UPLC-MS/MS法检测血浆内源性大麻素在预测先兆流产孕妇妊娠结局中的应用

目的:研究孕妇外周血内源性大麻素水平周期变化规律,并分析基于孕早期内源性大麻素水平预测先兆流产孕妇妊娠结局的临床应用价值。方法:选择2020年5月至2022年5月在山东第一医科大学第一附属医院产检的1080例孕妇,其中880例孕早期发生先兆流产孕妇和200例正常妊娠孕妇,超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)法检测血中内源性大麻素水平,通过logistic回归分析先兆流产发展为难免流产的风险因素,并用ROC曲线评估孕酮、β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)、花生四烯酸乙醇胺(AEA)预测先兆流产孕妇妊娠结局的性能。结果:发生难免流产的孕妇外周血AEA平均水平为(3.96±2.04)nmol/L,显著高于持续妊娠孕妇[(2.16±2.00)nmol/L](P<0.001)。年龄、AEA、孕酮、β-HCG、胎龄及阴道流血量是先兆流产发展为难免流产的风险因素(P<0.05)。孕早期内源性大麻素AEA,当阈值为2.565nmol/L时,用于预测先兆流产孕妇妊娠结局的准确率为86.7%,具有最优预测性能。结论:孕妇外周血内源性大麻素AEA水平测定是预测先兆流产患者妊娠结局的有效工具。

内源性大麻素系统与心血管疾病

内源性大麻素系统(ECS)广泛表达于中枢及外周组织中,参与多种生理病理过程,已有较多研究报道了其在中枢神经系统疾病、免疫系统疾病、麻醉镇痛等中的作用。近年来发现[1],内源性大麻素(eCBs)可引起血管扩张、心动过缓、降压、抑制心肌收缩、抗炎和保护内皮细胞等效应,提示ECS可发挥多种重要的心血管效应,表明其在心血管疾病防治中具有潜在的应用前景。本文将对ECS的特征及其与心血管疾病关系的相关研究进行总结,为临床治疗该类疾病提供新的思路。

内源性大麻素系统及其在癌症中的作用机制研究进展

目的讨论内源性大麻素系统(endocannabinoid system,ECS)的构成及其发挥抗癌作用的分子机制。方法通过查阅总结近年来相关文献,综述了ECS的作用机制,及作用于ECS的药物研究现状。结果ECS参与调节人类生理、行为、免疫和代谢等功能的各个方面,可通过多种途径发挥抗癌作用,具有临床研究及应用价值。结论ECS可调节细胞生长、代谢、分化、迁移、血管生成、诱导凋亡等通路,是极具价值的癌症治疗靶标,综述内容可为今后ECS在癌症治疗中的进一步研究提供参考。

内源性大麻素系统对心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究进展

心肌缺血再灌注(MI/R)已成为急性心肌梗死和体外循环患者再灌注治疗后最严重的并发症之一。MI/R损伤与氧化应激、炎症反应、钙超载及线粒体膜通透性转换孔(mPTP)开放等有关。最近研究显示,调节大麻素系统(ECS)对氧化应激损伤、炎症反应、钙超载等具有一定的抑制效应,同时还能减轻心肌线粒体的损伤,提高MI/R后的心肌功能和改善预后。本文就大麻素系统对MI/R保护作用的研究进展进行综述。

内源性大麻素系统对肠黏膜屏障的保护作用及作用机制研究进展

肠黏膜屏障由机械屏障、化学屏障、免疫屏障和生物屏障构成,肠黏膜屏障功能失调会造成大量细菌及毒素进入人体引发疾病,保护肠黏膜屏障对人体健康至关重要。内源性大麻素系统是一种内源性信号通路,由内源性大麻素受体、相应的配体和参与其合成及降解的酶组成。内源性大麻素系统在消化系统广泛分布,不仅调节胃肠运动,还参与了肠黏膜屏障的保护。内源性大麻素系统可通过上调肠道紧密连接蛋白的表达参与机械屏障的保护,通过减少肠液分泌参与化学屏障的保护,通过抑制免疫细胞异常活化和减少促炎细胞因子分泌参与免疫屏障的保护,通过改变肠道菌群丰度参与生物屏障的保护。

