Ti质粒介导的B、t、k-δ内毒素蛋白基因转化大豆的初步研究

以Ｔｉ质粒为介导，将ｐＫＴ５４Ｂ７Ｃ５质粒上的Ｂ、ｔ、ｋ－δ内毒素蛋白基因导入东北大豆“黑农３７”、“黑农３９”等品种。采用多种外植体和感染方法，从胚轴和子叶节诱导出丛生芽与再生植株。经卡那霉素筛选和冠瘿碱检测，初步证明外源基因导入大豆基因组中。共获得８１株再生植株，其中成活３０株，仅３株结７个荚，得到７粒种子。ＰＣＲ检测和ＤＮＡ分子杂交，鉴定这７株再生植株呈阳性反应，证明外源基因已导入并整合到大豆的基因组中。７粒种子均已萌发。

苏云金杆菌内毒素蛋白基因转入葡萄胚性愈伤组织细胞及转基因植株再生的研究

以葡萄的胚性愈伤组织作为农杆菌介导,Ti质粒转化材料,利用共培养法将苏云金杆菌内毒素蛋白基因转入葡萄胚性愈伤组织细胞,通过胚状体发生途径再生转基因植株。实验发现:80μmol/L的乙酰丁香酮诱导处理农杆菌和葡萄愈伤组织后可将转化效率提高50倍。OD值为0.8的农杆菌菌液稀释8—10信后与在G培养基预培养10天的胚性愈伤组织共培养2—3夭,Ti质粒对葡萄愈伤组织细胞的转化效率可达50%左右。筛选得到的转基因植株在含Km 30 mg/L的选择培养基上继代存活6个月,生长正常;提取叶片染色体DNA做Southern blot,杂交结果为阳性。将转基因植株各部分切段置于含Km 50 mg/L的选择培养基上,能够脱分化产生抗性愈伤组织并能增殖。

奶牛源绿脓杆菌内毒素蛋白的提取及免疫原性和保护性研究

为了评估绿脓杆菌内毒素蛋白的免疫原性和保护性,试验采用最小致死量(MLD)测定法从奶牛源绿脓杆菌菌株中筛选高毒力菌株,用可使蛋白质与脂多糖分离的合成培养基进行发酵、提取、纯化制备内毒素蛋白,采用考马斯亮蓝法测定内毒素蛋白含量,间接ELISA法和免疫攻毒保护试验对制备的内毒素蛋白进行免疫原性和保护性研究。结果表明:筛选得到1株高毒力绿脓杆菌CPA-009菌株,其MLD为2.0×10~7 cfu/mL;用CPA-009菌株发酵制备出5批次内毒素蛋白,平均含量为44.62%,各批次间差异不显著(P>0.05);免疫组小鼠体内抗体效价随着免疫进程持续升高,最高达到1∶12 500;内毒素蛋白对CPA-009菌株的保护率为100%,对其他3种血清型绿脓杆菌菌株的保护率均在80.0%以上。说明由高毒力绿脓杆菌CPA-009菌株制备的内毒素蛋白具有良好的免疫原性和高保护性。

铜绿假单胞菌内毒素蛋白的提取及其临床应用

内毒素蛋白(简称EP)主要见于革兰氏阴性杆菌体内,并常与LPS 构成复合物的形式存在,是菌体抗原的主要成份之一.我们采用甲苯溶解铜绿假单胞菌菌体,获得了粗制印,然后用Sephadex—A50层析柱进行阶段洗脱得到了纯化EP,并用纯化EP 作为抗原来致敏醛化羊红细胞,建立了被动血凝试验(简称OHT)。

鲎抗菌抗内毒素蛋白的研究进展

查阅近10余年国内外相关文献,总结归纳从鲎体内纯化的各种抗菌抗内毒素蛋白的结构和生物活性。较为全面地叙述了鲎的先天防御体系以及从其体内提取纯化的抗内毒素因子、各种外源凝集素和C反应蛋白的结构特征和抗菌抗内毒素的生物活性,指出了该类生物蛋白在抗菌抗内毒素药物开发应用中的重要价值。这些蛋白可以作为理想的药物先导化合物进行深入开发研究。它们的结构也为基于结构的新型药物设计合成提供了丰富的数据资料。

