外留内切法治疗肛瘘的探讨

肛门直肠瘘是肛肠常见病,目前国内外多主张采用挂线、切开、切除或切挂等法治疗。为了减少肛门直肠手术损伤,保持肛周的解剖形态,维持肛门直肠正常功能,我院从1982年以来,采用了外留内切法治疗肛瘘350例,效果满意,报告如下.

甲基化特异性PCR联合结合重亚硫酸盐限制性内切酶法在胃癌抑癌基因甲基化检测中的应用

目的探讨甲基化特异性PCR(MSP)方法检测胃癌组织中抑癌基因甲基化的准确性,联合应用MSP方法与结合重亚硫酸盐限制性内切酶法(COBRA)检测抑癌基因甲基化状态的意义。方法采用MSP检测胃癌组织抑癌基因Runx3启动子区甲基化的状态,随后再采用COBRA检测胃癌组织标本的甲基化状态。分析两种方法检测结果的关系。结果经MSP方法检测54例肿瘤组织中共有30例标本发生Runx3基因启动子区异常甲基化,甲基化阳性率为55.6%。经COBRA方法检测54例肿瘤组织中有27例出现酶切条带即存在甲基化,甲基化阳性率为50.0%。经COBRA方法检测,在MSP方法检测的30例阳性标本中有3例未出现酶切条带即为假阳性。在MSP方法检测Runx3基因甲基化阴性的24例标本中,经COBRA方法检测,Runx3基因甲基化阴性的标本亦为24例。两种检测方法检测结果的阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论甲基化特异性PCR方法在检测胃癌抑癌基因甲基化状态的研究中具有较高的灵敏度,COBRA方法可以检测出MSP方法中的假阳性标本,联合应用两种方法检测胃癌组织中抑癌基因的甲基化状态会使实验结果更可靠、准确。

内切外引流法治疗低位肛周脓肿

目的:探讨内切外引流法治疗低位肛周脓肿的有效性。方法:将240例低位肛周脓肿患者随机分为两组,试验组行内切外引流法治疗,对照组行传统切开引流法治疗,术后随访6个月观察疗效。结果:两组治疗效果比较,有极显著差异(P<0.01)。结论:内切外引流法治疗低位肛周脓肿具有明显优势。

柯萨奇B组病毒3种检测方法的比较

目的探讨限制性内切酶分析法检测柯萨奇B组病毒的特异性和重现性。方法收集500例疑似病毒性心肌炎的患者血清,分别采用限制性内切酶分析法、ELISA法、RT-PCR法3种检测方法进行检测,每种方法在相同条件下连续重复3次,然后将其结果进行比较。结果ELISA法的3次检测的结果差别较大,阳性率分别为55.4%、58.4%、60.6%;RT-PCR法的3次检测的结果差别相对较小,阳性率分别为51.1%、51.6%、52.8%;限制性内切酶分析法的3次检测结果完全一致。结论限制性内切酶分析法是一种特异性强、重现性好,明显优于ELISA法和RT-PCR法的新的病毒检测方法。

表观遗传学研究方法进展

表观遗传调控是基因表达调控的重要组成部分,已成为当前研究的热点。目前其研究主要集中在DNA甲基化和组蛋白修饰。针对这两种表观修饰,其研究方法也取得了较大进展,一方面方法的灵敏度和特异性都在不断提高;另一方面表观修饰的检测正在逐步从定性检测向定量分析方向发展,从个别位点向高通量检测发展。此外,新一代测序技术的应用将大大推动表观遗传研究的发展,包括单分子实时测序法、单分子纳米孔测序法等。综述目前常用的DNA甲基化、组蛋白修饰研究方法以及最新的单分子测序技术,并对它们在表观遗传修饰检测中的应用作了简要对比分析。

