一步法胞内染色在临床检测Th1和Th2细胞中的应用

【目的】探讨一步法破膜剂(Per Fix-nc)进行胞内染色在流式细胞术临床检测Th1和Th2细胞中的应用。【方法】取10例健康儿童(HV)外周全血刺激培养,分别采用Per Fix-nc与两步法破膜剂固定破膜染色,用流式细胞术检测CD3+CD8-细胞中的Th1%和Th2%,比较两种破膜剂检测Th1和Th2细胞有无差异,并进行方法一致性检验。并随机选取一例HV样本进行重复性试验。用10例儿童再生障碍性贫血(AA)患者的Th1%和Th2%对实验条件进行验证。【结果】Per Fixnc和两步法破膜剂相比,HV中检测出的Th1细胞百分比分别为20.10(15.59-24.78)%和19.57(16.73-25.26)%(P>0.05),其相关系数r=0.777(P<0.01);Th2细胞百分比分别为1.83(1.52-2.38)%和1.87(1.43-2.42)%(P>0.05),其相关系数r=0.875(P<0.01)。重复性试验中,样本的Th1和Th2细胞百分比均值分别为(17.88±1.75)%、(1.47±0.13)%,CV分别为9.8%、8.8%。儿童AA患者的Th1和Th2细胞分别为(32.3±6.06)%、(1.55±0.34)%,Th1和Th2细胞较儿童HV组有非常显著性差异(P<0.01)。【结论】一步法(Per Fix-nc)与两步法破膜剂之间有较好的相关性,在简化破膜操作流程的同时,能达到较两步法更好的细胞分群,为临床上Th1和Th2细胞的日常检测和进一步研究提供了较好的实验条件。

荧光逆行追踪结合离体固定脑片细胞内染色技术

本文介绍一种简便易行并可在光、电镜下研究单个神经元形态和神经元回路的方法。此法主要包括荧光逆行标记、固定脑片细胞内电泳ＬｕｃｉｆｅｒＹｅｌｌｏｗ和ＤＡＢ光转化三个步骤。它主要具有以下优点；（１）利用送行追踪确定神经元投射部位；（２）进一步细胞内注射可充分显示神经元的树突构筑，尤其是远端树突和树突棘；（３）经ＤＡＢ转化的神经元形象能长久保存，克服了荧光易褪色的缺点，可供详细观察和分析；（４）转化后的细胞，因已经过良好固定，结构保存较好；故可在电镜下进一步观察研究；（５）结合免疫荧光，通过Ｃｏｎｆｏｃａｌ显微镜可更清晰地观察ＬｕｃｉｆｅｒＹｅｌｌｏｗ标记的细胞与其它神经纤维的联系；（６）此外还可用于病理检查的标本，研究人体脑组织神经元的形态特征。为此，此方法不失为一种研究单个神经元形态（尤其是树突构筑）和神经元回路的良好方法。

腹腔神经节单个神经元的HRP细胞内染色

以豚鼠腹腔神经节为标本,应用离体神经节细胞内记录技术测量了37个神经元的基本电学参数;应用HRP细胞内染色技术在光镜下显示了10个神经元的形态;提出了在离体神经节单个神经元的HRP细胞内染色技术中避免HRP反应性红细胞的简便、可行方法。

金属烤瓷内染色技术再现上颌中切牙色彩

目的 探索再现上颌中切牙色彩新方法。方法 作者 1995～ 1998年间采用内染色技术为 2 2单位行金属烤瓷修复的患者再现上颌中切牙的色彩。结果 2 2单位采用内染色技术再现上颌中切牙色彩是成功的。结论 与混色法、插色法和外染色相比 ,内染色技术是目前一种较为理想 ,切实可行表达上颌中切牙各种色彩的方法。

怎样防止浆内染色之染料污染

前言 造纸染色用的合成有机染料,大多由苯、萘、蒽经化学处理成苯胺、甲苯胺等中间物转化而成.这些物质一旦随白水流人江河,将是对水资源的严重污染,甚至会造成对人体致癌的重大危害.

