管生成与自噬的调控作用研究

目的探讨养血安胎方治疗复发性自然流产(RSA)的分子机制。方法构建肾虚血瘀型RSA小鼠模型,养血安胎方干预后收集小鼠胎盘,苏木素伊红(HE)染色、马松(Masson)染色观察小鼠胎盘病理变化、免疫组化法测定小鼠胎盘增殖细胞核抗原(PCNA)、纤维蛋白原(Fibrinogen)及CD34蛋白的表达,Western blot法测定小鼠胎盘血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮细胞生长因子受体2(p-VEGFR2)、p62,Beclin 1,LC3Ⅰ和LC3Ⅱ的蛋白表达,透射电镜观察小鼠胎盘的超微结构。结果与RSA组比较,RSA+养血安胎组小鼠取材时体重显著增加,胚胎吸收率显著降低;HE染色、Masson染色及PCNA、Fibrinogen蛋白表达显示小鼠胎盘发育状况明显改善,透射电镜结果与p62、Beclin1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的蛋白表达显示小鼠胎盘自噬水平明显降低,CD34、VEGFA和p-VEGFR2蛋白表达显示胎盘血管生成明显增加。结论养血安胎方能够改善RSA小鼠的胎盘发育状况,促进胎盘血管生成,其方式可能与抑制自噬体与溶酶体的融合,从而抑制自噬有关。

养血安胎方调节自噬治疗复发性自然流产小鼠的机制研究

目的探讨养血安胎方调节自噬影响胎盘血管生成进而治疗复发性自然流产(RSA)的机制。方法对妊娠小鼠分别使用雷帕霉素、3-甲基腺嘌呤及养血安胎方进行干预,收集小鼠胎盘,苏木素伊红(HE)染色、马松(Masson)染色观察妊娠小鼠的病理改变,免疫组化法测定增殖细胞核抗原(PCNA)、Fibrinogen及CD34蛋白的表达,Western blot法测定血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮细胞生长因子受体2(p-VEGFR2)、p62、Beclin1、LC3Ⅰ和LC3Ⅱ蛋白的表达,透射电镜观察胎盘的超微结构。结果与正常妊娠组比较,雷帕霉素(Rapa)组小鼠取材时体重明显减轻,胚胎吸收率明显增加,HE染色、Masson染色及PCNA与Fibrinogen蛋白表达显示小鼠胎盘发育变差;透射电镜结果与p62、Beclin1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达显示小鼠胎盘自噬水平明显增加;CD34、VEGFA和p-VEGFR2蛋白表达显示胎盘血管生成异常;与Rapa组比较,Rapa+养血安胎组小鼠取材时体重明显增加,胚胎吸收率明显降低,HE染色、Masson染色及PCNA与Fibrinogen蛋白表达显示小鼠胎盘发育得到明显改善,透射电镜结果与p62、Beclin1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达显示小鼠胎盘自噬水平明显降低,CD34、VEGFA和p-VEGFR2蛋白表达显示胎盘血管生成增加。结论养血安胎方通过抑制自噬体和溶酶体的融合,从而抑制自噬,改善妊娠小鼠的胎盘发育状况,促进胎盘的血管生成,从而降低了流产率。

