延边地区朝鲜族ADP-核糖基化样因子15基因和内向整流通道蛋白J亚单位11号成员基因的基因单核苷酸多态与2型糖尿病的相关性

[目的]探讨ADP-核糖基化样因子15基因(ARL15)和内向整流通道蛋白J亚单位11号成员基因(KCNJ11)的单核苷酸多态(SNP)位点rs26770、rs5219与延边地区朝鲜族2型糖尿病(T2DM)的相关性.[方法]采用病例对照设计,选择延边地区朝鲜族307例,其中T2DM患者255例、糖耐量正常(NGT)人52例.利用单碱基延伸方法检测rs26770、rs5219的基因型.[结果]在显性遗传模型中,T2DM组KCNJ11基因携带rs5219位点的TT+CT基因型频率显著高于NGT组(P=0.001,OR=2.917, 95%CI:1.531~5.558);2个SNPs联合作用结果显示,T2DM组携带AA-CC和AG-CC联合基因型明显小于NGT组(P=0.008,OR=0.320, 95%CI:0.133~0.770;P=0.012,OR=0.357,95%CI:0.156~0.817).[结论]KCNJ11基因rs5219-T可能是延边地区朝鲜族人群罹患T2DM的易感因子,而携带KCNJ11和ARL15基因SNPs rs26770、rs5219的联合基因型AA-CC和AG-CC可能具有保护健康人群罹患T2DM的作用.

内向整流钾通道J亚家族成员5基因C171T变异与原发性醛固酮增多症患者低血钾的相关性

目的探讨内向整流钾通道J亚家族成员5（KCNJ5）基因C171T变异与低血钾原发性醛固酮增多症（原醛）的相关性。方法将原醛患者364例分为低血钾组（n=115）和正常血钾组（n=249），应用TaqManPCR技术对C171T变异在所有原醛患者中进行分型，分析C171T变异与低血钾的相关性。结果KCNJ5基因C171T变异在所有原醛患者中成功分型，其基因型、等位基因的分布符合Hardy—Weinberg平衡；在总体及女性患者中，两组患者C171T变异的基因型、等位基因及显性模型的频率分布差异有统计学意义（P〈0．05）；校正年龄、吸烟、饮酒和体质量指数后，Logistic回归分析显示KCNJ5基因C171T变异的CT＋TT型是女性原醛患者发生低血钾的危险因素（OR=2．499，95％CI 1．168～5．349，p=0．018）；在女性患者中，与CC型相比，CT＋TT型的血钾水平减低，而血清醛固酮水平增高（均P〈0．05）。结论KCNJ5基因的C171T变异与女性低血钾原醛相关。

KCNJ15在肺腺癌组织中的表达及其对细胞增殖迁移的影响

目的探讨内向整流钾通道J亚家族成员15(KCNJ15)在肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌A549细胞增殖和迁移的影响。方法收集本院2006年7月至2015年10月经手术切除的肺腺癌组织117例和癌旁组织50例,采用实时定量PCR法检测以上组织中KCNJ15 mRNA水平,分析肺腺癌组织KCNJ15 mRNA水平与临床病理特征(性别、年龄、肿瘤大小、临床分期、肿瘤位置、淋巴结转移和病理分级)的关系,根据随访资料分析不同KCNJ15 mRNA水平的预后情况。构建过表达KCNJ15的载体并转染A549细胞,采用CCK-8法和Transwell试验分析KCNJ15基因在肺腺癌细胞增殖和迁移中的功能。结果与癌旁组织相比,肺腺癌组织中KCNJ15 mRNA水平降低(P<0.05);KCNJ15表达与肺腺癌患者的肿瘤大小和临床分期有关(P<0.05),与年龄、病理分级、性别、淋巴结转移和肿瘤位置无关(P>0.05);KCNJ15高表达的肺腺癌患者的总生存期长于低表达者;获得性功能实验结果表明,KCNJ15基因过表达能够抑制肺腺癌细胞的增殖和迁移能力。结论 KCNJ15基因在肺腺癌中的表达明显降低,其表达与肺腺癌患者的肿瘤大小和临床分期有关,在肺腺癌患者生存中是一个重要的有利预后标志物,可作为潜在的肺腺癌临床治疗新靶标。

KCNJ15诱导钙离子内流促进T细胞分泌白介素17实验研究

目的:探讨内向整流钾通道J亚家族成员-15(KCNJ15)对HBV诱导的慢加急性肝衰竭患者T细胞的作用及机制。方法:构建人KCNJ15真核表达质粒,电转染Jurkat细胞系,采用Cytometric Bead Array(CBA)试剂盒检测Jurkat细胞上清液Th1/Th2/Th17及IL-9等细胞因子表达水平;流式细胞术检测细胞内钙离子浓度。结果:人KCNJ15真核表达质粒转染Jurkat细胞后,与对照组相比,KCNJ15在基因水平(10^(5.51±0.58)比10^(1.41±1.16),P=0.001)和蛋白水平表达明显增强,Jurkat细胞分泌细胞因子IL-17A的水平显著升高[(9.55±1.06)pg/ml比(5.77±1.32)pg/ml,P=0.005];转染后24h细胞内钙离子浓度显著增高[(0.15±0.05)μmol/L比(0.06±0.01)μmol/L,P=0.005]。结论:过表达KCNJ15可能通过促进钙离子内流增强T细胞分泌IL-17,从而参与免疫诱导肝脏损伤的病理过程。

