HPLC法测定犬口服养阴通脑颗粒后血浆中的葛根素

目的 建立HPLC测定犬口服复方葛根制剂后葛根素的血药浓度。方法 以沸水浴法处理血浆 ,以对羟基苯甲酸为内标 ,甲醇 水 醋酸 (5 .6 2 5mol/L) (39∶5 8∶3,v/v)为流动相 ,InertsilODS 3色谱柱 (15 0mm× 4.6mm ,5 μm)为固定相 ,流速为 0 .9ml/min。以二极管阵列检测器在 2 48nm波长下测定并通过三维图观察其紫外吸收定性。结果 葛根素在 0 .0 98～ 0 .784μg/ml范围内线性关系良好 ,RSD <10 % ,平均回收率为 10 2 .44 % ,最低检测限为 0 .33ng ,血浆中最低检测浓度为 0 .0 392 μg/ml。 结论 此法简便、快速、灵敏、可靠 ,可较好地用于口服复方葛根素制剂血药浓度的测定。

养阴通脑颗粒增加脑血流量的机制

目的 观察养阴通脑颗粒对麻醉犬脑血管阻力的影响 .方法 将 17只犬随机分为 3组 ,空白对照组给等量的生理盐水 ,养阴通脑颗粒分中剂量组 (1.0 g· kg- 1 )和大剂量组(2 .0 g· kg- 1 ) ,灌胃给药 ,采用电磁流量计测定脑血流量 ,采用股动脉插管法测主动脉平均血压 .计算脑血管阻力 (R) .结果 养阴通脑颗粒可降低脑血管阻力 ,以中剂量效果为好 ,用药前脑血管阻力为 (6 9.2± 17.3) Pa· m L- 1· min- 1 ,用药后 30 min,6 0 min分别降为 (5 1.9± 14.6 ) Pa· m L- 1· min- 1和 (49.2± 14.6 ) Pa· m L- 1·m in- 1 .结论 养阴通脑颗粒对脑血管有扩张作用 .

养阴通脑颗粒对麻醉犬脑血流量的影响

目的 :观察养阴通脑颗粒对麻醉犬脑血流量的影响。方法 :将 2 9只犬随机分为 5组 ,养阴通脑颗粒大剂量组(2 .0 g/kg) ;中剂量组 (1.0 g/kg) ;小剂量组 (0 .5 g/kg)及阳性药维脑路通组 (维脑路通 0 .0 2 5 g/kg) ,空白对照组给等量的生理盐水。结果 :养阴通脑颗粒 (0 .5 ,1.0 ,2 .0 g/kg)可增加麻醉犬的脑血流量 ,中剂量组在 30～ 90 m in时增加更明显 ,与维脑路通组比较 ,在 30 min时 ,大、中剂量组的脑血流量比维脑路通组明显 (P<0 .0 5 )。结论 :养阴通脑颗粒扩张脑血管的疗效比小剂量的维脑路通好。

养阴通脑颗粒和维脑路通对心脏功能的改善作用

目的 :观察养阴通脑颗粒对麻醉犬心脏功能的影响。方法 :将 2 9只犬随机分为养阴通脑颗粒组、维脑路通组和生理盐水对照组 ,用心脏收缩时间期 (STI)评定心脏功能的变化。结果 :养阴通脑颗粒和维脑路通能减小 PEP/L VET比值 ,延长 L VET和缩短 PEP的作用。结论 :养阴通脑颗粒和维脑路通有改善心脏功能的作用。

