茴香枳术汤对粘连性肠梗阻大鼠血浆内毒素的影响

目的:观察茴香枳术汤对粘连性肠梗阻大鼠血浆内毒素的影响,为深入探讨茴香枳术汤对粘连性肠梗阻微生态的作用机制提供实验依据。方法:从72只大鼠中,选择12只为正常组,其余60只制备大鼠粘连性肠梗阻模型,造模成功后随机分为假手术组,模型组,茴香枳术汤低(1.13 g/mL)、中(2.25 g、mL)、高(3.38 g/mL)剂量组,每组12只。各组给予对应药物治疗3天,末次给药后12 h股动脉取血,鲎试验偶氮基质显色法测定血浆内毒素含量;脱颈处死大鼠,取部分粘连组织行病理检查。结果:与正常组比较,模型组血浆内毒素含量显著增加(P<0.01);与模型组比较,假手术组及茴香枳术汤各剂量组血浆内毒素含量显著下降(P<0.01)。病理结果显示各治疗组肠壁形态逐渐恢复,炎症消退。结论:茴香枳术汤具有良好的治疗粘连性肠梗阻的作用,其作用机制与保护肠道微生态功能有关。

细菌内毒素检查法评审要点与注册资料常见问题分析

通过梳理细菌内毒素检查法建立的关键步骤,对细菌内毒素限值制定、MVD或MVC的计算、实验材料、实验过程和质量标准等涉及的评审要点进行了归纳总结,对评审过程中发现的常见问题进行了分析,以期为新兽药生产企业制定相应产品的细菌内毒素检查方法提供参考。

透析用水内毒素指标与供水管路使用寿命的探讨

目的通过分析透析用水内毒素检测指标探讨供水管路的维护方法及更换周期。方法调查某透析中心使用10年以上的供水管路内毒素检测指标,根据供水管路使用现状、水处理系统日常维护流程,分析透析用水内毒素超标原因,并探讨透析用水内毒素相关防控策略。结果2022年4月15日发现反渗水出口内毒素含量为0.096 EU/ml、反渗水回口内毒素含量为0.156 EU/ml,予以消毒、冲洗等干预措施后未达标,更换反渗膜后反渗水出口内毒素含量为0.022 EU/ml、反渗水回口内毒素含量为0.036 EU/ml;2022年9月内毒素指标又出现异常,对供水管路进行消毒后发现反渗膜出口内毒素含量为1.025 EU/ml,反渗膜回口内毒素含量为2.012 EU/ml,整体更换供水管路后内毒素指标恢复正常值。结论加强透析用水供水管路的日常监管及维护,可降低透析用水内毒素超标风险,确保患者透析安全。

利福平原料细菌内毒素检查方法的建立

目的确定合理的内毒素限值,建立利福平原料细菌内毒素检查方法。方法计算出利福平原料合理的内毒素限值。而后按照《中国药典》2020年版四部通则1143细菌内毒素检查法中的凝胶法。对3批原料样品采用2个厂家的鲎试剂进行干扰试验,对利福平原料细菌内毒素进行方法学验证。结果结合临床用药利福平原料内毒素限值设置在0.5 EU/mg。实验中供试品采用甲醇溶解,稀释至质量浓度不大于0.5 mg/ml时,对细菌内毒素试验结果无干扰。结论建立利福平原料的细菌内毒素检查方法,更有利于成品质量控制和用药安全。

血清ADMA、IL-6、内毒素及乳酸在新生儿败血症所致感染性休克中的表达及临床意义

目的探讨血清不对称二甲基精氨酸(ADMA)、白细胞介素-6(IL-6)、内毒素及乳酸在新生儿败血症所致感染性休克中的表达及临床意义。方法选取我院收治的58例新生儿败血症所致感染性休克患儿为休克组,62例新生儿败血症未发生感染性休克患儿为败血症组,60例无感染新生儿为对照组。检测所有研究对象血清中的ADMA、IL-6、内毒素及乳酸水平。比较三组研究对象的ADMA、IL-6、内毒素及乳酸水平;分析ADMA、IL-6、内毒素及乳酸水平对新生儿败血症所致感染性休克患儿的诊断价值;分析ADMA水平与IL-6、内毒素及乳酸水平的关系;分析ADMA、IL-6、内毒素及乳酸水平与休克组预后的关系。结果休克组的ADMA、IL-6、内毒素及乳酸水平均高于败血症组及对照组(P<0.05);败血症组的ADMA、IL-6、内毒素水平均高于对照组(P<0.05);败血症组和对照组的乳酸水平无显著差异(P>0.05)。受试者工作特征曲线(ROC)结果显示,ADMA、IL-6、内毒素及乳酸诊断新生儿败血症所致感染性休克的曲线下面积(AUC)分别为0.93、0.89、0.89、0.92。Pearson相关性分析结果显示,ADMA水平与IL-6、内毒素及乳酸水平呈正相关(P<0.05)。ADMA、IL-6、内毒素及乳酸高水平与新生儿败血症所致感染性休克预后不良有关。结论血清ADMA、IL-6、内毒素及乳酸在新生儿败血症所致感染性休克中表达水平较高,可作为该疾病诊断的生物标志物并预测预后。