粪菌移植对小鼠抑郁样行为及海马内源性大麻素相关分子表达的影响

目的观察抑郁症患者肠道菌群移植对小鼠行为及海马内源性大麻素(eCB)的影响。方法将健康受试者和抑郁症患者的肠道菌群移植给“伪无菌”小鼠,通过糖水偏好实验、旷场实验以及悬尾实验评估其抑郁样行为,并检测海马eCB相关分子的表达水平。①模型小鼠的制备:通过灌胃的方法使用“鸡尾酒”抗生素清除小鼠原有的肠道菌群,连续灌胃14 d,制备“伪无菌”小鼠模型;最后一次抗生素灌胃结束48 h后,将小鼠随机分为对照组(n=6)和抑郁组(n=10),每周一、三、五分别对各组小鼠进行粪菌移植,持续3周,制备“人源化”小鼠模型;②行为学测试:粪菌移植结束24 h后进行糖水偏好实验、旷场实验和悬尾实验以评估小鼠的抑郁样行为;③行为学测试结束24 h后处死动物,通过Western blotting法检测小鼠海马组织eCB相关分子的表达情况。结果①与对照组比较,抑郁组抑郁样行为表现显著,具体表现为旷场实验中抑郁组小鼠进入中心区次数、中心区运动距离、运动总距离、中心区停留时间比均显著降低(P<0.01),糖水偏好率显著下降(P<0.05),悬尾不动时间显著增长(P<0.01)。②Western blotting结果显示,与对照组比较,抑郁组CB1R、NAPE-PLD、DAGLα蛋白表达均显著下调,差异具有统计学意义(P<0.05)。③海马NAPE-PLD和DAGLα的表达水平与小鼠进入中心区次数、中心区运动距离、中心区停留时间比和糖水偏好率均呈正相关(均P<0.05),而且DAGLα、NAPE-PLD表达水平与悬尾不动时间均呈负相关(均P<0.05)。结论抑郁症患者肠道菌群可能通过调节海马eCB相关分子诱导小鼠产生抑郁样行为。

针刺调控内源性大麻素系统抗抑郁机制研究进展

抑郁症是临床常见的精神障碍疾病,针刺具有显著的抗抑郁作用,但作用机制仍不明确,因此,可能限制针刺抗抑郁的进一步发展。研究发现,内源性大麻素系统在调控抑郁症的发生发展过程中具有重要作用,且针刺对大麻素系统有明显的调控作用。本研究通过检索近5年关于针刺调控内源性大麻素系统抗抑郁的相关研究,从内源性大麻素系统调节神经环路、神经递质传递、HPA轴与海马神经元功能等方面,分析针刺调控大麻素系统抗抑郁的作用机制,为针刺调控内源性大麻素系统抗抑郁的研究提供新的视角。

