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含有分裂型内含肽DnaE基因的表达盒设计、合成及高效表达载体的构建
被引量:
1
1
作者
赵珺
王洋
+4 位作者
师明磊
王东
田靖
耿排力
赵志虎
《生物技术通讯》
CAS
2010年第6期751-756,共6页
目的:建立一种简便、快捷的基因从头设计、优化与合成策略,进行含有分裂型内含肽DnaE基因的表达盒全合成并构建高效表达载体。方法:以免费软件GeneDesign 3.0为主要平台,同时结合Tandem Repeats Finder、UNAFold等不同生物信息学软件,...
目的:建立一种简便、快捷的基因从头设计、优化与合成策略,进行含有分裂型内含肽DnaE基因的表达盒全合成并构建高效表达载体。方法:以免费软件GeneDesign 3.0为主要平台,同时结合Tandem Repeats Finder、UNAFold等不同生物信息学软件,对含有DnaE基因、合适酶切位点的表达盒进行设计与分段合成;合成寡核苷酸片段通过重叠PCR进行组装与克隆。结果:利用建立的设计流程,合成了大小为44~64 nt的14段寡核苷酸片段,通过重叠PCR,实现了14段寡核苷酸片段的一次性组装,经过克隆、酶切鉴定、序列分析得到了序列完全正确的表达载体。结论:建立了一套有效的、基于免费软件的基因从头设计与合成的策略,构建了可以用于环肽小分子文库表达与筛选的表达载体。
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关键词
内含肽dnae
基因设计与合成
生物信息学
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职称材料
蓝细菌分离DnaE内含肽的自我剪接研究
被引量:
2
2
作者
魏新元
丑敏霞
+1 位作者
闻盼盼
刘东斌
《西北农林科技大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2009年第2期160-164,共5页
【目的】证实蓝细菌Anabaenasp.PCC 7120复制酶中分离的DnaE内含肽的自我剪接活性。【方法】分别将AnabaenaPCC 7120中分离的2个dnaE基因的部分序列克隆到表达载体上,获得重组表达质粒,经超量表达和纯化后,免疫家兔获得相应的抗体;同时...
【目的】证实蓝细菌Anabaenasp.PCC 7120复制酶中分离的DnaE内含肽的自我剪接活性。【方法】分别将AnabaenaPCC 7120中分离的2个dnaE基因的部分序列克隆到表达载体上,获得重组表达质粒,经超量表达和纯化后,免疫家兔获得相应的抗体;同时,两段分离的dnaE序列被克隆到同一表达载体,构建双重组表达质粒,两段序列具有各自的ORF,但由同一启动子调控。双重组表达质粒经诱导之后,利用以上获得的抗体对含有内含肽的DnaE蛋白在大肠杆菌表达体系中的自我剪接反应进行检测。【结果】在双重组表达质粒的表达产物中,抗体不仅可以分别与对应的蛋白质反应,而且还可以同时识别1条新条带,该条带的表观分子量与成熟DnaE的理论值大致相符。【结论】蓝细菌分离的DnaE内含肽在大肠杆菌表达体系中可以进行自我剪接;本研究中获得的抗体具有较好的特异性,无明显背景干扰,而且效价高,抗体可以稀释1 000倍以上使用,也可以用于相关方面的研究。
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关键词
dnae
内含
肽
重组表达质粒
自我剪接
蓝细菌
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职称材料
通过断裂内含肽介导的反式剪接合成大的蛋白
被引量:
1
3
作者
张静
刘环
+1 位作者
周晶
刘建华
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第12期74-78,共5页
大肠杆菌难以表达大的蛋白,毒性蛋白以及膜蛋白,"Npu DnaE内含肽表达系统"使这些蛋白的表达成为可能。该系统的基本原理是:在特定位点处将目标基因(编码T7 RNA聚合酶的基因)断裂成两部分,然后分别与Npu DnaE内含肽的N端,C端...