Expi293F表达重组鲎C因子用于荧光法内毒素检测

鲎C因子是一种对痕量内毒素高度敏感的丝氨酸蛋白酶原,在医药行业可替代鲎试剂用于内毒素检测。然而其重组表达困难,且对于环境中内毒素的控制要求极高。该文首先克隆了来源于东方鲎的全长C因子,并在N末端和C末端分别添加了Flag标签和6×His标签,同时用哺乳细胞表达载体中的分泌信号肽替换掉了原始C因子信号肽。构建好的重组质粒转染至人胚胎肾脏细胞Expi293F悬浮培养7 d后收获上清液,Western Blot检测蛋白与预测大小128 kDa一致,具有与内毒素结合以及结合后切割荧光底物的能力。该研究首次在人胚胎肾脏细胞Expi293F中成功表达出具有生物学活性的全长C因子,表达量达到19.18 mg/L,比DING在昆虫细胞SF9中的表达量提高了113%。该方法对于后续开发低成本内毒素检测试剂盒具有指导意义。

注射用单磷酸阿糖腺苷细菌内毒素检查方法研究

目的:建立注射用单磷酸阿糖腺苷的细菌内毒素检测方法并进行方法学验证,以期对该品种的质量控制标准进行统一规范。方法:按照《中国药典》2020年版四部通则1143“细菌内毒素检查法”,确定细菌内毒素的限值,进行干扰试验,并进行内毒素检查。结果:按经验拟定的限值标准(每1mg单磷酸阿糖腺苷中含内毒素的量应小于0.06EU)对15个厂家提供的25个批次的供试品进行细菌内毒素检查,结果均符合规定。结论:本文建立的细菌内毒素检查法检查,可用于注射用单磷酸阿糖腺苷的质量控制。

oXiris-内毒素吸附技术治疗ESRD合并脓毒症患者的临床效果观察

目的探讨oXiris-内毒素吸附技术治疗终末期肾病(end-stage renal disease,ESRD)合并脓毒症的疗效。方法回顾性收集2020年1月1日—2023年7月30日于河南科技大学第一附属医院住院治疗的ESRD合并脓毒症患者41例,其中oXiris组22例,连续性静脉-静脉血液滤过(continuous veno-venous hemofiltration,CVVH)联合血液灌流(hemoperfusion,HP)组19例。比较2组患者住院死亡率、ICU住院时长、机械通气时长、连续性肾脏替代治疗时长、机械通气患者数、使用滤器数以及在血液净化治疗开始时及治疗后急性生理与慢性健康评分(acute physiology and chronic health evaluation,APACHE-Ⅱ)、去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)用量以及实验室检查结果。结果oXiris组患者机械通气时长少于CVVH+HP组(Z=-3.749,P=0.001)。治疗后oXiris组APACHE-Ⅱ评分(t=-4.481,P=0.001)、NE用量(t=-2.036,P=0.049)、C反应蛋白(Z=-2.850,P=0.004)、白细胞介素-6(Z=-2.512,P=0.012)水平较CVVH+HP组降低。结论oXiris-内毒素吸附技术能有效降低ESRD合并脓毒症患者炎症介质,且效果优于CVVH+HP,具有良好的临床应用价值。