脂筏在CB2受体介导的内源性大麻素AEA抑制大鼠肝星状细胞增殖活性中的作用

目的探讨脂筏在内源性大麻素受体2(CB2)介导的内源性大麻素(AEA)抑制大鼠肝星状细胞(HSC)增殖活性中的作用及作用机制。方法构建大麻素受体2shRNA(Cnr2-shRNA)转染HSC细胞,干扰CB2受体的表达,采用MTT法检测转染前后不同浓度的AEA和甲基-β-环糊精(MCD)对HSC的作用效应;采用Western blot检测不同浓度AEA及MCD作用后HSC中P38丝裂原活化蛋白激酶(p-P38MAPK)和c-Jun氨基端激酶/应激活化蛋白激酶(p-JNK)的表达量;采用激光共聚焦法检测HSC上的脂筏(LRs)以及CB2受体的表达;蔗糖密度梯度离心法提取脂筏,Westernblot鉴定脂筏并检测脂筏中CB2受体的表达。结果成功构建Cnr2-shRNA转染筛选Cnr2-单克隆细胞株,MTT检测发现转染后CB2受体的减少能减弱AEA对HSC细胞增殖的抑制作用,然而用MCD预处理HSC细胞后CB2受体的减少对AEA的效应无明显影响。p-P38MAPK和p-JNK的表达与AEA浓度有依赖关系,且可以被MCD部分拮抗。CB2受体在HSC膜脂筏和胞质中均有表达,但用蔗糖密度梯度离心法提取AEA刺激前HSC细胞脂筏,发现未受AEA刺激时脂筏中含有的CB2受体量很少,CB2受体大部分存在于HSC细胞胞质中。结论 CB2受体参与AEA抑制HSC细胞增殖的过程与脂筏相偶联,通过脂筏这个信号平台AEA的刺激可能使CB2受体聚集或增多从而发挥级联放大效应,且这一效应与细胞中p-P38MAPK和p-JNK信号途径的激活有关。脂筏和CB2受体介导的信号传导途径可能成为治疗肝纤维化有效的作用靶点。

内源性大麻素对海马神经元AMPA受体GluR2的作用

目的探索内源性大麻素预处理对小鼠全脑缺血再灌注损伤后海马神经元α-氨基-3羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(AMPA)受体2亚基(GluR2)表达的影响及机制。方法雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、2-花生酰基甘油(2-AG)处理组、大麻素1型受体(CB1R)拮抗剂(AM251)+2-AG组和溶剂组。2-AG处理组腹腔注射2-AG 5 mg/kg;AM251+2-AG组腹腔注射AM251 1 mg/kg,30 min后腹腔给予2-AG 5 mg/kg;溶剂组腹腔给予0.1 ml二甲基亚砜(DMSO)。各组小鼠在预处理后30 min采用夹闭双侧颈总动脉20 min行再灌注的方法制备全脑缺血再灌注损伤模型。再灌注2 h取材行Western blot及免疫荧光检测。结果 GluR2高表达于正常小鼠海马CA1区锥体神经元;C57小鼠全脑缺血20 min,再灌后2 h海马组织GluR2表达明显下调(P<0.05);与模型组比较,2-AG处理组海马组织GluR2明显增高(P<0.05);与2-AG处理组比较,AM251+2-AG组海马组织GluR2明显下降(P<0.05)。结论内源性大麻素2-AG作用于神经元CB1R,逆转全脑缺血损伤导致的海马神经元GluR2表达下降。

内源性大麻素及其受体在肝硬化领域的研究进展

肝硬化时,内源性大麻素在血液、肝脏、心肌及大脑中表达量增加,通过其受体和其他途径促进肝硬化的发生发展,提示内源性大麻素系统在肝硬化及其并发症中发挥着重要的作用,成为近年来肝硬化药物作用的新靶点,为肝硬化的治疗拓展新的视野,本文就内源性大麻素及其受体在该领域的研究进行综述。

蛋白激酶C参与内源性大麻素花生四烯乙醇胺对L型钙电流的抑制作用

目的研究内源性大麻素物质花生四烯乙醇胺是否通过改变蛋白激酶C(PKC)活性从而抑制心肌L型钙电流,并进一步探讨可能改变PKC活性的信号途径。方法应用全细胞膜片钳技术记录单个心肌细胞的L型钙电流(P<0.05);应用PepTag非放射性蛋白激酶C检测系统(Promega)检测PKC活性;Elisa试剂盒测定细胞中二脂酰甘油(DAG)的含量;western blot技术测定磷脂酶Cβ(PLCβ)和磷酸化磷脂酶Cβ(p-PLCβ)表达。结果应用花生四烯乙醇胺灌流心肌细胞后显著抑制心肌L型钙电流(P<0.05),预先应用大麻素1型受体(CB1)阻断剂AM251或PKC非特异性激动剂佛波醇酯(PMA)可以完全阻断此抑制效应,而大麻素2型受体(CB2)阻断剂AM630没有阻断花生四烯乙醇胺抑制L型钙电流的作用。检测心肌细胞PKC活性发现,花生四烯乙醇胺明显抑制PKC活性(P<0.05),同样预先应用AM251或PMA完全阻断花生四烯乙醇胺对PKC活性的抑制效应,而AM630无此效应。应用花生四烯乙醇胺没有影响心肌细胞DAG含量和PLCβ的磷酸化。结论本实验首次证明内源性大麻素花生四烯乙醇胺激活心肌细胞CB1受体后抑制细胞PKC的活性,从而抑制L型钙电流,此过程没有PLCβ-DAG途径参与。

