2型糖尿病与脂蛋白脂酶基因PvuⅡ多态性的相关性的初步探讨

目的探讨脂蛋白脂酶基因PvuⅡ多态性在2型糖尿病发病中的意义。方法PCR扩增52例2型糖尿病患者及100例对照者的脂蛋白脂酶基因PvuⅡ基因突变点,经限制性内切酶消化后行凝胶电泳确定其基因型。结果脂蛋白脂酶基因PvuⅡ各种基因型频率在患者组与正常对照组之间的差异无显著性。结论脂蛋白脂酶基因PvuⅡ突变可能不足以构成2型糖尿病的独立遗传性危险因子。

刺桫椤DNA的简便快速提取方法

采用 SDS高盐提取介质简便快速提取刺桫椤 ( Alsophila spinulosa)叶片 DNA,整个提取过程可在 1 0 0 min内完成 ,且对鲜叶或用硅胶快速干燥的干叶均适用 .提取的 DNA相对分子量为48kb,OD2 60 /OD2 80 =1 .84± 0 .0 3;DNA 得率分别为 :60 0～ 1 2 0 0 μg/( g·鲜叶 ) ,35 0～ 5 5 0 μg/( g·干叶 ) ;提取的 DNA无需经 RNase消化等后处理 ,即可用于限制性内切酶酶切和

太白红杉总DNA的快速提取方法

对太白红杉总DNA提取方法进行了探讨,并对其不同部位和器官、不同处理方式材料进行了提取实验研究.通过琼脂糖凝胶电泳、限制性内切酶处理等方法对所提取的DNA样品进行检测.结果表明,改良后的CTAB法,对于太白红杉总DNA的提取是一种良好的简单易行的方法,无论是烘干后的材料还是新鲜材料提取的总DNA中基本没有蛋白质及酚类污染.该方法可在短时间内获得大量的DNA样品,并可根据需要对样品进行适当操作.

甲状腺癌组织低甲基化片断的筛选与克隆

目的筛选甲状腺癌与甲状腺癌癌旁组织的低甲基化片段。方法采用MS—RDA方法，用甲基化敏感性内切酶消化甲状腺癌及癌旁组织基因组DNA，连上接头制备扩增子后，进行两轮消减杂交，筛选甲状腺癌低甲基化片段。结果经过两轮消减杂交后，筛选出3个低甲基化片段。筛选出的低甲基化片段C913位于。BC029276基因上，该基因编码一种rRNA结合蛋白，可能与肿瘤有关。另外两个低甲基化片段C915与C917尚未见相关结构和功能的报道。结论在甲状腺癌组织中存在低甲基化。

一种从链霉菌和大肠杆菌提取大分子量总DNA的新方法

近年来,我们在进行基因工程试验中,探索建立了一种避免使用苯酚、简化操作程序的DNA提取方法。利用该法所得DNA不仅分子量大(约300kb),且纯度完全能满足内切酶消化,接连和转化。在提取链霉菌和大肠杆菌染色体DNA时,称1g湿菌体,加9ml溶菌缓冲液(50mMol/L Tris.Hcl PH8.0;25mmolL EDTA;0.3mol/l sucrose)。混匀菌体后加入1ml溶菌酶溶液(20mg/ml和200ul

DNA甲基化测序技术及其在哺乳动物中的应用研究进展

DNA甲基化在很多真核生物中是一种非常重要的表观遗传学标记,结合新一代测序技术(next-generation sequencing,NGS)对哺乳动物的DNA甲基化水平进行定量测定已成为目前的研究热点。具有高通量、高覆盖率、高分辨率等优点,能较为精准地检测全基因组范围内的甲基化位点。对限制性内切酶消化法、亲和富集法及重亚硫酸盐转化法进行归纳比较,以期为DNA甲基化测序技术的选择提供参考依据,并对测序技术进行展望。

小龙虾(Procambarus clarkii)加工前后优势腐败菌的分离与鉴定

以原料小龙虾和卤制加工后的即食小龙虾为对象研究其优势腐败菌种类,为后续研发适宜的杀菌工艺提供理论依据。采用传统平板分离法,从原料小龙虾与开始腐败的即食小龙虾中分别分离出优势腐败菌,通过菌落形态观察、革兰氏染色镜检对微生物种类进行初步分类。采用16S rDNA PCR扩增、限制性内切酶酶切分析以及测序的方法,进行了菌种鉴定试验。结果表明,原料小龙虾优势腐败菌为阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、溶酪巨球菌(Macrococcus caseolyticus)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophilia)、微小杆菌(Exiguobacterium indicum)和芽胞杆菌属(Bacillus spp.);即食小龙虾优势腐败菌仅检测到以蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)与苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)为代表的芽孢杆菌,而其他类型的细菌在卤制加工过程中已被灭活。小龙虾加工前后优势腐败菌鉴定结果对比分析可知,高温卤制工艺难以除灭原料小龙虾中的芽孢杆菌,芽孢杆菌仍存活导致即食小龙虾腐败。

同型半胱氨酸代谢相关酶基因多态性与习惯性流产关系的研究

目的 探讨胱硫醚β合成酶(cystathionineβsynthase, CBS)基因844ins68、甲硫氨酸合成酶(methione synthase, MS)基因A2756G、亚甲基四氢叶酸还原酶(methylene tetrahydrofolate re ductase, MTHFR)基因C677T三种同型半胱氨酸代谢相关酶基因突变与习惯性流产的关系。 方法 用PCR扩增50 例习惯性流产患者(习惯性流产组)及56 例正常孕妇(对照组)的CBS、MS、MTHFR基因突变点,直接或经限制性内切酶消化后行凝胶电泳确定其基因型。 结果 习惯性流产组MTHFR C677T突变纯合子(12/50,24.0%)较对照组(4/56,7.1%)明显升高(P<0.05),且等位基因突变频率习惯性流产组(26/100, 26. 0%)较对照组(20/112, 17. 9%)升高(P< 0.05)。CBS844ins68、MS A2756G各种基因型频率在流产组与正常对照组之间的差异无统计学意义。 结论 MTHFR C677T纯合子突变与习惯性流产有明确的相关关系;CBS 844ins68、MS A2756G突变可能不足以构成习惯性流产的独立遗传性危险因子。

低熔点胶包埋法制备分子杂交用细胞基因组DNA

介绍一种用于分子杂交的简便、而效的细胞ＤＮＡ制备方法。将细胞包埋在０．５％低熔点琼脂糖凝胶中，只经过细胞裂解、蛋白酶消化和含有苯甲基磺酰氟的ＴＥ（Ｔｒｉｓ、ＥＤＴＡ）溶液清洗两个步骤处理，所得ＤＮＡ就可用于限制性内切酶消化和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交．