养血安胎方调节自噬改善复发性自然流产小鼠子宫内膜上皮细胞间质转化及蜕膜化的作用研究

目的探讨养血安胎方调节自噬改善复发性自然流产(RSA)小鼠子宫内膜上皮细胞-间质转化(EMT)及蜕膜化的作用。方法构建肾虚血瘀型RSA小鼠以及正常妊娠小鼠,正常妊娠小鼠分别腹腔注射2 mg·kg^(-1)雷帕霉素(Rapa)溶液或15 mg·kg^(-1)3-甲基腺嘌呤(3-MA)溶液进行干预;另设置相同方法处理的RSA小鼠、Rapa及3-MA干预的小鼠组,并同时灌胃给药浓度为28.08 g·kg^(-1)的养血安胎溶液进行干预,收集小鼠子宫内膜。通过Western blot法测定小鼠子宫内膜EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、N-cadherin和Fibronectin的表达,以及蜕膜化相关蛋白BMP2、HOXA10、PRL和IGFBP1的表达。结果与正常妊娠组比较,RSA组小鼠子宫内膜中E-cadherin的蛋白表达显著增加,Vimentin、N-cadherin、Fibronectin、BMP2、HOXA10、PRL和IGFBP1的蛋白表达均显著降低;Rapa组小鼠子宫内膜中E-cadherin的蛋白表达显著增加,Vimentin、N-cadherin、Fibronectin、BMP2、HOXA10、PRL和IGFBP1的蛋白表达均显著降低;3-MA组小鼠子宫内膜中E-cadherin的蛋白表达显著降低,HOXA10的蛋白表达显著增加。与RSA组比较,RSA+养血安胎组小鼠子宫内膜中E-cadherin的蛋白表达显著降低,Vimentin、N-cadherin、Fibronectin、BMP2、HOXA10、PRL和IGFBP1的蛋白表达均显著增加。与Rapa组比较,Rapa+养血安胎组小鼠子宫内膜中E-cadherin的蛋白表达显著降低,Vimentin、N-cadherin、Fibronectin、BMP2、HOXA10、PRL和IGFBP1的蛋白表达均显著增加。结论养血安胎方能够抑制自噬,从而促进妊娠小鼠子宫内膜的EMT及蜕膜化过程,降低流产率。

益肾养血安胎方对先兆流产模型大鼠流产率及血清P、E_2及β-HCG水平的影响

目的：探讨益肾养血安胎方对先兆流产模型大鼠血清P、E2及β-HCG的影响。方法：将40只已孕Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。在妊娠第1~11天给低剂量组、中剂量组、高剂量组灌服不同剂量益肾养血安胎方。在妊娠第10天除空白对照组外均灌服米非司酮3.75mg/kg建立先兆流产模型。妊娠第12天采血后处死大鼠,观察该药对先兆流产大鼠模型流产、P、E2及β-HCG的影响。结果：各剂量组孕鼠血清孕酮及β-HCG、P、E2、活胎数、死胎数与模型对照组相比较,差异有统计学意义（P〈0.05、P〈0.01）;在各剂量组间,中、高剂量组活胎数、死胎数及P、β-HCG与低剂量组相比较,差异有统计学意义（P〈0.05、P〈0.01）,高剂量组与中剂量组相比较,死胎数差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：益肾养血安胎方能提高米非司酮造模的先兆流产Wistar大鼠的血清孕酮、E2、β-HCG水平,维持妊娠继续,减少流产发生,有保胎的作用。

补肾养血安胎方联合低分子肝素、地屈孕酮对先兆流产合并宫腔血肿患者妊娠结局的影响

目的观察补肾养血安胎方联合低分子肝素、地屈孕酮对先兆流产合并宫腔血肿(IUH)患者妊娠结局的影响。方法采用随机平行对照研究,将112例早期先兆流产合并IUH患者分为两组。对照组(56例)采用低分子肝素和地屈孕酮治疗,观察组(56例)在对照组基础上加用补肾养血安胎方治疗。比较两组近期疗效、中医证候积分及妊娠结局,治疗前及治疗后检测内分泌激素[雌二醇(E2)、孕酮(P)、β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)]、炎症因子[干扰素-γ(INF-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)]、凝血-纤溶指标[活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)、D-二聚体(DD)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)和组织型纤溶酶原活化剂(t-PA)],超声检测血肿面积、子宫螺旋动脉收缩期峰值血流速度(PSV)、舒张期末血流速度(EDV)和阻力指数(RI)。结果治疗后观察组和对照组总有效率比较,差异无统计学意义(P>0.05),但观察组愈显率显著高于对照组,且治疗后中医证候积分显著低于对照组(P<0.05)。治疗后,两组内分泌激素E2、P、β-HCG均较本组治疗前显著升高,且观察组显著高于对照组(P<0.05);两组治疗后炎症因子IL-4、IL-10较本组治疗前升高,TNF-α、INF-γ和INF-γ/IL-4比值较本组治疗前降低;凝血-纤溶指标APTT、PT较本组治疗前延长,D-D和FIB较本组治疗前降低;血肿面积、子宫螺旋动脉RI均较本组治疗前降低,子宫螺旋动脉PSV和EDV较本组治疗前升高,且上述指标治疗后组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组足月妊娠率和保胎成功率显著高于对照组(P<0.05),妊娠期高血压综合征(PIH)发生率显著低于对照组(P<0.05)。结论补肾养血安胎方联合低分子肝素、地屈孕酮能够改善先兆流产合并IUH患者的临床症状,调节性激素水平及免疫-内分泌平衡,改善子宫胎盘灌注状态和血栓前状态,改善妊娠结局。

