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弓形虫肌动蛋白抗原表位抗体的制备及应用
1
作者
庄宝灿
朱进进
余莉
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2024年第4期73-78,共6页
制备弓形虫肌动蛋白(TgActin)多肽表位抗体并探讨其应用价值。BepiPred 1.0 Server在线分析设计TgActin抗原表位,并与多种属Actin进行同源比对,选取并合成高特异性多肽片段序列免疫新西兰兔。末次免疫后收集兔血清并使用Protein G纯化抗...
制备弓形虫肌动蛋白(TgActin)多肽表位抗体并探讨其应用价值。BepiPred 1.0 Server在线分析设计TgActin抗原表位,并与多种属Actin进行同源比对,选取并合成高特异性多肽片段序列免疫新西兰兔。末次免疫后收集兔血清并使用Protein G纯化抗体,SDS-PAGE检测抗体纯度,ELISA测定抗体效价,Western blot分析抗体的特异性及TgActin表位抗体作为内参抗体的可能性,免疫荧光观察胞内速殖子形态。结果显示,ELISA测定抗体效价为1∶128000,Western blot结果显示抗体特异性识别弓形虫Actin,免疫荧光染色显示TgActin表位抗体可以标记纳虫泡内速殖子。结果表明,成功制备了TgActin多肽表位抗体,可用做弓形虫蛋白检测的内参抗体及其在细胞内的免疫荧光检测,为后续弓形虫研究提供了便利条件。
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关键词
弓形虫
肌动蛋白
表位
抗体
内参抗体
免疫荧光
下载PDF
职称材料
刚地弓形虫TgPRF的原核表达、多克隆抗体制备与应用
被引量:
1
2
作者
闫爱霞
邹洋
+5 位作者
黄敏君
李晶晶
李威
田小军
贾永根
谷俊朝
《中国热带医学》
CAS
2019年第7期634-637,共4页
目的原核表达弓形虫TgPRF蛋白,制备多克隆抗体并评价其作为内参抗体的可行性。方法以刚地弓形虫RH株速殖子cDNA为模板,PCR扩增TgPRF编码基因,克隆至pGEX-4T-1载体,转化至大肠埃希氏菌(Escherichia coli)BL21。经IPTG诱导表达后,SDS-PAG...
目的原核表达弓形虫TgPRF蛋白,制备多克隆抗体并评价其作为内参抗体的可行性。方法以刚地弓形虫RH株速殖子cDNA为模板,PCR扩增TgPRF编码基因,克隆至pGEX-4T-1载体,转化至大肠埃希氏菌(Escherichia coli)BL21。经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析重组蛋白表达情况。利用GST标签亲和层析法纯化重组蛋白。以纯化后蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,制备抗TgPRF多克隆抗体。收集弓形虫RH株速殖子,以制备的多克隆抗体为一抗,Western blotting检测抗体特异性及效价。收集ATc调控下不同时间点的弓形虫iKO-Ty-TgAPH虫株速殖子进行Western blotting,以抗Ty和抗TgPRF抗体为一抗,检测TgAPH和TgPRF表达量的变化。结果 SDS-PAGE显示:TgPRF在诱导4 h后表达量趋于饱和,相对分子量为52 ku,且呈可溶性表达。弓形虫RH株速殖子总蛋白进行的Western blotting显示:抗TgPRF多克隆抗体可识别内源性的TgPRF,且该多克隆抗体稀释至1∶10 000时仍可见明显条带;iKO-Ty-TgAPH虫株速殖子总蛋白进行的Western blotting显示:TgAPH的表达量随ATc作用时间的增加呈递减趋势,而TgPRF表达量基本维持恒定。结论本实验制备的抗TgPRF多克隆抗体特异性和效价良好,可作为衡量弓形虫特定蛋白表达量的内参抗体,也可直接检测内源性TgPRF的表达。
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关键词
刚地弓形虫
弓形虫前纤维蛋白
多克隆
抗体
内参抗体
原文传递
题名
弓形虫肌动蛋白抗原表位抗体的制备及应用
1
作者
庄宝灿
朱进进
余莉
机构
安徽医科大学病原生物学教研室、病原生物学安徽省重点实验室人畜共患病安徽高校省级重点实验室
出处
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2024年第4期73-78,共6页