双重血浆分子吸附系统序贯血浆置换治疗HBV感染相关慢加急性肝衰竭疗效及对患者血清内毒素和炎症因子水平的影响

目的:分析双重血浆分子吸附系统(DPMAS)序贯血浆置换(PE)治疗乙型肝炎病毒感染相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)疗效及对患者血清内毒素和炎症因子水平的影响。方法:将92例HBV-ACLF患者根据非随机同期对照研究及患者自愿原则分为DPMAS序贯PE组(n=45例)和PE组(n=47例)。PE组接受单纯PE治疗,DPMAS序贯PE组接受DPMAS序贯PE治疗。比较两组患者治疗4周及12周时的好转率及存活率;比较两组治疗前、治疗4周及12周时的血清炎性因子、内毒素水平(ET)及终末期肝病模型(MELD)评分;比较两组并发症发生情况。结果:两组治疗4周好转率比较有统计学差异(P<0.05),治疗12周好转率比较无统计学差异(P>0.05);两组治疗4周及12周存活率比较无统计学差异(均P>0.05);治疗4周及12周时,DPMAS序贯PE组血清C反应蛋白(CRP)、白细胞介素6(IL-6)、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)及ET水平低于PE组(均P<0.05);DPMAS序贯PE组治疗4周时的MELD评分低于PE组(P<0.05);两组治疗期间肺部感染、电解质紊乱、肝肾综合征等并发症发生率比较无统计学差异(均P>0.05)。结论:DPMAS序贯PE治疗HBV-ACLF患者,可有效降低血清炎症因子及内毒素水平,应用效果良好。

生物制品中内毒素去除工艺研究进展

近年来,随着政策的导向及技术的不断进步,以生物制品为代表的新兴产业进入蓬勃发展的快车道,生物制品安全性受到了人们的广泛关注。内毒素是一种存在于革兰氏阴性菌细菌细胞壁内的有害物质,生物制品在制备过程中很容易受其污染,造成安全隐患,因此已成为各类生物制品安全评估的重要指标。内毒素去除工艺是生物制品质量保障的重要基石,已得到了广泛研究,不同类型的方法也均取得了一定的成果和应用。本文概述了内毒素的去除及检测方法,以供参考。

氢气对内毒素小鼠急性肺损伤的影响

目的探讨氢气对内毒素(LPS)诱导的急性肺损伤的影响及机制。方法选择SPF级雄性ICR小鼠12只,6~8周龄,体质量25~35 g。采用随机数字表法将小鼠分为四组:对照组(C组)、吸入氢气组(H组)、肺损伤模型组(L组)和肺损伤模型+吸入氢气组(LH组),每组3只。C组不做处理;H组仅吸入4%氢气,持续12 h;L组和LH组采用腹腔注射LPS 10 mg/kg建立肺损伤模型,LH组在建立肺损伤模型后即刻吸入4%氢气。于建模后12 h行肺超声检测肺水肿,超声检测完成后迅速处死小鼠,开胸取双肺组织,左肺组织采用Western blot法检测p-AMPK、p-ERK和p-p38蛋白含量,右肺组织采用HE染色行肺损伤评分并观察肺组织病理学改变。结果与C组比较,L组和LH组B线面积明显增大,p-AMPK、p-ERK和p-p38蛋白含量明显升高(P<0.05);H组p-AMPK蛋白含量明显升高(P<0.05);L组肺损伤评分明显升高(P<0.05)。与L组比较,LH组B线的面积明显减小,p-ERK、p-ERK和p-p38蛋白含量、肺损伤评分明显降低(P<0.05)。C组和H组肺组织无红细胞渗漏,无水肿,无炎症细胞浸润,结构清晰可见。L组呈现出大量红细胞渗漏,炎性细胞浸润及肺间质水肿增厚。LH组肺部的出血、炎性细胞浸润和肺泡间隔增厚的情况减轻。结论吸入4%氢气持续12 h可以通过上调p-AMPK、下调p-ERK/p-p38的表达,降低肺损伤评分,减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤。

动态浊度法定量检测猫粮中细菌内毒素含量的研究

试验旨在建立一种动态浊度法定量测定猫粮中细菌内毒素含量的检测方法。猫粮样品中的细菌内毒素用水提取,离心,过滤,滤液适当稀释,采用动态浊度法在细菌内毒素测定仪上进行定量测定。结果显示:在0.040~5.000 EU/mL的范围内细菌内毒素的线性良好(相关系数r=-0.9953,|r|>0.980),标准曲线有效,重复测定的相对标准偏差(RSD)为8.9%~14.0%(n=6),当稀释因子≥1000时干扰试验的回收率均在50%~200%之间,方法定量限(LOQ)为0.04 EU/mg。研究表明,该方法操作简便,可靠准确,重现性好,能够有效检测猫粮样品中细菌内毒素含量,具有较好的应用前景。