养阴通脑颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠内源性神经干细胞表达的影响

目的观察养阴通脑颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠内源性神经干细胞表达的影响。方法线栓法建立大鼠局灶性脑缺血模型,缺血90 min后再灌注。大鼠随机分为假手术组、模型组、养阴通脑颗粒组(1. 65 g/kg),再灌注后24 h灌胃给药。给药后第1、7、14天,Longa法进行神经功能评分,同时各组随机选择6只大鼠处死,免疫荧光检测缺血侧室管膜下区(SVZ)、颗粒下层区(SGZ) Brd U、Brd U/Nestin、Brd U/Neu N、Brd U/GFAP阳性细胞数。结果与模型组比较,给药后第7、14天养阴通脑颗粒组Longa评分显著降低(P <0. 05,P <0. 01),Brd U/Nestin阳性细胞数显著增加(P <0. 01);第1、7、14天Brd U阳性细胞数显著增加(P <0. 01),Brd U/GFAP阳性细胞数显著减少(P <0. 01);第14天Brd U/Neu N阳性细胞数显著增加(P <0. 05)。结论养阴通脑颗粒可通过激活内源性神经干细胞来促进其增殖,并分化为成熟的神经元,同时能减轻神经胶质细胞过度增殖,促进神经发生,减轻神经功能缺损。

灌胃养阴通脑颗粒大鼠血浆中川芎嗪的HPLC法测定

目的建立HPLC测定大鼠灌胃养阴通脑颗粒有效部位组合后血浆中川芎嗪质量浓度的方法。方法以乙腈提取处理血浆，以安眠酮为内标，甲醇-水（55：45）为流动相，ODS C18色谱柱（150mm×4．6mm，5μm）为固定相，体积流量为1．0mL／min，以紫外检测器在279nm波长下测定血浆中川芎嗪。结果川芎嗪在0．11～22μg／mL线性关系良好，平均回收率为102．98％，RSD〈10％，最低检测限为0．21ng，血浆中最低检测质量浓度为0．042μg／mL。结论此法灵敏、可靠，可较好地用于口服养阴通脑颗粒有效部位组合后血浆中的川芎嗪的测定，为测定中药复方体内有效成分提供方法。

脑缺血再灌注大鼠灌胃养阴通脑颗粒后主要成分葛根素的药动学研究

目的采用脑-颈静脉双通道微透析法观察大鼠灌胃养阴通脑颗粒后主要成分葛根素的药动学参数。方法采用HPLC技术建立大鼠脑和颈静脉微透析液中葛根素的含量测定方法,并考察微透析探针回收率;大鼠植入颈静脉和脑微透析探针引导管,并制作大鼠大脑中动脉局灶性栓塞(MCAO)模型。灌胃给予2.5 g/mL养阴通脑颗粒,测定脑、颈静脉微透析液葛根素的浓度变化,参数拟合分析药动学参数。结果观察MCAO模型大鼠灌胃给予2.0 g/mL养阴通脑颗粒后微透析液中葛根素的浓度,发现脑内葛根素浓度低于颈静脉,Tmax更加靠后,葛根素生物利用度在脑部明显低于血液中。结论建立的脑-颈静脉双通道微透析技术分析获得大鼠不同部位的药-时曲线,有助于开展中药及相关制剂的药动学数据及成分分布、生物利用度等参数。

养阴通脑颗粒对犬血压和心率影响的实验研究

目的 :观察养阴通脑颗粒对麻醉犬平均血压和心率的影响。方法 :将 2 9只犬随机分为 5组 ,养阴通脑颗粒大剂量组 ,中剂量组和小剂量组 ,用维脑路通作阳性药对照组 ,空白对照组给等量生理盐水 ,养阴通脑颗粒、维脑路通和生理盐水均通过胃管灌入犬胃中。股动脉插管经晶体压力传感器测量主动脉平均血压 ,心率从心电图的 R- R间期测算。结果 :养阴通脑颗粒对平均血压和心率有轻度降低作用 ,维脑路通对平均血压有轻度升高作用 ,也有减慢心率的作用 ,两种药对血压和心率的影响都无显著意义。结论 :养阴通脑颗粒对平均血压和心率无明显影响。

养阴通脑颗粒中黄芪甲苷含量的HPLC-ELSD测定

目的确定养阴通脑颗粒中黄芪甲苷含量HPLC测定方法及最佳提取工艺。方法用HPLC-ELSD法测定黄芪甲苷含量,色谱柱为Kromasil C18;乙腈-水(34∶66),流速1.0 ml/min,漂移管温度100℃,载气流速为2.0 L/min。采用微波辅助提取,通过正交设计考察溶媒用量、微波功率、微波时间,乙醇体积百分数对黄芪甲苷得率的影响。结果方法学考察结果表明,在0.28～4.20μg(r=0.999 4)范围内,黄芪甲苷呈良好的线性关系;精密度RSD为0.35%;加样回收率为97.43%,RSD为2.59%。最佳提取条件为:微波功率70 W,溶媒用量6倍,微波时间20 min,乙醇体积百分数60%。结论该方法测定结果准确稳定,精密度高,最佳提取工艺下黄芪甲苷的得率高。