基金
国家自然科学基金(81572022)。
文摘
制备弓形虫肌动蛋白(TgActin)多肽表位抗体并探讨其应用价值。BepiPred 1.0 Server在线分析设计TgActin抗原表位,并与多种属Actin进行同源比对,选取并合成高特异性多肽片段序列免疫新西兰兔。末次免疫后收集兔血清并使用Protein G纯化抗体,SDS-PAGE检测抗体纯度,ELISA测定抗体效价,Western blot分析抗体的特异性及TgActin表位抗体作为内参抗体的可能性,免疫荧光观察胞内速殖子形态。结果显示,ELISA测定抗体效价为1∶128000,Western blot结果显示抗体特异性识别弓形虫Actin,免疫荧光染色显示TgActin表位抗体可以标记纳虫泡内速殖子。结果表明,成功制备了TgActin多肽表位抗体,可用做弓形虫蛋白检测的内参抗体及其在细胞内的免疫荧光检测,为后续弓形虫研究提供了便利条件。
关键词
弓形虫
肌动蛋白
表位
抗体
内参抗体
免疫荧光
Keywords
Toxoplasma gondii
actin
epitope antibody
loading control antibody
immunofluorescence
分类号
S852.4 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
刚地弓形虫TgPRF的原核表达、多克隆抗体制备与应用
被引量:
1
2
作者
闫爱霞
邹洋
黄敏君
李晶晶
李威
田小军
贾永根
谷俊朝
机构
首都医科大学附属北京友谊医院北京热带医学研究所热带病防治研究北京市重点实验室
出处
《中国热带医学》
CAS
2019年第7期634-637,共4页
基金
北京市自然科学基金资助项目(No.7182023)
首都医科大学附属北京友谊医院科研启动基金资助项目(No.yyqdkt2017-3)
文摘
目的原核表达弓形虫TgPRF蛋白,制备多克隆抗体并评价其作为内参抗体的可行性。方法以刚地弓形虫RH株速殖子cDNA为模板,PCR扩增TgPRF编码基因,克隆至pGEX-4T-1载体,转化至大肠埃希氏菌(Escherichia coli)BL21。经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析重组蛋白表达情况。利用GST标签亲和层析法纯化重组蛋白。以纯化后蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,制备抗TgPRF多克隆抗体。收集弓形虫RH株速殖子,以制备的多克隆抗体为一抗,Western blotting检测抗体特异性及效价。收集ATc调控下不同时间点的弓形虫iKO-Ty-TgAPH虫株速殖子进行Western blotting,以抗Ty和抗TgPRF抗体为一抗,检测TgAPH和TgPRF表达量的变化。结果 SDS-PAGE显示:TgPRF在诱导4 h后表达量趋于饱和,相对分子量为52 ku,且呈可溶性表达。弓形虫RH株速殖子总蛋白进行的Western blotting显示:抗TgPRF多克隆抗体可识别内源性的TgPRF,且该多克隆抗体稀释至1∶10 000时仍可见明显条带;iKO-Ty-TgAPH虫株速殖子总蛋白进行的Western blotting显示:TgAPH的表达量随ATc作用时间的增加呈递减趋势,而TgPRF表达量基本维持恒定。结论本实验制备的抗TgPRF多克隆抗体特异性和效价良好,可作为衡量弓形虫特定蛋白表达量的内参抗体,也可直接检测内源性TgPRF的表达。
关键词
刚地弓形虫
弓形虫前纤维蛋白
多克隆
抗体
内参抗体
Keywords
Toxoplasma gondii
Profilin
polyclonal antibody
reference antibody
分类号
R382.5 [医药卫生—医学寄生虫学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
弓形虫肌动蛋白抗原表位抗体的制备及应用
庄宝灿
朱进进
余莉
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2024
0
下载PDF
职称材料
2
刚地弓形虫TgPRF的原核表达、多克隆抗体制备与应用
闫爱霞
邹洋
黄敏君
李晶晶
李威
田小军
贾永根
谷俊朝
《中国热带医学》
CAS
2019
1
原文传递
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