热休克蛋白A12A对内毒素血症肝损伤的作用及机制研究

目的:研究热休克蛋白A12A(heat shock protein A12A,HSPA12A)对内毒素血症肝损伤的影响及机制。方法:(1)采用脓毒症小鼠肝组织RNA测序的公共数据库,以生物信息学手段分析Hspa12a和多种载脂蛋白的mRNA表达变化。(2)采用6~8周龄Hspa12a基因敲除(Hspa12a knockout,Hspa12a-/-)鼠和野生型(wild type,WT)鼠,腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)5 mg/kg诱导内毒素血症,以生理盐水(normal saline,NS)注射小鼠为对照组,分为NS-WT组、NS-Hspa12a-/-组、LPS-WT组和LPS-Hspa12a-/-组;LPS作用6 h后,收集肝组织,HE染色观察肝脏组织病理变化;免疫印迹和RT-PCR分析其中HSPA12A、ApoA1、ApoB、ApoM表达水平;分离血清,测定肝功能标志物丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平以及高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)水平。(3)WT鼠原代肝细胞过表达Hspa12a后,使用LPS(500 ng/mL)作用于肝细胞模拟内毒素血症肝损伤模型,6 h后检测肝细胞培养上清的ALT和AST水平。(4)根据是否发生脓毒症肝损伤将患者分为脓毒症肝损伤组和对照组,比较两组患者ALT、AST、HDL-C和LDL-C的差异。结果:(1)生物信息学分析显示,脓毒症小鼠肝脏Hspa12a、Apoa1、Apob和Apom的m RNA表达下降。(2)与NS-WT组相比,LPS-WT组肝组织出现明显损伤(P<0.001)、炎症病灶数量增多(P<0.01)、血清ALT(P<0.05)和AST(P<0.01)升高,同时肝组织中HSPA12A表达显著下降(P<0.05);而与LPS-WT组相比,LPS-Hspa12a-/-组肝脏病理变化更严重(P<0.05)且血清ALT(P<0.01)和AST(P<0.05)水平升高,HDL-C和LDL-C水平下降(P<0.01),肝组织载脂蛋白(ApoA1、ApoB、ApoM)表达降低(P<0.05,P<0.01)。(3)体外实验中LPS作用使肝细胞培养上清中ALT和AST水平升高(P<0.001),而过表达Hspa12a能够减轻LPS作用引起的ALT和AST水平升高(P<0.01)。(4)临床数据显示,出现脓毒症肝损伤的患者血浆中ALT和AST水平相比对照组显著升高(P<0.001),HDL-C和LDL-C水平显著下降(P<0.001)。结论:内毒素血症导致肝脏HSPA12A表达下调,其介导了内毒素血症肝损伤的发生,过表达Hspa12a能够保护内毒素血症引起的肝损伤,该作用可能与维持肝脏载脂蛋白及脂蛋白稳态有关。

新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)内毒素检查方法比较

目的为新型冠状病毒(简称新冠病毒)灭活疫苗(Vero细胞)的细菌内毒素检查和质量控制提供技术支持和理论基础。方法利用凝胶法、光度测定法[包括动态浊度(TKA)法、微量动态显色(mKCA)法]测定并比较新冠病毒灭活疫苗(Vero细胞)原液和成品中内毒素浓度。结果3种方法测得的供试品内毒素浓度均符合规定(原液为不超过5 EU/600 SU,成品为每剂≤5 EU),且后2种方法既能用于定性检测也能用于定量检测,特别是mKCA法下鲎试剂用量更少。结论mKCA法是检查该疫苗内毒素浓度的最适宜方法,具有灵敏度高、稳定性强、鲎试剂用量少、数据完整和可追溯、人为操作误差较小的特点。

氟维司群注射液前处理及细菌内毒素检查方法研究

目的建立氟维司群注射液细菌内毒素的检查方法。方法取样品0.5 mL,加细菌内毒素检查用水(BET用水)5 mL,2000 r/min振荡5 min后,3000 r/min离心5 min,取水相,用BET用水稀释至所需倍数系列溶液。按2020年版《中国药典(四部)》通则1143细菌内毒素检查法,分别采用凝胶法、动态显色法、动态浊度法检测样品中的内毒素,考察水萃取液(水相溶液)的干扰及内毒素回收比。结果水相溶液稀释至2倍及以上时对鲎试剂均无干扰;外加20 EU/mL内毒素时回收比均在50%~200%范围内。结论氟维司群注射液经水萃取后,采用凝胶法、动态显色法、动态浊度法进行细菌内毒素检查均可行。