脑缺血-再灌注损伤时MMP9表达及养阴通脑颗粒干预作用的研究

目的 :观察小鼠脑缺血再灌注后海马区基质金属蛋白酶 (MMPs)表达情况 ,探讨其在脑缺血损伤中的作用以及养阴通脑颗粒对脑缺血损伤保护作用的机制。方法 :应用免疫组织化学技术观察脑缺血再灌注后海马区基质金属蛋白酶 9(MMP9)蛋白表达的变化。结果 :模型组缺血再灌注 2 0 min后 CA1区的 MMP9表达明显增加 ,其阳性细胞数平均为 (4 2 .3± 17.1)个 ,与假手术组 (4 .8± 1.6 )个比较有明显差异 (P<0 .0 5 )。养阴通脑颗粒、尼莫地平可使 MMP9表达明显降低 ,其阳性细胞数分别为 (7.2± 2 .9)个和 (12 .7± 5 .3)个 ,与模型组比较 P均 <0 .0 5。结论 :脑缺血再灌注可诱导 CA1区的 MMP9表达增加 ;MMP9表达增加可能是脑缺血再灌注损伤的机制之一 ;养阴通脑颗粒可抑制 MMP9表达 ,对脑缺血再灌注损伤具有保护作用。

养阴通脑颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用

目的 探究养阴通脑颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用。方法 建立大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,SD大鼠随机分为假手术组、模型组、养阴通脑颗粒组。建立模型后24、48、72 h分别测定神经功能评分,术后72 h进行TTC染色并计算脑梗死体积,逆转录-聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测大鼠脑组织中NLRP3炎性小体、信号传导与转录激活因子(STAT3) mRNA表达,酶联免疫吸附法检测血浆中白细胞介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果 养阴通脑颗粒能改善神经功能,减少脑梗死体积,显著降低IL-18和TNF-α含量,下调NLRP3、STAT3 m RNA表达。结论 养阴通脑颗粒对大鼠脑缺血再灌注损伤有一定的保护作用,其作用机制可能与抑制炎症反应有关。

大鼠脑缺血后脑组织内皮素-1基因表达及养阴通脑颗粒对其干预的作用

目的 :观察养阴通脑颗粒对大鼠脑缺血后脑组织内皮素 1( ET 1)基因表达的干预作用 ,探讨其对脑缺血损伤保护作用的机制。方法 :应用原位杂交及图像分析技术观察脑缺血侧皮质 ET 1基因表达的变化。结果 :缺血组与养阴通脑颗粒组缺血侧皮质 ET 1基因表达显著高于自身健侧相应脑区 ,养阴通脑颗粒组缺血侧皮质 ET 1基因表达显著低于模型组缺血侧。结论 :脑缺血后脑组织 ET 1基因表达增高 ,养阴通脑颗粒可显著抑制缺血侧皮质 ET 1基因表达 ,对脑缺血性损伤具有保护作用。

养阴通脑颗粒治疗中风病恢复期(气阴两虚、瘀血阻络证)30例疗效观察

目的:探讨养阴通脑颗粒治疗中风病恢复期(气阴两虚、瘀血阻络证)的临床效果。方法:收治中风病恢复期患者60例,分为高剂量组、低剂量组、阳性药对照组、安慰剂对照组,各15例。各组均连续用药28 d。结果:治疗组在改善患者半身不遂、口舌歪斜、言语蹇涩或不语、偏身麻木等方面优于对照组(P<0.05)。结论:养阴通脑颗粒能明显改善中风病恢复期(气阴两虚、瘀血阻络证)中风患者的临床症状,其临床疗效佳,无明显不良反应。