绿脓杆菌内毒素蛋白微胶囊的制备及免疫效果

为预防绿脓杆菌感染引起的雏鸡急性败血症,试验研究了绿脓杆菌内毒素蛋白微胶囊制备工艺;口服免疫雏鸡,检测抗体水平,采用3个血清型绿脓杆菌进行攻毒实验。结果表明:搅拌速度800 r/min、p H 4.2、7.5 m L甲醛固化55 min时,微胶囊颗粒均匀;雏鸡血清中抗体第5周达到高峰,第8周时维持较高水平,微胶囊对绿脓杆菌攻击保护率在83.3%以上。证明内毒素蛋白微胶囊能有效抵抗绿脓杆菌的攻击,为雏鸡急性败血症的防控提供有效手段。

健康人和感染患者抗绿脓杆菌内毒素蛋白(EP)抗体水平的测定分析

用微量间接血凝法检测了健康人和绿脓杆菌感染患者血清抗EP抗体.健康人共检测154人.基础抗体水平绝大部分在1:8以下(占85.05%)EP—HA GMT为1:7.3.无性别差异(x^2=3.04、P>0.05).绿脓杆菌感染患者检测38例,免疫前GMT高于健康人1.43倍,免疫后较免疫前GMT提高4倍.绿脓杆菌EP是绿脓杆菌共同抗原,检查人抗EP抗体水平对诊断、防治绿脓杆菌感染具有重要临床意义.

绿脓杆菌内毒素蛋白疫苗治疗绿脓杆菌感染207例

本文报告绿脓杆菌内毒素蛋白疫苗对207例绿脓杆菌感染的临床疗效。121例烧伤后绿脓杆菌感染患者中31例治疗后创面细菌培养29例阴转(94％),治疗组阴转率明显高于对照组(P<0.05),创面愈合时间明显缩短。86例非烧伤绿脓杆菌感染患者治疗后总有效率为79％,伤口术后感染疗效高达92％。

慢性重型肝炎患者血清内毒素调节蛋白的水平及其临床意义

探讨内毒素结合蛋白 (lipopolysaccharidebindingprotein、LBP)、杀菌性 /通透性增加蛋白 (bactericidal/permeability -increasingprotein、BPI)及可溶性sCD14 (solubleCD14、sCD14 )水平在慢重肝患者伴肠源性内毒素血症中的临床意义。应用基质显色法和ELISA双抗体夹心法 ,检测 2 4例慢重肝患者血中内毒素脂多糖(Lipopolysaccharide ,LPS)、LBP、BPI和sCD14的水平 ,并以 10例献血员和 16例慢性乙型肝炎患者作为对照。结果 :慢重肝患者在早期、中期、晚期 ,其血中LPS、LBP、BPI和sCD14的水平均明显高于慢乙肝患者及献血员 ;慢重肝死亡者其LPS、LBP、BPI和sCD14的水平也显著高于存活者 ;慢重肝患者随着病情的加重 ,LBP/BPI比值增大。慢重肝患者伴肠源性内毒素血症时 ,高水平的LBP和sCD14及相对不足的BPI 。

兔源内毒素结合蛋白的提取纯化及体外生物学活性研究

目的 从烧伤合并内毒素血症损伤兔的血清中分离纯化出内毒素结合蛋白 (Lipopolysaccharide BindingProteinLBP) ,以研究LBP在烧伤复合内毒素血症中的作用。方法 兔血清中蛋白质通过二步离子交换层析 (Bio Rex 70Resin、Mono Q)及凝胶过滤来分离纯化 ,并经流式细胞分析实验、绵羊红细胞凝聚实验、氨基末端氨基酸残基测序等方法鉴定 ,再将LBP作用于体外培养的人单核细胞 (U93 7) ,观测其分泌TNFα等细胞因子的状况。结果 获得一种分子量为 60× 10 3蛋白质 ,其N端 10个氨基酸序列为TNPGLITRIT ,与NCBI蛋白质库中有关兔的氨基酸序列进行比较 ,发现其与LBP的序列相同 ,它能促进脂多糖 (LipopolysaccharideLPS)与外周血单核细胞 (PBMC)结合 ,并能促进U93 7在极低浓度的LPS用下分泌TNFα。结论 从血清中分离纯化带有生物活性、全长LBP是可行的 ,LBP能促进极低浓度的LPS与单核细胞结合 ,介导炎性因子的分泌 ,从而促进炎症反应的发生。