细胞内染色检测人类免疫缺陷病毒特异性γ干扰素的产生

细胞免疫反应在控制人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)感染的传播中发挥着重要的作用，它是通过裂解感染的细胞以及产生强有力的抗病毒细胞因子(如γ干扰素(IFN-γ)]起作用的，而流式细胞技术已被广泛用于检测HIV感染引起的免疫反应中T细胞亚群CD4和CD8细胞经抗原刺激后产生的IFN—

阳离子田菁胶助染剂对纸浆纤维染色效果的影响

为实现无盐染色,本实验引入阳离子田菁胶作为助染剂,通过增强染料与纸浆纤维间的吸附作用,经济环保地提高了浆内染色效果。结果表明,阳离子田菁胶作为直接耐晒翠兰(GL)染料的助染剂效果良好。光学显微镜与扫描电子显微镜观察表明GL染料、纸浆纤维、阳离子田菁胶结合紧密。通过单因素实验探究阳离子田菁胶用量、染色温度、染液pH值对纸浆纤维染色效果的影响,确定了最佳助染工艺条件为:阳离子田菁胶用量0.2%,染色温度45℃,染液pH值3,该条件下上染率可达92.6%。建立染色吸附动力学模型和染色吸附等温线可知,染色时间对染色效果影响较小,适当提高染液初始浓度可有效提高染色效果。

大鼠发育过程中视皮层神经元电生理与形态学特性的相关性——细胞内染色研究

目的 研究大鼠不同发育阶段视皮层神经元电生理学与形态学特性的关系 ,观察电生理特性和形态变化的同步化程度 ,认识正常视觉发育的细胞内机制。方法 应用脑片膜片钳全细胞记录技术和细胞内标记相结合的方法 ,获得 4～ 2 8d Sprague- Dawleg(SD)大鼠视皮层神经元的细胞内微电极记录 ,再进行细胞内标记和组织学染色。 结果 成功标记 2 3例细胞 ,其中锥体细胞与非锥体细胞在电生理特性上差异有显著性。不同发育阶段视皮层神经元形态学上的成熟度不同。 结论 1视觉发育过程中 ,视皮层锥体细胞和非锥体细胞的电生理学特性反映其参与不同的视皮层神经元回路的整合功能。 2视觉发育可塑性关键期内 ,视皮层神经元形态和电生理特性变化的同步化程度大于视皮层下结构。

应用胞内染色技术分析抗TNF-α单链抗体的活性

本文用TPA和LPS刺激培养的HL6 0细胞作为靶的 ,通过胞内染色技术和流式细胞仪分析了抗TNF α单链抗体 (ScFv)的活性。结果表明 ,抗TNF αScFv和其亲本单克隆抗体 (mAb)与TNF α竞争作用显示平均荧光强度 (MFC)为 2 2 7% ,而mAb与TNF α结合显示MFC为 6 9 5 % ,抗TNF αScFv E tag与TNF α结合显示MFC为 48 8% ,空白和阴性对照的MFC分别为1 1%和 2 5 %。相对于mAb ,ScFv的抑制率是 78 37% ,抗原相对结合力是 6 8 17%。本文的结果说明抗TNF αScFv具有与其亲本单抗相同表位的结合活性 ,也为定量和直观测定ScFv的活性提供了实验依据。

彩色打字纸表面施胶染色的生产实践

用浸渍原理使用表面施胶染色代替传统的浆内染色,从而达到降低成本,减少污染,提高产品质量的目的。

纸张染色过程的控制

介绍了纸张浆内染色染料的选择原则和如何确定染色方案 。

无碳复写纸的染色

帐票印刷需要大量色纸,而色纸加工是无碳复写纸生产发展的趋势。为了使无碳复写纸纸色鲜艳,外观好看,往往采用两种不同的染色方法,一种是表面染色(即对原纸进行涂布单面、双面染色加工);另一种是浆内染色(即购买原纸是在浆料中添加色料)。我公司选用前一种方法表面染色,此种方法生产成本较低,操作方法简便。生产了浅红、浅黄、浅蓝、浅绿等四种不同颜色的无碳复写纸,生产后纸质优良,色彩艳丽、表面平滑顺畅、印刷加工容易。