养阴通脑颗粒有效成分配伍对脑缺血再灌注损伤大鼠保护作用机制的研究

目的探究养阴通脑颗粒主要有效成分葛根素、川芎嗪、黄芪甲苷、梓醇的正交配伍组合对SD大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用机制,并选出较优组合。方法将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、9个不同比例正交配伍组和阳性对照组。建立大鼠大脑中动脉局灶性栓塞(MCAO)模型,以L_9(3~4)正交表设计安排成分配伍给药,动物清醒后观察大鼠神经功能缺损症状;3d后观察海马区脑组织的病理变化;TTC染色检测脑梗死体积;免疫组织化学法来评估缺血侧脑组织NLRP3蛋白表达,RT-PCR法检测海马区脑组织ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18、MMP-9 mRNA表达。采用极差分析法分析正交试验结果。结果正交配伍各组能有效改善脑缺血再灌注损伤的神经功能缺失,降低脑梗死体积,抑制NLRP3炎性体的表达,降低ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18、MMP-9基因的表达。正交试验结果分析显示,其较优组合为川芎嗪100 mg·kg^(-1)、葛根素20 mg·kg^(-1)、黄芪甲苷80 mg·kg^(-1)、梓醇20 mg·kg^(-1)。结论养阴通脑颗粒主要有效成分配伍对脑缺血再灌注损伤大鼠有明显的保护作用,其作用机制可能与抑制NLRP3炎性体,下调ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18、MMP-9的表达有关。

R语言多目标优化养阴通脑颗粒组方中3种黄酮类指标成分提取工艺

目的多目标优化养阴通脑颗粒组方中3种黄酮类指标成分的提取工艺。方法以养阴通脑颗粒组方中葛根素、毛蕊异黄酮和芒柄花素的提取率为检测指标,采用4因素3水平的正交试验设计方法进行提取工艺考察。通过R语言结合熵权法赋予权值,建立BP神经网络模型,再利用遗传算法对网络进行目标寻优,从而得到养阴通脑颗粒组方中葛根素、毛蕊异黄酮和芒柄花素的最佳提取工艺。结果养阴通脑颗粒组方中葛根素、毛蕊异黄酮和芒柄花素的最优工艺条件为乙醇体积分数85%、提取时间1.5 h、提取温度80℃、乙醇用量25倍,模型综合评价预测值为0.389,而实验所得的平均综合评价值为0.394,相对误差为1.27%,表明具有良好的网络预测性。结论结合所得3个指标成分的提取率和提取工艺的可操作性、可重复性,建立的数学模型可用于对养阴通脑颗粒组方中葛根素、毛蕊异黄酮和芒柄花素的提取工艺进行分析和预测,为实现中药有效成分多目标寻优提供了新的参考。

统计矩法评价养阴通脑颗粒各有效部位配伍在脑缺血再灌大鼠中的药动学变化

目的:应用总量统计矩法研究中药复方养阴通脑颗粒主要有效部位的不同配伍对主要活性成分药动学参数的影响。方法:以养阴通脑颗粒中的主要有效部位生物碱、黄酮、皂苷、挥发油的量作为配伍的质量控制标准,按正交试验法设计复方主要有效部位的配伍实验,在不同时间点上检测川芎嗪和葛根素的血药浓度,分别计算川芎嗪和葛根素在各配伍条件下的零阶矩和平均滞留时间,再计算葛根素和川芎嗪的总量零阶矩和总量平均滞留时间。应用正交分析法分析配伍对其药动学参数的影响。结果:黄酮对葛根素和川芎嗪的总量零阶矩影响最大,生物碱对葛根素和川芎嗪的总量平均滞留时间影响最大,皂苷对2个总量统计矩参数的影响都很小,而挥发油对2个总量统计矩参数的影响都较大,提示挥发油可能促进葛根素和川芎嗪在大鼠体内的代谢。结论:总量统计矩参数可用于指导中药复方的配伍研究。

养阴通脑颗粒对大鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用及其抑制NF-κB信号通路的作用机制