PCR-RFLP法检测生殖道沙眼衣原体感染

目的 建立检测沙眼衣原体的聚合酶链反应 -限制性内切酶切片段长度多态性分析 (PCR -RFLP)方法。方法 在利用PCR扩增沙眼衣原体的基础上 ,引入RFLP方法 ,并与美国ABI公司的金标免疫层析法试剂盒和镜检包涵体法比较。结果 共检测 40例临床确诊病人 ,镜检包涵体法有 15例 (37.5 % )阳性 ,金标免疫层析法有 2 3例 (5 7.5 % )阳性 ,而PCR-RFLP法有 2 9例 (70 .3 % )阳性 ,各组间有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 我们认为PCR -RFLP法优于镜检包涵体法。

旋风铣削螺纹的刀具设计

对旋风铣削圆柱形、梯形螺纹的刀具理论刃形进行了分析计算,讨论了便于制造与刃磨的替代刃形,并对影响替代误差的各因素进行了分析。所得结果对于旋风铣削铣头设计与刀具刃形设计有一定的指导意义。

限制性内切酶分析法在柯萨奇B组病毒检测及分型中的应用

目的 探讨限制性内切酶分析法在柯萨奇B组病毒B1～B6型检测及分型中的应用。方法 利用GCG软件对柯萨奇B1～B6型病毒cDNA全序列进行了限制性内切酶酶切位点的分析。结果 共 114种限制性内切酶在柯萨奇B1～B6型病毒cDNA中分布有不同数量的酶切位点。经过比较和分析 ,得到了它们的一个共同cDNA片段 ,在这个cDNA片段中 ,B1～B6型病毒各自具有特异性的核苷酸序列 (特异的限制性内切酶位点 ) ,对柯萨奇B组病毒 6个已知型别标准毒株进行了成功的分型和检测。结论 本方法有效地解决了在柯萨奇B组病毒检定以往方法中所存在的非特异性问题 ,可以对柯萨奇B组病毒进行准确的检定和型别鉴定。

人乳头瘤病毒11型DNA中CpG基序甲基化状态分析及生物活性的研究

目的 对人乳头瘤病毒 11型全核苷酸序列的CpG基序 (CpGmotifs)进行分析 ,为阐明尖锐湿疣的发病机制和提高DNA疫苗的效能奠定理论基础。方法 对从pBR32 2 HPV11重组质粒上酶切下来的HPV11全长DNA进行计算机分析 ,包括分类、计数和定位 ;并用限制性内切酶PCR法分析HPV11DNA中CpG基序的甲基化状态 ,即分别用甲基化敏感的限制性内切酶AccⅡ、HaeⅡ和HpaⅡ对HPV11DNA进行酶切消化 ,再以HpaⅡ切割位点侧翼序列为引物 ,以HpaⅡ酶切产物为模板 ,用聚合酶链反应 (PCR)扩增HPV11DNA片断 ,并用HPV11DNA刺激表达有pCIneo TLR9的HEK2 93细胞 ,ELISA法检测TNF al pha、IFN alpha和IL 12的分泌。结果 CpG的“C”的侧翼为两个嘌呤 ,“G”的侧翼为两个嘧啶 ,在HPV11中共 14个。HPV11全基因组被AccⅡ切成 2个片断、被HaeⅡ切成 3个片断、被HpaⅡ切成 5个片断 ,而且以HpaⅡ酶切产物为模板进行PCR扩增 ,未能得到相应的片断。HPV 11DNA刺激有人TLR9表达的HEK2 93细胞后能检测到TNF alpha、IFN alpha和IL 12的分泌。结论 乳头瘤病毒 11型DNA中含有GACGTT等非甲基化的CpG基序 。

