基于Raf/MEK/ERK信号通路探讨内异康复片对hEM15A细胞的影响

目的探讨内异康复片对子宫内膜异位症(EMT)内膜间质细胞hEM15A的影响。方法制备内异康复片含药血清,将hEM15A细胞分为空白对照组,阴性对照组,5%、10%、20%含药血清组。采用CCK-8法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞迁移,Western blo法检测RKIP及Raf/MEK/ERK通路相关蛋白表达。再将hEM15A细胞分为阴性对照组、10%含药血清组、si-RKIP-1组、si-RKIP-1+10%含药血清组,观察上述检测指标的变化。结果与阴性对照组比较,各浓度含药血清组hEM15A细胞活性降低(P<0.05),凋亡率、RKIP蛋白表达升高(P<0.05);10%及20%含药血清组hEM15A细胞迁移数、p-MEK及p-ERK1/2蛋白表达降低(P<0.05),p-Raf蛋白表达降低(P<0.05)。与阴性对照组比较,si-RKIP-1组hEM15A细胞活性、迁移数升高(P<0.05),RKIP蛋白表达降低(P<0.05),p-Raf、p-ERK1/2、p-MEK蛋白表达升高(P<0.05);与10%含药血清组比较,si-RKIP-1+10%含药血清组hEM15A细胞活性、迁移数升高(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05),RKIP蛋白表达降低(P<0.05),p-Raf、p-MEK、p-ERK1/2蛋白表达升高(P<0.05)。结论内异康复片可能通过调节RKIP及其介导的Raf/MEK/ERK信号通路抑制hEM15A细胞活性和迁移,促进ESC凋亡,发挥改善EMT的作用。

内异康复片调控GPER-Ras-STAT3通路治疗子宫腺肌病的机制

目的探究内异康复片(鳖甲、牡蛎、大黄,等)对子宫腺肌病的治疗作用及其可能作用机制。方法通过异体垂体移植手术建立小鼠子宫腺肌病模型,采用不同剂量的内异康复片、丹莪妇康煎膏(丹参、莪术、赤芍,等)和孕三烯酮分别给药治疗,灌胃治疗3个月后取样,应用Western blot、real-time PCR、免疫组化SP法检测在位和异位内膜上的GPER-Ras-STAT3通路的表达。结果高剂量的内异康复片可以显著下调GPER蛋白(G蛋白偶联雌激素受体蛋白)和基因的表达,下调Ras和STAT3(信号转导和转录激活因子3)的蛋白表达,降低异位病灶严重程度的组织形态学评分,且其疗效优于丹莪妇康煎膏和孕三烯酮。结论内异康复片可能通过抑制GPER-Ras-STAT3通路活性,弱化雌激素的生成,从而控制异位病灶的发展。

内异康复片对EM大鼠血清及异位内膜细胞中ARO、COX-2、E_2水平的影响

目的:研究内异康复片对子宫内膜异位症(EM)模型大鼠血清中aromatase(ARO)、COX-2、E2的影响,探讨内异康复片治疗EM的机理。方法:体内实验采用手术方法建立EM模型大鼠,大鼠按随机数字表法分为内异康复片高、中、低剂量组、来曲唑组、去势组、模型空白对照组6组;造模成功3周后,给予内异康复片进行干预3周,检测大鼠血清中ARO、COX-2、E2;体外实验从造模成功的EM大鼠上取出大鼠腹腔内异位内膜组织,分离异位内膜细胞进行体外培养,并给予内异康复片干预48 h后,检测细胞培养液中ARO、COX-2、E2的水平。结果:体内外实验结果显示,内异康复片高剂量组、中剂量组可明显降低EM大鼠血清中ARO、COX-2、E2(P<0.05;P<0.01);内异康复片可明显降低异位内膜细胞分泌的ARO、COX-2、E2(P<0.05;P<0.01),体内体外实验结果相似。结论:内异康复片临床治疗EM的机理可能与其抑制异位内膜细胞ARO、COX-2的分泌和降低E2水平相关。

内异康复片对子宫内膜异位症异位和在位内膜血管形成相关因子的实验研究

目的探讨内异康复片对子宫内膜异位症(EMT)大鼠异位和在位内膜血管形成的不同影响,揭示内异康复片治疗EMT的作用机理。方法建立大鼠EMT模型,随机分为内异康复片高、中剂量组、丹那唑组、丹莪妇康煎膏组、模型组和空白组,采用免疫组化SP法染色,半定量检测血管内皮生长因子(VEGF)、内皮抑制素(ENS)在异位和在位内膜中的表达,并通过CD31标记异位子宫内膜血管内皮细胞,测定其微血管密度(MVD)。结果内异康复片高、中剂量组均能显著降低EMT大鼠异位内膜VEGF的表达(P<0.01),升高ENS的表达(P<0.01),并能显著降低EMT大鼠异位内膜血管内皮生长因子/内皮抑制素(V/E)值、MVD(P<0.01)和微血管数目(P<0.05),而对大鼠在位内膜V/E值、MVD及微血管数目的表达与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论内异康复片可能通过对血管形成过程的影响,抑制异位内膜组织血管的生成,促进异位病灶消退,同时使血管形成刺激因子和抑制因子之间相互平衡,但不抑制在位内膜正常血管增生的生理过程。内异康复片可降低异位子宫内膜微血管密度(MVD),可能与异位内膜组织血管生成受到抑制有关。