哺乳期过量的内源性大麻素干预导致成年鼠胰岛素抵抗

目的评估长期使用内源性大麻素（AEA）对成年鼠的体重、附睾脂肪组织和代谢相关参数的影响。方法雄性鼠从哺乳期全程口服豆油乳化的AEA20μg/g。断奶后每10d对其摄食和体重进行记录。成年后行葡萄糖．胰岛素耐受测试。随后，处死小鼠得到其附睾脂肪，并对其血浆中的胰岛素、瘦素、非酯化脂肪酸、甘油三酯和胆固醇进行测定。结果哺乳期AEA处理组的小鼠在成年后表现出比较对照组较高的摄食量、较重的体重和较多的附睾脂肪。对附睾脂肪组织的CBR1蛋白的测定中，AEA处理组比对照组小鼠增高约1．5倍。AEA处理组小鼠外周循环中有较高的葡萄糖、胰岛素、瘦素、甘油三酯、胆固醇和非酯化脂肪酸。且AEA处理组小鼠表现出一系列显著的胰岛素抵抗的指标。结论在小鼠哺乳期使用AEA处理后其成年小鼠的体重、脂肪积累和对代谢产生干扰。

高住低练对肥胖青少年内源性大麻素及相关食欲调节激素的影响

目的：健康饮食和适当运动减控体重后的食欲增加，有可能导致体重反弹，低氧对食欲调节和代谢的影响越来越引起研究者的关注。以内源性大麻素为靶点，探讨4周“运动与饮食控制”（低住低练）和“低氧舱睡眠结合运动与饮食控制”（高住低练）对胃肠调节激素的影响机制，诠释高住低练减控体重的新机理。方法：志愿参加全封闭式运动减肥的超重和肥胖青少年（1l～15岁）40名，随机分为低住低练组和高住低练组，并进行为期4周的干预。因5人退出实验，最终低住低练组19人，高住低练组16人。低住低练组采用有氧运动与饮食控制的干预方式，根据受试者的健康状况和运动负荷试验确定运动强度，制定个性化的运动处方，营养师根据受试者的基础代谢率制定合理的饮食方案，保证热量和必需营养物质的供给。高住低练组除进行运动和饮食控制干预外，受试者每天晚上睡在低氧房，低氧环境为模拟海拔2700m高度，每天低氧暴露10h。干预结束前、后分别检测肥胖相关的形态学指标、血液生化指标（血常规、糖脂代谢等）以及免疫学指标，并检测血浆中胃肠调节激素（ghrelin、PYY、CCK、MCP-1、GLP-1以及内源性大麻素）分泌水平。结果：1）干预后，低住低练组和高住低练组体重、BMI较干预前均下降，且两组间差异具有显著性（P〈0．05）；2）干预后，低住低练组内源性大麻素呈上升趋势，高住低练组内源性大麻素呈下降趋势，两组间内源性大麻素的差异具有统计学意义（P〈0．05）；3）干预后，其他食欲调节激素变化：低住低练组鲫〈呈下降趋势，高住低练组CCK下降程度减少，两组间∞（的差异具有统计学意义（P〈0．05）；干预后，低住低练组MCP-1呈下降趋势，高住低练组MCP-1呈升高趋势，两组间MCP-1的差异具有统计学意义（P〈0．05）；低住低练受试者CCK浓度下降程度和体重下降程度成正相关（P〈0．05），而高住低练组这种相关性消失。结论：内源性大麻素可能是高住低练减控体重的重要介质，有助于改善低住低练减控体重过程中下降的食欲抑制因子，从而可能有利于维持运动结合饮食减控体重的长期效果。