B-纤维蛋白原-455G/A基因多态性对缺血性心脏病患者血浆纤维蛋白原水平的影响

目的 探讨β-纤维蛋白原 - 4 55G/ A(β- Fg- 4 55G/ A)基因多态性与环境因素对血浆 Fg表达的调节机制及与缺血性心脏病 (IHD)发病的关系。方法 应用 PCR及限制性内切酶分析的方法 ,分析 75例 IHD及 1 56例对照者 β- Fg- 4 55G/ A基因多态现象 ,比浊法测定血浆 Fg水平。结果 病例组血浆 Fg水平明显高于对照组 (P<0 .0 1 )。无论男、女患者与对照 ,A基因携带者血浆 Fg水平比同组 GG基因型者明显升高 (P<0 .0 5)。对照组中的 A基因携带者与病例组中的 GG基因型者 ,随增龄血浆 Fg水平有明显升高 (P<0 .0 5)。 IHD患者男性 ,按吸烟及基因型情况分组 ,相同基因型时 ,吸烟组血浆 Fg水平高于不吸烟与戒烟组 (P<0 .0 5)。病例组 A基因频率明显高于对照组 (P<0 .0 0 5)。结论 β- Fg- 4 55 G/ A等位基因与血浆 Fg水平相关 ,A基因携带者 IHD发病率更高。提示 β- Fg- 4 55G/ A可作为

重组真核质粒pEGFP-C2-hG3BP-Domain(1～5)的构建及表达

目的:将人类G3BP(Ras-GTPase activating protein SH3 domain binding protein)蛋白Domain(1～5)基因片段分别定向连入pEGFP-C2质粒,使G3BP蛋白各功能片段与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达。方法:以重组质粒pEGFP-C1-G3BP为模板,PCR法扩增出目的基因,利用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切法将目的片段连接到pEGFP-C2载体上,再将构建成功的pEGFP-C2-hG3BP-Domain(1～5)重组质粒转染入HeLa细胞内,以荧光显微镜及Western印迹法检测绿色荧光蛋白与目的蛋白的融合表达情况。结果:以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,荧光显微镜及Western印迹结果均检测到绿色融合蛋白的表达。结论:重组pEGFP-C2-hG3BP-Domain(1～5)质粒成功构建并表达。

传染性非典型肺炎限制性内切酶检测方法的研究

目的建立一种对传染性非典型肺炎,又称严重急性呼吸综合征(SARS)准确诊断的新方法。方法利用GCG软件将已公布的SARS病毒变异品系与人类基因组、人类易感病原体进行比对分析。结果筛选出了用于检测的ScDNA核苷酸片段,并在该片段中确定特异性的酶切位点,使检测方法的准确性得以保证。结论与传统检测方法比较,限制性内切酶分析法完全克服了检测中非特异性结果的产生,使检测结果准确可靠。

UP-PCR结合RFLP对脑脊液标本中病原菌的检测

①目的 建立通用引物聚合酶链反应 (UP PCR)结合限制性酶切片段长度多态性 (RFLP)酶切图谱分析快速检测脑脊液标本中常见病原菌的方法。②方法 通过对体液标本中常见病原菌 16SrRNA基因保守区的序列分析 ,设计通用引物 ,对不同细菌的DNA进行UP PCP扩增 ,确定标本是否有细菌感染 ,然后对阳性标本的扩增产物分别用不同的限制性内切酶酶切 ,进行RFLP分析 ,进一步鉴定细菌。并与常规细菌培养鉴定法进行比较。③结果 UP PCR结合RFLP法最低可检测出 8cfu·mL-1大肠埃希菌和 2 5 0cfu·mL-1金黄色葡萄球菌 ;该法对10 2份脑脊液标本的检测中 ,其灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为 92 .3%、96 .6 %、80 .0 %和 98.0 % ,较培养法好。④结论 该方法可以准确、快速地检测出脑脊液标本中感染的病原菌。

40例α地中海贫血的实验诊断及基因型

在2992例贫血原因待查者中,采用血红蛋白生化分析,诊断α地中海贫血40例,其中,HbH 14例,HbH-Bart′s 9例,α地中海贫血1 12例,α地中海贫血2 5例。继采用限制性内切酶图谱分析结合聚合酶链反应技术,检出基因型:--SEA/-α3.723例,--SEA/αα12例,αα/-α3.75例。

