基于网络药理学和分子对接探讨养血安胎颗粒治疗复发性流产分子作用机制

目的基于网络药理学和分子对接技术研究养血安胎颗粒治疗复发性流产(RSA)作用机制。方法通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)和中医药整合药理学研究平台(TCMIP)数据库收集养血安胎颗粒主要化学成分及其映射靶标,通过OMIM、GeneCards、Drugbank、PharmGkb、TTD数据库收集RSA疾病靶标,并通过在线工具draw venn diagram分析药物与疾病靶标交集,导入STRING数据库,分析共有靶标相互作用关系(PPI),并对其进行生物信息学分析。此外,根据Degree值分析养血安胎颗粒治疗RSA的核心靶标,采用分子对接技术,研究靶标与化学成分之间结合度,验证网络药理学分析结果。结果共收集养血安胎颗粒化学成分70个和靶标236个,疾病靶标去重后获得453个。通过交集分析共获得66分共有靶标。PPI互作分析发现IL6、MMP9、TNF、IL1B、IL10等靶标是养血安胎颗粒治疗RSA核心靶标。生物信息学富集分析发现,这些共有靶标主要作用于TNF信号通路、HIF-1信号通路、FoxO信号通路、雌激素信号通路等信号通路。进一步的分子对接结果表明,度值(degree)靠前的靶标MMP9与芍药苷、芝麻素、槲皮素和山柰酚对接良好。尤其是芍药苷对接结果优于阳性对照。结论通过网络药理学和分子对接分析,发现养血安胎颗粒中主要活性成分通过作用于MMP9影响多条信号通路发挥治疗RSA作用。

养血安胎颗粒对反复自然流产患者非孕期NK及Ts细胞活性的影响

目的观察养血安胎颗粒对反复早期自然流产患者非孕期外周血中自然杀伤细胞(NK)及抑制性T细胞(Ts)活性的影响。方法检测42例反复早期自然流产非孕期患者(治疗组)的NK及Ts细胞活性变化,给予养血安胎颗粒干预治疗,40例同样条件患者未经任何治疗,3个月为1个疗程,观察NK及Ts细胞活性变化。结果治疗组NK细胞活性治疗后较治疗前明显下降,差异有极显著性意义,P<0.001;与对照组治疗后比较差异有显著意义,P<0.05。Ts细胞活性较治疗前明显提高,差异有显著性意义,P<0.01;与对照组治疗后比较,差异有显著性意义,P<0.05。结论养血安胎颗粒可以通过调节NK、Ts细胞活性从而调节机体免疫功能。

养血安胎颗粒抑制外泌体中miR-16促进血管生成的作用研究

目的探讨养血安胎颗粒调控血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)以促进血管生成的机制。方法使用miR-16 mimic及养血安胎含药血清干预人绒毛膜癌细胞(JEG-3),差速离心法收集JEG-3细胞分泌的外泌体,并与人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)共培养,CCK-8法测定JEG-3细胞和HUVECs的细胞活力,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)法测定JEG-3细胞、外泌体和HUVECs中miR-16水平,蛋白免疫印迹法(western blot,WB)测定JEG-3细胞和HUVECs中VEGF和磷酸化血管内皮细胞生长因子受体2(phosphorylated VEGF receptor 2,p-VEGFR2)的蛋白表达。结果养血安胎含药血清能够增加JEG-3细胞的活力;转染miR-16 mimic后,JEG-3细胞、外泌体和HUVECs中miR-16水平增加,VEGF和p-VEGFR2蛋白表达降低,HUVECs细胞活力降低;养血安胎含药血清干预后,JEG-3细胞、外泌体和HUVECs中miR-16水平降低,VEGF和p-VEGFR2蛋白表达升高,HUVECs细胞活力升高。结论养血安胎颗粒抑制JEG-3细胞外泌体中miR-16水平,进一步抑制HUVECs中的miR-16水平,进而增加HUVECs中VEGF和p-VEGFR2的蛋白表达,促进血管生成。

基于UPLC-HR-MS/MS技术的养血安胎颗粒化学成分研究

目的为系统研究养血安胎颗粒的化学成分,采用超高液相色谱串联高分辨质谱(UPLC-HR-MS/MS)法建立一种快速、准确识别中药复方主要化学成分的定性分析方法。方法通过UPLC-HR-MS/MS获取样品的精确相对分子质量以及高能碰撞下产生的碎片离子信息,与对照品的质谱信息进行比对,结合相关文献实现对主要化学成分的快速、准确定性。结果从养血安胎颗粒颗粒中共鉴定出18种化学成分,主要包括有机酸类、黄酮类、苷类、酯类和其他类。结论建立的方法可以快速、准确地对养血安胎颗粒中的主要成分进行识别,为养血安胎颗粒的有效化学成分化学谱探索提供前期基础。