内毒素/脂多糖结合蛋白与杀菌通透性增加蛋白研究进展

内毒素所致的内毒素休克和多器官功能衰竭是导致革兰阴性菌感染患者死亡的重要原因,内毒素结合蛋白(endotoxin bindingprotein,EBP)及其受体系统在机体识别和调控内毒素作用中起重要作用,通过其增敏或抑制作用而发挥生物学效应,本文就脂多糖结合蛋白(lipopoysacchride binding protein,LBP)与杀菌通透性增加蛋白(batericidal permeability increasing protein,BPI)的特性、相互关系及研究进展作一综述。

特异抗内毒素鸡蛋黄免疫球蛋白效价测定及理化性质研究

目的 研究特异性抗内毒素鸡蛋黄免疫球蛋白理化性质 ,探索一种防治肠源性感染 ,治疗内毒素血症的新途径。方法 用大肠杆菌J5株 (菌体表面类脂A裸露 )作抗原免疫 2 5周龄Roman鸡 ,制备特异性抗内毒素IgY ,用酶联免疫吸附技术检测其效价及对热、酸、碱和酶的稳定性。结果 IgY抗体效价为 1∶2 5 6 0 0 ,能耐受巴氏消毒 ,对酸、碱、酶有很好的稳定性。结论 用大肠杆菌J5株免疫鸡制备的IgY效价高 ,理化性质稳定 。

亚急性肝衰竭患者血清内毒素结合蛋白水平研究

目的:探讨血清内毒素结合蛋白(LBP)在慢加急性(亚急性)肝衰竭发生发展中的意义。方法:采用双抗体夹心ELISA法检测亚急性肝衰竭患者入院及入院第二周时血清LBP水平。结果:58例亚急性肝衰竭组入院时血清LBP值(107.01±40.92)ng/mL显著高于正常对照组(42.11±21.08)ng/mL(P<0.01)。入院第二周时血清LBP值比较,好转(56.99±26.42)ng/mL明显低于死亡(116.70±40.88)ng/ml,未发生自发性细菌性腹膜炎、肝性脑病、肝肾综合征、电解质紊乱者明显低于发生上述情况者(P均<0.05)。发生医院感染组与未发生医院感染组比较,入院时及入院第二周时LBP水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:亚急性肝衰竭患者血清LBP明显升高,LBP水平与是否合并细菌感染无明显关系,动态监测LBP水平有助于判断肝衰竭患者预后,LBP水平迅速下降者预后较好。

内毒素中和蛋白及其在脓毒症防治中的作用

来源于体内诱导的实质细胞、中性粒细胞以及天然组织细胞的几种重要的内毒素中和蛋白 (ENP)及其衍生肽可特异地结合或中和细菌内毒素 (LPS) ,从而显示出它们对革兰氏阴性细菌感染和脓毒症防治具有潜在的作用。本文就近年来有关ENP中主要成员的生物学特性及其LPS拮抗效应作一简要介绍。

内毒素结合蛋白和慢性肝病

内毒素血症与肝脏疾病关系密切。近年的研究发现一些血浆蛋白能以特异或非特异的方式结合内毒素或中和内毒素,改变内毒素的生物学活性。目前研究较为广泛的是脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide-binding protein,LBP),可溶性CD14(soluble CD14,sCD14),杀菌/渗透性增加蛋白(bactericidal/permeability increasing protein,BPI),高密度脂蛋白等。本文旨在探讨这些内毒素结合蛋白对内毒素作用的影响及其在慢性肝病中的意义。

内毒素结合蛋白样分子p48体内外生物学活性的初步研究

目的以LBP为对照,对比研究p48的体内、外生物学功能。方法采用生物传感器、流式细胞分析技术研究p48与LPS及Lipid A的结合力。通过体外培养人单核细胞(U937)和小鼠体内TNF-α的分泌实验,研究p48的生物学功能。采用ELISA方法初步探索p48与LBP是否具有一定相似的空间结构。结果p48能促进LPS与PBMC结合,其活性为LBP的81%。p48能与LPS及Lipid A结合,其亲和常数(KD)分别为1.59×10-6、1.48×10-6mol/L。体内外实验中p48均能促进TNF-α的分泌,其生物学活性约为LBP的77%。高浓度抗NH-LBP Fab抗体能与p48特异性结合,p48部分空间结构与LBP可能有一定的相似性。结论p48具有与LBP相近似的生物学功能,在机体炎症反应中也发挥较重要的作用。