内异康复片对子宫腺肌病小鼠雌激素效应因子P450arom、COX-2的时空变化影响

目的在临床应用内异康复片治疗子宫腺肌病取得明显疗效和前期实验研究的基础上,应用同种异体垂体移植方法建立子宫腺肌病动物模型,采用免疫组化技术检测P450arom、COX-2在治疗前后各组小鼠子宫在位及异位内膜上表达差异。方法选取8周龄ICR雌鼠62只,异体垂体移植方法造模,之后随机设模型组、内异康复片高、中、低剂量组、丹莪妇康煎膏组、孕三烯酮组。3个月后分别灌胃给药,持续3个月,免疫组化方法观察治疗前后子宫在位及异位内膜上P450arom、COX-2表达情况。结果 P450arom、COX-2表达在不同治疗方法治疗后均下降,内异康复片高剂量组优于其他各治疗组,与模型组比较,具有显著差异(P<0.001),而且各组间比较均有统计学意义(P<0.01)。结论内异康复片能够通过下调在位及异位内膜雌激素效应因子P450arom、COX-2表达,阻断雌激素生成的正反馈环来抑制其产生,从而控制和治疗子宫腺肌病,缓解临床症状。

内异康复片对EMT大鼠VEGF、MMP-9、HGF及Wnt4、Wnt5α的调控机制研究

目的:分析内异康复片对子宫内膜异位症(EMT)大鼠异位内膜黏附、浸润及增生的调控作用,并探讨其作用机制。方法:建立子宫内膜异位症大鼠模型,随机分为模型对照组、阳性对照组、中药低、中、高剂量组,每组10只。治疗3周后,测量各组大鼠异位内膜体积;另取模型动物的异位内膜组织,分离异位内膜细胞,体外培养,设空白对照组、阳性对照组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组,每组4个复孔。采用ELISA法测定血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP)、肝细胞生长因子(HGF)含量;Western Blot检测Wnt4、Wnt5α的表达。结果:动物实验结果:与模型对照组比较,中药各剂量组、阳性对照组的异位内膜体积显著缩小,异位内膜厚度变薄,腺体面积减少,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05);中药高剂量组、阳性对照组的腺体数目显著少于模型对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);中药高剂量组VEGF、MMP-9含量显著低于模型对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞实验结果:中药低、中、高各剂量组培养上清液的VEGF含量显著低于空白对照组,中药高剂量组MMP-9含量显著低于空白对照组,中药高剂量组和阳性对照组Wnt4、Wnt5α表达水平均显著低于空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:内异康复片治疗EMT的机理可能与抑制异位内膜细胞分泌VEGF、MMP-9,以及调节Wnt信号转导通路有关。

探究内异康复片对子宫腺肌病的治疗作用及其可能作用机制

目的对内异康复片对子宫腺肌病的治疗作用及其可能的作用机制展开分析和研究。方法选取2017年1月～2018年1月郑州大学附属洛阳中心医院收治的子宫腺肌病患者中选择90例作为本次研究对象,对患者按照随机数表法分组,观察组患者在常规西医治疗的基础上同步接受内异康复片的治疗,对照组患者仅接受西医常规治疗。治疗完成后,对比两组患者各自的临床疗效。结果观察组患者治疗结束后的各项疗效评价指标优于对照组患者,差异有统计学意义(P <0.05),两组患者不良反应总发生率无显著差异(P> 0.05)。结论内异康复片是治疗子宫腺肌病的有效药物,其主要作用机制在于对GPER、Ras以及STA的蛋白水平进行下调,对Ras.sTAT3信号通路的活性进行抑制,值得临床进一步应用。

内异康复片对子宫腺肌病小鼠P450arom-COX-2-PGE2正反馈环的调控机制的研究

目的:通过观察P450arom、环氧化酶2(COX-2)、前列腺素E2(PGE2)在子宫腺肌病(AM)治疗前后随动情周期变化的表达差异,及其各组在位及异位内膜上的表达差异,研究内异康复片治疗AM的作用靶点,以探索内异康复片治疗AM的作用机制。方法:采用异体垂体移植的手术方法造模,采用免疫组化方法,观察各组在动情期和间情期及治疗前后在位及异位内膜雌激素效应相关因子的表达。结果:P450、PGE2、COX-2的表达,在6月模型组和3月模型组显著高于正常组(P<0.01),且6月模型组高于3月模型组(P<0.05)。3个指标的表达在不同治疗组治疗后有所下降(P<0.05,P<0.01),且内异康复片高剂量组优于其它各治疗组。动情期指标表达高于间情期(P<0.05)。结论:内异康复片能够通过下调在位及异位内膜雌激素效应相关因子P450、COX-2、PGE2表达,阻断雌激素生成的正反馈环,抑制雌激素对异位病灶的影响效应,从而控制和治疗AM,缓解临床症状。

清湿化瘀法对子宫腺肌病小鼠雌激素效应因子PTEN、P-P65的时空变化影响

目的在以清湿化瘀为治法的内异康复片被广泛应用于治疗子宫腺肌病(AM)和前期实验研究的基础上,运用同种异体垂体植入子宫的方法建立AM实验模型,采用免疫组化的技术检测PTEN、P-P65在AM治疗前后各组小鼠在位及异位子宫内膜上的表达差异,探究AM的发病机制。方法采用异体垂体移植法造模,随机设内异康复片低、中、高剂量组,孕三烯酮组,丹莪妇康煎膏组,模型组。饲养3月后分别灌胃3月治疗,免疫组化法观察治疗前后在位、异位子宫内膜上PTEN、P-P65差异。结果不同方法治疗后PTEN表达均增高,显著高于模型组(P<0.001),内异康复片高剂量组优于其他各治疗组(P<0.001);P-P65表达均下降,显著低于模型组(P<0.001),内异康复片高剂量组优于其他各治疗组(P<0.001)。结论内异康复片可上调PTEN,下调P-P65的表达,从而达到控制和治疗子宫腺肌病及其临床症状的目的。