目的:探讨养阴通脑颗粒(YYTN)对缺血/再灌注损伤大鼠的保护作用及其可能的作用机制。方法:采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血(MCAO)模型,缺血90min后再灌注,分假手术组、MCAO组、YYTN高、中、低剂量组,再灌注后24h灌胃给药,连续7d。在缺血再灌注后第1、3、7天,采用Longa法进行神经功能评分;术后第7天,进行TTC染色、采用免疫荧光双标检测Brd U/Nestin免疫阳性细胞、Western blot检测p-NFκB、p-p65、p-IκBα蛋白表达。结果:缺血再灌注后第3、7天,与假手术组比较,MCAO组Longa评分极显著升高(P<0.01),梗死体积百分比明显升高(P<0.01);与MCAO组比较,YYTN高、中剂量组Longa评分明显降低(P<0.05,P<0.01),且梗死体积的百分比明显减少(P<0.01)。缺血再灌注后第7天,与假手术组比较,MCAO组Brd U/Nestin免疫阳性细胞数量明显增多(P<0.01),p-NFκB、p-p65蛋白表达明显增多(P<0.01),p-IκBα蛋白表达显著减少(P<0.01);与MCAO组比较,YYTN各剂量组Brd U/Nestin免疫阳性细胞数量明显增多(P<0.01),且p-NFκB、p-p65蛋白表达明显减少(P<0.01),p-IκBα蛋白表达显著增多(P<0.01)。结论:YYTN可促进脑缺血再灌注损伤后神经功能恢复、减少梗死体积、促进缺血周边区NSCs增殖进行神经系统自我修复,其作用机制可能与其抑制NF-κB信号通路有关。

养阴通脑颗粒对大鼠脑缺血/再灌注损伤后Caspase-3、Bcl-2、Bax mRNA表达的影响

目的:观察养阴通脑颗粒(YYTN)对缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠的保护作用及其可能的作用机制。方法:采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血模型,缺血90min后再灌注,分假手术组、I/R模型组、YYTN高、中、低剂量组,再灌注后24h灌胃给药,连续7d。再灌注后第1、3、7天,采用Longa法进行神经功能评分;缺血后第7天,进行TUNEL神经细胞凋亡染色,并通过实时荧光定量PCR技术分析海马组织中Caspase-3、Bcl-2和Bax mRNA表达的变化,采用ΔΔCt法计算mRNA相对表达水平。结果:术后第3、7天,与I/R模型组相比,YYTN高、中剂量组Longa评分显著降低(P<0.01,P<0.05)。TUNEL染色后,各组海马区均可见TUNEL阳性细胞,与I/R模型组比较,YYTN高、中、低剂量组均能显著降低凋亡细胞平均光密度值(P<0.01,P<0.05);YYTN高剂量组Caspase-3 mRNA相对表达明显降低(P<0.01),YYTN高、中剂量组Bax mRNA相对表达水平明显降低(P<0.01,P<0.05),YYTN各剂量组Bcl-2 mRNA相对表达水平明显升高(P<0.01,P<0.05)。结论:YYTN可明显抑制神经元凋亡,对I/R损伤具有保护作用,其作用机制可能与降低I/R损伤后大鼠海马区Caspase-3和Bax mRNA表达,促进Bcl-2 mRNA表达有关。

基于R语言的养阴通脑颗粒总黄酮提取优化

目的:运用R语言结合BP神经网络和遗传算法优化复方养阴通脑颗粒中总黄酮提取工艺。方法:在单因素试验的基础上采用4因素3水平的正交试验设计方法,提取并测得养阴通脑颗粒中总黄酮的含量。通过R语言,建立BP神经网络模型,再利用遗传算法对网络进行目标寻优,从而得到养阴通脑颗粒总黄酮的最佳提取工艺。结果:养阴通脑颗粒中总黄酮的最优工艺条件为乙醇浓度55%、提取时间1.5h、提取温度80℃、液料比15∶1,模型预测值为119.04mg,而实验平均值为120.35mg,相对误差为1.09%,因此具有良好的网络预测性。结论:此数学模型可用来对养阴通脑颗粒中总黄酮的提取工艺进行分析和预测,为实现中药有效部位和成分目标寻优提供了新的参考。