内含子源性27nt-miRNA对内皮型一氧化氮合酶表达调节及血管内皮细胞管腔形成的影响

目的:探讨内含子源性27nt-miRNA对内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达调节的分子机制及其对血管内皮细胞增殖、迁移和管腔形成能力的影响。方法:构建wt-27nt-miRNA、mut-27nt-miRNA和空白对照序列的高表达质粒,分别转染人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),采用RT-PCR、Western blotting检测eNOS mRNA和蛋白表达水平;MTT检测HUVECs增殖能力,划痕和Transwell实验检测HUVECs的迁移能力,Matrigel检测HUVECs的管腔形成能力。结果:(1)与空白质粒对照组比较,wt-27nt-miRNA表达组HUVECs eNOS mRNA降低39.51%(0.49±0.02vs 0.81±0.02,P<0.05),其蛋白质表达量下降47.41%(0.71±0.07vs 1.35±0.06,P<0.05)。(2)与空白质粒对照组相比,wt-27nt-miRNA表达组HUVECs增殖明显减少,抑制率为41.86%;wt-27nt-miRNA表达组HUVECs迁移速度明显减缓,且迁移数目降低75.55%(28.75±1.71vs117.60±4.45,P<0.01),未能形成明显管腔样结构。在mut-27nt-miRNA表达组中,上述指标比空白质粒对照组降低(P<0.05),但比wt-27nt-miRNA表达组显著升高(P<0.05),特别是管腔形成数量及管腔长度与空白质粒对照组相近。结论:内含子源性27nt-miRNA显著抑制HUVECs的增殖、迁移和管腔形成的能力,并与内含子源性27nt-miRNA对eNOS表达的调控相关。

27nt-miRNA对血管平滑肌细胞SM22α表达的调节及其对细胞活力、迁移和表型改变的影响

目的:探讨27nt-微小RNA(27nt-miRNA)对血管平滑肌细胞(VSMCs)中平滑肌22α蛋白(SM22α表达的调节及其对细胞活力、迁移和表型改变的影响。方法:构建27nt-miRNA高表达、反义序列(anti-27nt-miRNA)以及阴性对照的表达质粒,经慢病毒包装后分别转染大鼠原代VSMCs,加入血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)诱导VSMCs表型转换。MTT实验检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学染色法检测细胞中SM22α的mRNA和蛋白表达情况。结果:与正常组相比,PDGF-BB组的细胞活力上升(P <0.05)、迁移能力上升(P <0.05),SM22α的mRNA及蛋白表达量下降(P <0.05);与阴性对照慢病毒组相比,27nt-miRNA高表达组的细胞活力下降(P <0.05),迁移能力下降(P <0.05),SM22α的mRNA及蛋白表达量明显升高(P <0.05);而anti-27nt-miRNA组细胞的细胞活力上升(P <0.05),迁移能力上升(P <0.05),SM22α的mRNA及蛋白表达量下降(P <0.05)。结论:27nt-miRNA促进SM22α表达,同时抑制VSMCs的活力及迁移,并有可能抑制VSMCs从收缩型转变为合成型。