年轻中切牙色彩再现──金属烤瓷内染色技术

在金属烤瓷修复中，年轻中切牙的色彩再现是一个难点，现有方法要么太难（混色法），要么光学效果差（外染色法），近年出现的内染色技术则结合了两者的优点。本文通过技工操作和临床实例详细介绍了利用内染色瓷粉表现年轻中切牙典型色彩特点的技术，并对内染色技术的优缺点和适应范围进行了讨论。

琼脂糖电泳中核酸染料Genefinder的最佳使用方法建立

目的确定琼脂糖凝胶电泳中使用核酸染料Genefinder的最适方法,以期找到染色效果理想的染色方法。方法在琼脂糖凝胶电泳中,采用预染样品法、胶内染色法以及两者相结合的3种方法,使用核酸染料Genefinder进行染色,对染色结果进行比较分析。结果使用胶内染色法染色效果较好,预染样品法次之,胶染及样品染色法结合效果最差。结论核酸染料Genefinder会影响DNA的迁移效率,使用Genefinder进行胶内染色是一种较好的染色方法。

嗜血细胞综合征患儿外周血Th17细胞的检测及意义

目的观察嗜血细胞综合征(HPS)患儿外周血CD4+细胞白细胞介素(IL)-17的变化,探讨其在HPS发病中的作用及临床意义。方法分离HPS患儿(初诊组和缓解组)和健康者(对照组)外周血单个核细胞(PBMC),采用免疫磁珠阴选CD4+T细胞,然后加佛波酯(PMA)、离子霉素(Ion),经固定、透膜处理进行细胞内染色,流式细胞术检测CD4+T细胞内IL-17+水平。结果初诊组HPS患儿IL-17表达水平明显高于缓解组(t=11.34,P<0.01),二者又明显高于对照组(t=35.28、9.38,P<0.01)。结论 Th17细胞水平与病情活动相关,是判断HPS患儿病情活动的指标之一。

大鼠脊孤束-背索突触后神经元的微细结构

首次将HRP细胞内注射技术应用于大鼠脊髓背角。从而提供了大鼠脊孤束-背索突触后(SST-DCPS)神经元的微细结构。在大鼠腰髓背角深层获得3例经细胞内染色显示出较完整结构的SST-DCPS神经元,其中2例位于第Ⅳ板层,胞体略呈梭形和三角形,参考Bennett对猫背索突触后(DCPS)神经元树突分布的分型,应为D型;另1例位于V层内侧,胞体呈椭圆形,树突分型为B型神经元。

改良法制作的视网膜切片内核层神经元的形态和电学特性

目的:探讨低温琼脂包埋振动切片机切片法制作的大鼠视网膜切片内核层神经元的形态和基本电生理学特性。方法:采用低温琼脂包埋振动切片机切片的方法制作大鼠视网膜切片,对内核层的神经元进行膜片钳全细胞记录,同时在胞内液中加入荧光黄观察记录细胞的形态。结果:该方法制作的视网膜切片切面平整、细胞活性好、保留了细胞之间的突起联系,能够根据细胞胞体的大小、位置初步辨别细胞的种类。在视网膜切片上荧光黄显示的细胞形态表明,双极细胞胞体呈梭形,突起主要沿纵向延伸;而水平细胞和无长突细胞胞体圆形或椭圆形、胞体较大,分别位于内核层的最外层和最内层。水平细胞和无长突细胞的静息膜电位(RMP)和膜电容(Cm)明显高于双极细胞。给予时程40ms,步阶10mV从-60mV至+40mV的电压刺激,41.7%的视锥双极细胞和64.7%的无长突细胞表现出内向钠电流和外向钾电流,其他细胞则只表现出外向钾电流。结论:采用低温琼脂包埋振动切片机切片的方法操作简单,制作的切片质量稳定可靠,使得在视网膜切片上对包括水平细胞在内的不同内核层神经元进行膜片钳记录成为可能。进一步研究视网膜内核层神经元的电生理学特性,有助于揭示视觉信号的发生、传导和调控机制。