盐酸赖氨酸(注射用)细菌内毒素检查法的研究

目的建立盐酸赖氨酸(注射用)细菌内毒素的检测方法。方法按2020年版《中国药典(四部)》通则1143细菌内毒素检查法,采用凝胶法对样品进行干扰试验和细菌内毒素检查,采用动态浊度法定量检测样品中细菌内毒素的含量。结果Tris缓冲液稀释供试品,调节pH值在6.0~8.0范围内,可有效消除盐酸赖氨酸(注射用)对细菌内毒素的干扰。凝胶法和动态浊度法试验均符合规定,动态浊度法的回收率为84.75%~96.12%,在50%~200%范围内。结论所建立的方法可行,可用于盐酸赖氨酸(注射用)细菌内毒素的检查。

注射用三磷酸胞苷二钠细菌内毒素检查法的研究

目的建立注射用三磷酸胞苷二钠细菌内毒素检查方法。方法按《中国药典》2020年版四部通则1143细菌内毒素检查法,从严确定注射用三磷酸胞苷二钠的限值,用凝胶法进行方法学验证和细菌内毒素检查。结果两个厂家的4批供试品在0.2 mg/ml浓度下对两个厂家的鲎试剂不存在干扰,细菌内毒素的限值设定为2.5 EU/mg,4批注射用三磷酸胞苷二钠细菌内毒素的检查结果均符合规定。结论本研究建立的细菌内毒素检查方法可用于替代家兔热原检查法,满足对注射用三磷酸胞苷二钠的质量控制要求。

多囊卵巢综合征患者血清内毒素、TLR4表达水平及临床意义

目的探究多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清内毒素、Toll样受体4(TLR4)的表达水平和临床意义。方法选取2021年3月至12月唐山市妇幼保健院收治的50例PCOS伴有月经紊乱或既往检测排卵提示稀发排卵甚至排卵障碍的患者作为研究组,选取同期同一医院体检的50例非PCOS女性作为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测两组血清内毒素、TLR4水平;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清内毒素、TLR4水平对PCOS的诊断价值。结果与对照组相比,研究组PCOS患者体重指数(BMI)、血清内毒素、TLR4、睾酮(T)、黄体生成素(LH)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)水平显著升高(P<0.05)。血清内毒素、TLR4诊断PCOS的曲线下面积(AUC)优于二者单独诊断(Z_(二者联合-内毒素)=1.992、Z_(二者联合-TLR4)=2.814,P<0.05)。结论PCOS患者血清中内毒素、TLR4水平显著升高,二者联合检测对PCOS有较高的诊断价值。

难溶性原料药、辅料、制剂细菌内毒素检查方法的研究进展

目的 总结药典及近10年相关文献中有关难溶性样品检测方法的建立思路,为难溶性原料药、辅料、制剂的内毒素检查研究提供借鉴。方法 重点对药典及国内文献中难溶性样品的内毒素限值确定、检查方法、溶解方法、排除干扰的思路进行详细分析与论述,尤其对有机溶剂的选择重点阐述。结果及结论 难溶性样品细菌内毒素检测方法建立的难点在于寻找合适的溶剂及排除干扰,溶解方法考虑有机溶剂、非有机溶剂、物理方法,排除干扰的方法考虑调节pH、补充二价阳离子、使用抗增液、分散剂等思路,以期为后续研究提供思路。

恶性肿瘤并发脓毒症休克患者行内毒素吸附治疗的护理体会

总结9例恶性肿瘤并发脓毒症休克患者采用oXiris膜材料进行内毒素吸附治疗的护理要点。主要护理要点为肝素诱导性血小板减少症的监测与预防、抗凝方式的选择及观察、封管液的选择、低血压的预防、人工气道的管理、镇痛镇静的管理、静脉血栓栓塞症的预防及早期营养支持。9例患者在持续内毒素吸附治疗后,心率、呼吸、血压均得到显著改善,尿量恢复正常,乳酸、降钙素原及C反应蛋白水平显著下降。