养血安胎方对复发性流产血栓前状态子宫内膜容受性的改善作用研究

目的探讨养血安胎方对复发性流产(RSA)血栓前状态子宫内膜容受性的作用机制。方法对30例复发性流产患者应用养血安胎方治疗3个月经周期,治疗前后分别使用B超进行排卵监测,在黄体期采用ELLSA法检测子宫内膜组织血小板衍生因子-AA(PDGF-AA)、血管内皮生长因子(VEGF)、组织纤溶酶原激活物(t-PA)及纤溶酶原激活剂抑制剂-1(PAI-1)含量,并使用电镜及HE染色方法观察子宫内膜形态。结果经养血安胎方3个月经周期治疗后,患者血清抗凝血酶Ⅲ活性(AT-Ⅲ)、蛋白S活性(PS)较治疗前显著升高(P<0.05);子宫内膜胞饮突表达丰富及表达中等的例数较治疗前显著增加(P<0.05);子宫内膜组织PDGF-AA、t-PA含量治疗后较治疗前显著降低(P<0.05)。结论养血安胎方通过补肾活血、养血法能够改善子宫内膜的血液循环及血流灌注,提高子宫内膜的容受性。

养血安胎方通过转化生长因子-β/Smad通路治疗肾虚血瘀型复发性流产的机制研究

目的探讨养血安胎方通过转化生长因子-β(TGF-β)/Smad通路对肾虚血瘀型复发性流产的作用机制。方法建立肾虚血瘀型复发性流产小鼠模型,运用HE染色观察子宫内膜形态;蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR检测空白对照组,模型对照组,养血安胎方高、中、低剂量组血管内皮生长因子(VEGF)、TGF-β/Smad通路的表达情况。结果与模型对照组比较,养血安胎方高剂量组的VEGF、TGF-β、Smad3蛋白表达均显著升高(P<0.05)。结论养血安胎方能通过调控TGF-β/Smad通路促进子宫内膜VEGF表达,其效果与剂量成正相关,提示养血安胎方治疗复发性流产可能与其增加血管通透性、改善微循环障碍、调节胎盘植入作用机制有关。

补肾养血安胎方治疗体外受精与胚胎移植术后阴道出血20例

近2年来，笔者对体外受精与胚胎移植（IVF-ET）术后出现阴道不规则出血，采用白拟补肾养血安胎方进行治疗，取得较好的疗效，现介绍如下。1一般资料 20例均为门诊病人，在上级医院进行IVF-ET术后，经B超明确诊断宫内妊娠，妊娠时间为35-60天，年龄在25-40岁；有不同程度阴道出血，无腹痛无腰酸，西药常规治疗无明显好转，

养血安胎方对肾虚血瘀型复发性流产小鼠胚胎植入及蛋白表达的作用机制

目的:探讨养血安胎方对肾虚血瘀型复发性流产的作用机制。方法:建立肾虚血瘀型复发性流产小鼠模型,运用SP免疫组化法、蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR检测正常组,模型组,高、中、低剂量组IGFBP-7、VEGF、PDGF-AA的蛋白及mRNA表达情况。结果:与模型组比较,高剂量组VEGF升高,PDGF-AA、IGFBP-7蛋白表达均显著下降(P<0.05),并且其效果与剂量成正相关。结论:养血安胎方能促进子宫内膜VEGF和降低PDGF-AA、IGFBP-7的表达,提示养血安胎方治疗复发性流产可能与其增加血管通透性、改善微循环障碍、调节胎盘植入作用机制有关。