上海地区胰岛功能不足的2型糖尿病患者钾离子内向整流通道蛋白船KCNJ11基因突变筛查

目的 了解上海地区胰岛功能不足的糖尿病患者钾离子内向整流通道蛋白J亚单位11号成员（KCNJ11）基因突变的发生情况.方法 选取上海市第六人民医院内分泌代谢科住院2型糖尿病患者41例,其中男30例,女11例,平均年龄（57±12）岁,胰岛β细胞自身抗体谷氨酸脱羧酶（GAD）、酪氨酸磷酸酶（IA2）检查阴性且糖耐量试验空腹C肽均≤0.20μg/L.应用聚合酶链反应直接测序法进行基因突变筛查.用卡方检验来比较本实验得出的基因型频率与国际人类基因组单体型图计划（HapMap）中国人数据库是否存在差异.结果 在1例患者中见到1个同义突变（即S274S）.此外,还发现4个变异位点,分别为rs5215、rs5218、rs5219、rs1800854.4个位点的等位基因频率与HapMap中国人数据库比对差异无统计学意义（x2值依次为0.010、0.391、0.025、0.407,均P＞0.05）.结论 KCNJ11基因突变可能不是糖尿病患者胰岛功能低下的主要原因.

猪新基因KCNJ12编码区电子克隆、RT-PCR验证和组织表达分析

通过NCBI下载猪近缘物种的KCNJ12基因序列,在线BLAST比对获得猪EST序列、参考基因组序列和高通量基因组序列。利用Lasergene软件电子克隆猪KCNJ12基因编码区序列及部分侧翼序列。针对编码区设计特异引物并以版纳微型猪近交系BMI为研究材料进行试验验证,同时应用半定量RT-PCR技术对BMI 31种重要组织进行了表达分析。研究获得了猪KCNJ12 1 290 bp的编码区序列(GenBank登录号:KC505155,对应的氨基酸登录号:AGK36093)。生物信息学分析表明,该基因编码429个氨基酸,预测的蛋白质分子量(Mw)为48.63 kDa,等电点(pI)为5.66。蛋白质结构分析显示,KCNJ12存在2个保守域,3个跨膜结构域,无信号肽;疏水性分析表明其N端和C端均具有亲水性;亚细胞定位显示,该蛋白位于细胞质的概率是94.1%。系统进化分析表明,猪与牛、羊的亲缘关系最近。组织表达分析表明,KCNJ12基因在31个被检组织中存在明显的表达差异,在小脑中高表达;在肌肉、结肠、盲肠、食管、皮肤、大脑、下丘脑及脊髓中中度表达;在胸腺、肝、直肠及脑干中低表达;在颌下腺、睾丸、甲状腺、附睾、肺、心、脾、肾上腺、淋巴结、肾、胰脏、十二指肠、空肠、回肠、胃、垂体、松果体及舌下腺中不表达。研究结果为该基因在猪中的功能研究提供依据。

早搏灵对乌头碱诱导心律失常大鼠心肌组织KCNJ2表达的影响

目的:通过观察早搏灵对乌头碱诱导的心律失常大鼠的心肌KCNJ2(内向整流钾通道J亚家族成员2)基因表达的影响,探讨复方中药早搏灵抗心律失常的作用机理。方法:选用健康大鼠40只随机分4组,正常对照组、模型组、早搏灵组和胺碘酮;连续给药1周后,除正常组外其余各组大鼠舌静脉注射乌头碱造模,同时描记大鼠心电图变化,采用实时荧光定量PCR技术观察心肌组织KCNJ2基因表达的变化。结果:与模型组比较,早搏灵组和胺碘酮组早搏、室速出现时间均明显延迟(P<0.05),早搏灵组和胺碘酮组比较无明显差异(P>0.05);早搏灵组室颤出现时间与模型组比较无明显差异(P>0.05)。与正常组比较,模型组大鼠心肌组织KCNJ2基因表达明显降低(P<0.05),早搏灵组、胺碘酮组KCNJ2基因表达与模型组比较明显提高(P<0.05),早搏灵组和胺碘酮组比较无明显差异(P>0.05)。结论:早搏灵胶囊可延迟乌头碱诱导的大鼠早搏、室速出现时间,上调心肌组织KCNJ2基因表达。

DPP-4抑制剂的药物遗传学研究进展

二肽酰肽酶-4(DPP-4)抑制剂是口服抗高血糖药,可有效控制2型糖尿病患者的血糖水平。DPP-4抑制剂的治疗作用涉及若干与β细胞功能和细胞凋亡相关的基因。本文将综述DPP-4抑制剂的药物遗传学信息,探讨遗传变异如何影响DPP-4抑制剂的治疗应答,有助于个性化医疗的发展。