大肠杆菌难以表达大的蛋白,毒性蛋白以及膜蛋白,"Npu DnaE内含肽表达系统"使这些蛋白的表达成为可能。该系统的基本原理是:在特定位点处将目标基因(编码T7 RNA聚合酶的基因)断裂成两部分,然后分别与Npu DnaE内含肽的N端,C端片段融合,两种融合基因分别表达纯化,在体外将两种融合蛋白等摩尔比混合即可产生有功能的T7 RNA聚合酶。理论上,该体系也可用于合成其他大的蛋白,毒性蛋白或膜蛋白。
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关键词
大的蛋白
毒性蛋白
膜蛋白
NPU
dnae
内含
肽
T7
RNA聚合酶
原文传递
题名
含有分裂型内含肽DnaE基因的表达盒设计、合成及高效表达载体的构建
被引量:
1
1
作者
赵珺
王洋
师明磊
王东
田靖
耿排力
赵志虎
机构
青海大学医学院基础医学部
军事医学科学院生物工程研究所
出处
《生物技术通讯》
CAS
2010年第6期751-756,共6页
文摘
目的:建立一种简便、快捷的基因从头设计、优化与合成策略,进行含有分裂型内含肽DnaE基因的表达盒全合成并构建高效表达载体。方法:以免费软件GeneDesign 3.0为主要平台,同时结合Tandem Repeats Finder、UNAFold等不同生物信息学软件,对含有DnaE基因、合适酶切位点的表达盒进行设计与分段合成;合成寡核苷酸片段通过重叠PCR进行组装与克隆。结果:利用建立的设计流程,合成了大小为44~64 nt的14段寡核苷酸片段,通过重叠PCR,实现了14段寡核苷酸片段的一次性组装,经过克隆、酶切鉴定、序列分析得到了序列完全正确的表达载体。结论:建立了一套有效的、基于免费软件的基因从头设计与合成的策略,构建了可以用于环肽小分子文库表达与筛选的表达载体。
关键词
内含肽dnae
基因设计与合成
生物信息学
Keywords
intein
dnae
gene design and synthesis
bioinformatics
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
蓝细菌分离DnaE内含肽的自我剪接研究
被引量:
2
2
作者
魏新元
丑敏霞
闻盼盼
刘东斌
机构
西北农林科技大学食品科学与工程学院
西北农林科技大学生命科学学院
出处
《西北农林科技大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2009年第2期160-164,共5页
基金
西北农林科技大学人才基金项目
文摘
【目的】证实蓝细菌Anabaenasp.PCC 7120复制酶中分离的DnaE内含肽的自我剪接活性。【方法】分别将AnabaenaPCC 7120中分离的2个dnaE基因的部分序列克隆到表达载体上,获得重组表达质粒,经超量表达和纯化后,免疫家兔获得相应的抗体;同时,两段分离的dnaE序列被克隆到同一表达载体,构建双重组表达质粒,两段序列具有各自的ORF,但由同一启动子调控。双重组表达质粒经诱导之后,利用以上获得的抗体对含有内含肽的DnaE蛋白在大肠杆菌表达体系中的自我剪接反应进行检测。【结果】在双重组表达质粒的表达产物中,抗体不仅可以分别与对应的蛋白质反应,而且还可以同时识别1条新条带,该条带的表观分子量与成熟DnaE的理论值大致相符。【结论】蓝细菌分离的DnaE内含肽在大肠杆菌表达体系中可以进行自我剪接;本研究中获得的抗体具有较好的特异性,无明显背景干扰,而且效价高,抗体可以稀释1 000倍以上使用,也可以用于相关方面的研究。
关键词
dnae
内含
肽
重组表达质粒
自我剪接
蓝细菌
Keywords
dnae
intein
recombinant expressing plasmid
self splicing
cyanobacteriun
分类号
Q503 [生物学—生物化学]
下载PDF
职称材料
题名
通过断裂内含肽介导的反式剪接合成大的蛋白
被引量:
1
3
作者
张静
刘环
周晶
刘建华
机构
上海交通大学生命科学技术学院
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第12期74-78,共5页
基金
国家"973"计划子课题(2007CB914500)资助项目
文摘
大肠杆菌难以表达大的蛋白,毒性蛋白以及膜蛋白,"Npu DnaE内含肽表达系统"使这些蛋白的表达成为可能。该系统的基本原理是:在特定位点处将目标基因(编码T7 RNA聚合酶的基因)断裂成两部分,然后分别与Npu DnaE内含肽的N端,C端片段融合,两种融合基因分别表达纯化,在体外将两种融合蛋白等摩尔比混合即可产生有功能的T7 RNA聚合酶。理论上,该体系也可用于合成其他大的蛋白,毒性蛋白或膜蛋白。
关键词
大的蛋白
毒性蛋白
膜蛋白
NPU
dnae
内含
肽
T7
RNA聚合酶
Keywords
Large cytotoxic or membrane proteins
Npu
dnae
intein
T7 RNA polymerase
分类号
Q819 [生物学—生物工程]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
含有分裂型内含肽DnaE基因的表达盒设计、合成及高效表达载体的构建
赵珺
王洋
师明磊
王东
田靖
耿排力
赵志虎
《生物技术通讯》
CAS
2010
1
下载PDF
职称材料
2
蓝细菌分离DnaE内含肽的自我剪接研究
魏新元
丑敏霞
闻盼盼
刘东斌
《西北农林科技大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2009
2
下载PDF
职称材料
3
通过断裂内含肽介导的反式剪接合成大的蛋白
张静
刘环
周晶
刘建华
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009
1
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