养血安胎方通过RAGE通路调控EMT治疗复发性流产的作用机制

目的:探讨养血安胎方通过RAGE通路调控子宫内膜上皮间充质转化(EMT)治疗复发性流产(RSA)的作用机制。方法:使用原代分离培养的小鼠子宫内膜基质和上皮细胞,通过在细胞水平添加晚期糖基化终末产物(AGEs)的方法干预细胞,激活RAGE信号通路。进一步采用瞬时转染siRNA方法干预细胞,沉默细胞内源RAGE来抑制RAGE信号通路。使用荧光定量PCR、Western blot实验方法检测干扰RAGE信号通路前后细胞内晚期糖基化终产物受体(RAGE)、Snail家族转录抑制因子1(Snail1)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、核因子-κB(NF-κB)信号通路上的标志蛋白的表达变化,从正反两个方面分析RAGE信号通路对小鼠子宫内膜基质细胞和子宫内膜上皮细胞EMT的影响。结果:与空白组比较,各给药组能够下调E-cadherin和闭合蛋白(Occludin)表达,上调Vimentin、N-cadherin、Snail1的表达。针对NF-κB通路检测也发现各给药组能够显著激活NF-κB信号通路。敲低RAGE后Vimentin、N-cadherin、Snail1蛋白明显降低,E-cadherin和Occludin在蛋白水平也明显上调,与荧光定量结果一致。结论:养血安胎方能够上调细胞内RAGE基因表达激活NF-κB信号通路,进一步调控子宫内膜基质和上皮细胞向间质样形态转化,产生胚胎着床容受性状态,有效治疗和预防RSA。

基于整合药理学技术探讨养血安胎方改善复发性流产血栓前状态的分子作用机制

目的:基于中医药整合药理学研究平台V2.0(TCMIP V2.0)探讨养血安胎方治疗复发性流产血栓前状态(RSAPTS)的分子机制。方法:通过TCMIP V2.0收集养血安胎方中药物化学成分及药物靶标,利用TCMIP V2.0收集RSA-PTS疾病靶标信息,并借助在线人类孟德尔遗传(OMIM)数据库补充和完善疾病靶标信息。构建药物与疾病核心靶标网络,并对核心靶标进行生物过程分析和通路富集分析,构建"中药-成分-靶标-通路"多维网络,对网络中主要化学成分进行了吸收、分配、代谢、排泄和毒性(ADMET)水平分析。结果:共收集养血安胎方中8味中药的310个化学成分和975个靶标信息,并获得了143个疾病靶标,药物和疾病靶标互作关系分析获得243个核心靶标,对前100位核心靶标分析结果显示,这些靶标主要作用于血液凝固、血小板活化、血管形成正调控、血小板聚集的调节和血管形成等与血栓形成相关的生物过程。通路分析显示这些靶标主要富集于补体与凝血级联反应、雌激素信号通路、血小板活化和甲状腺激素信号通路等通路。多维网络分析结合ADMET水平显示,养血安胎方中的益母草碱、儿茶酚、香草醛等14个成分可能通过影响凝血因子Ⅱ(F2),纤维蛋白溶酶原(PLG)和雌激素受体1(ESR1)来参与补体与凝血级联反应、血小板活化、甲状腺激素信号通路等,进而发挥对RSA-PTS的治疗作用。结论:养血安胎方中主要化学成分可能通过调节补体与凝血级联反应、血液凝固和血小板活化等生物过程来改善RSA-PTS。

安胎养血方治疗先兆流产68例疗效观察

[目的]探讨安胎养血方对先兆流产的疗效及机理。[方法]用双盲法随机分组,设自拟安胎养血方治疗组68例,对照组30例,观察先兆流产的治疗情况。[结果]治疗组有效率为95·6%,高于对照组63·3%。[结论]安胎养血方治疗先兆流产有较好的疗效,对婴儿没有影响。