慢性重型肝炎患者血浆内毒素与内毒素结合蛋白的关系

目的探讨内毒素结合蛋白(lipopolysaccharide binding protein,LBP)在慢重肝肠源性内毒素血症患者中的作用。方法应用基质显色法和ELISA 双抗体夹心法,检测24例慢重肝患者血浆中 LPS 和 LBP 的水平,并以10例献血员和16例慢性乙型肝炎患者作为对照。结果慢重肝患者在早期、中期、晚期,其血浆中 LPS 和 LBP 的水平均明显高于慢乙肝患者及献血员;慢重肝死亡者其 LPS 和 LBP 的水平也显著高于存活者。结论慢重肝患者伴肠源性内毒素血症时,血清中 LBP 的水平,可显著提高机体对内毒素的敏感性。在内毒索浓度较低时,仍可诱导 Kupffer 细胞释放TNF-α,从而加剧肝细胞损伤。

内毒素结合蛋白与内毒素受体

肠源性内毒素血症时,细茵内毒素（Lipopofgsaachridc,LPS）刺激活化单核/巨噬细胞系统,产生多种炎性介质的瀑布效应,使机体处于一种自身无法控制混乱状态。因此,了解内毒素刺激单核/巨噬细胞活化机制,阐明其病生理过程,对开发治疗药物具有重要意义。下面我们将近年来这方面的研究情况进行综述。

血清内毒素结合蛋白和sCD163水平预测亚急性肝衰竭患者预后的价值分析

目的探讨应用血清内毒素结合蛋白(LBP)和可溶性CD163(sCD163)预测亚急性肝衰竭(SALF)患者预后的价值。方法2019年1月~2020年1月在我院接受治疗的60例SALF患者和同期在我院接受体检50例健康人,采用ELISA法检测血清LBP和sCD163。记录死亡例数,获得终末期肝病模型评分(MELD)。应用ROC曲线下面积(AUC)分析各指标的预测效能。结果肝衰竭患者血清LBP和sCD163水平分别为(110.28±19.21)ng/ml和(123.19±10.22 ng/ml),显著高于对照组【分别为(78.19±5.66)ng/ml和(35.49±4.31)ng/ml,P<0.05】;29例死亡患者入院时血清LBP和sCD163水平分别为(134.32±12.11)ng/ml和(143.11±9.19)ng/ml,均显著高于31例生存患者【分别为(93.21±7.11)ng/ml和(97.19±4.33)ng/ml,P<0.05】;SALF患者血清LBP和sCD163水平与MELD评分均呈正相关(r=0.9456、r=0.9122,P<0.05);ROC曲线分析显示血清LBP、sCD163和MELD评分预测SALF患者死亡的AUC分别为0.9182、0.9830和0.8534(P<0.05)。结论应用血清LBP和sCD163预测SALF患者预后具有一定的实用价值,值得进一步观察和研究。

多囊卵巢综合征与内毒素血症血清标志物的相关性研究

目的探讨多囊卵巢综合征(PCOS)与内毒素血症血清标志物的关系,并明确其相关机制。方法将2021年3月至12月于唐山市妇幼保健院妇科及生殖遗传科就诊的50例PCOS患者纳入实验组,同时将同期就诊的50例健康体检女性纳入对照组。比较两组基线资料、内毒素血症血清标志物及其他内分泌指标,分析PCOS与内毒素血症血清标志物的关系。结果实验组腰臀比(WHR)、双侧卵巢体积、窦卵泡计数、血清内毒素(LPS)、LPS结合蛋白(LBP)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、核因子κB(NF-κB)、白介素(IL)-6、IL-12、IL-1Ra、IL-17a、胰岛素(FINS)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、总睾酮(TT)均高于对照组,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)低于对照组(P<0.05);相关性分析显示,LPS、LBP、hs-CRP、TNF-α、NF-κB、IL-6、IL-12、IL-1Ra、IL-17a与WHR、双侧卵巢体积、窦卵泡计数、FINS、FSH、LH、TT呈正相关(r>0,P<0.05),HDL-C与WHR、双侧卵巢体积、窦卵泡计数、FINS、FSH、LH、TT呈负相关(r<0,P<0.05)。结论内毒素血症血清标志物与PCOS间存在显著相关性。