异径蛇形管的三维建模

利用工程数学及画法解析几何的方法,分析并建立了异径蛇形管在三维状态下的展平曲线方程,同时编写了MATLAB 程序。目的是解决异径蛇形管在角度、直径、球心距等任意变化条件下的展平曲线的位置坐标以及函数关系问题。

聚合酶链式反应-限制性内切酶多态法检查川贝母的掺伪情况

目的应用DNA分子鉴定技术检测川贝母的掺伪情况。方法收集111份川贝母及其主要伪品对口药材,应用聚合酶链式反应-限制性内切酶多态法(PCR-RPLF)对川贝母、川贝母伪品及混合样品进行检测。结果该方法能够检出川贝母中伪品的掺伪量,随着掺伪量的增加,未切DNA条带灰度增强而被切条带减弱;未切条带相对于被切条带而言,其灰度比率相应增加;当掺伪量达75%时,几乎观察不到被切条带。结论所用方法灵敏度高,通过测量琼脂糖凝胶电泳图中DNA条带的灰度值强弱,可知道川贝母中大概的掺伪比例,可用于川贝母样品中掺伪量的检测。

新疆哈萨克族食管癌患者ALDH1L1基因甲基化及其与预后的关系

目的:探讨新疆哈萨克族食管癌患者ALDH1L1基因甲基化状态及其与食管癌发生及预后之间的关系。方法:采用联合亚硫酸氢钠限制性内切酶分析(COBRA)法检测28例哈萨克族食管癌及癌旁组织标本中ALDH1L1基因启动子区甲基化状况,建立Cox回归模型分析临床病理指标、ALDH1L1基因甲基化水平等因素与预后的关系。结果:28例哈族食管癌患者癌组织和癌旁正常组织的ALDH1L1基因启动子甲基化率分别为71.43%和39.28%,差异有统计学意义(P<0.05)。预后因素分析表明肿瘤浸润程度、TNM分期、淋巴结转移、癌组织ALDH1L1基因甲基化水平是影响哈萨克族食管癌预后的独立危险因素。癌组织ALDH1L1基因无甲基化患者术后生存时间长于完全甲基化患者(P<0.05)。结论:癌组织ALDH1L1基因启动子区甲基化状态与新疆哈萨克族食管癌的发生及预后有关。

小白菜小孢子培养再生植株的倍性与基因组DNA甲基化的关系

对小白菜品种进行游离小孢子培养,得到9株再生植株,其中2株为单倍体,7株为二倍体,二倍体自然加倍率为77.7%。为避免材料间差异,取单倍体和二倍体再生植株各2株,提取单株DNA,分别构建单倍体和二倍体DNA混合池。利用甲基化敏感性限制性内切酶-PCR法,结合SRAP分子标记技术,对2个DNA混合池进行筛选,共筛选768对引物,只有在未酶切的单倍体和二倍体DNA池中SRAP引物扩增无差异,而酶切后有差异的条带,才认为是单倍体和二倍体甲基化差异。试验共获得8对含有多态性的引物,试验结果证明小白菜小孢子培养获得的再生植株的倍性与基因组DNA甲基化有关。

柱锥相贯线特殊点解析证明

通过对画法几何中柱锥相贯线最右点的解析证明,说明在正交情况下,可以采用锥内切辅助球面法作图,在而斜交时,则不能采用这一作法,并使作图过程能够有所依据。

DNA甲基化测序技术及其在哺乳动物中的应用研究进展

DNA甲基化在很多真核生物中是一种非常重要的表观遗传学标记,结合新一代测序技术(next-generation sequencing,NGS)对哺乳动物的DNA甲基化水平进行定量测定已成为目前的研究热点。具有高通量、高覆盖率、高分辨率等优点,能较为精准地检测全基因组范围内的甲基化位点。对限制性内切酶消化法、亲和富集法及重亚硫酸盐转化法进行归纳比较,以期为DNA甲基化测序技术的选择提供参考依据,并对测序技术进行展望。