内源性大麻素系统对心血管功能的调节作用

内源性大麻素通过受体依赖性和非依赖性途径经一系列细胞内信号传导通路,可发挥多种重要的心血管效应,如舒张血管、降低血压和抑制心肌收缩等。它还参与抗炎、保护内皮细胞的作用。因此,对其作用机制的深入研究在防治高血压、动脉粥样硬化、缺血/再灌注损伤和心衰等心血管疾病中有重要意义。

内源性大麻素系统与抑郁症

内源性大麻素系统(endogenous cannabinoid system,ECS)是机体进化过程中高度保守的内分泌网络;是一个调节情绪、认知、植物神经系统和运动过程的神经调控系统。ECS功能障碍可促进抑郁、恐怖症、极度焦虑的进展和持续;增强ECS活性的药物可能代表了抗抑郁治疗的一个新方向,但此方面研究鲜见报道。

内源性大麻素配体NADA在大鼠脊髓背角的镇痛作用

目的:探讨内源性大麻素配体NADA对脊髓背角II层胶状质(SG)神经元突触兴奋性的影响及其在神经病理性痛模型上的镇痛作用。方法:利用膜片钳技术,观察NADA(40μmol/L)对SG神经元自发性兴奋性突触后电流(sEPSC)及背根诱发兴奋性突触后电流(eEPSC)的影响。制备脊神经结扎(SNL)模型,观察鞘内注射20μgNADA对机械性缩足反射阈值(PWMT)的影响。结果:通过作用于CB1受体,NADA可以显著抑制由Aδ纤维及C纤维介导单突触eEPSC的幅值,并且显著减低sEPSC频率而对其幅度无改变。在神经病理性痛模型中,与对照侧相比,NADA可以显著增加手术侧机械缩足反射阈值(P<0.0001),而溶剂组则无统计学意义(P>0.05)。结论:内源性大麻素配体NADA能够抑制脊髓背角浅层Aδ纤维及C纤维介导的突触传递,并且可以减轻实验动物的神经病理性疼痛。

内源性大麻素系统对皮层下运动中枢的调控作用

以往研究已证明,内源性大麻素系统广泛存在于中枢和外周神经组织中,并作为逆向信号分子在突触信号传递中发挥重要调节作用。本文就内源性大麻素系统对皮层下运动中枢的调控作用及相关机制进行综述,以期系统地论述皮层下运动中枢在躯体运动、动作选择和运动技能学习等高级神经活动过程中的突触和神经环路机制,并为相关疾病的治疗和靶向药物开发提供理论依据。

月经周期中内源性大麻素与性激素和促性腺激素的相关性研究分析

目的分析月经周期中不同时期正常女性血浆中N-花生四烯酸氨基乙醇(AEA)的水平变化及其与性激素和促性腺激素的相关性。方法选择2015年5~10月因输卵管梗阻或男方因素到本院生殖医学科就诊并欲行IVF助孕、月经周期和排卵正常的育龄妇女为研究对象。根据实验目的分为横断面研究组(79例)和纵向研究组(10例),检测AEA在两组女性月经周期中不同时期的变化,以及AEA与FSH、LH、E2、P之间的相关性。结果横断面研究组中早卵泡期、晚卵泡期、排卵期和黄体期AEA水平分别为(9.71±0.86)ng/ml、(10.61±1.05)ng/ml、(12.24±0.73)ng/ml和(7.46±0.71)ng/ml。排卵期AEA水平最高,黄体期最低(P<0.05)。纵向研究组4个时期AEA水平分别(8.76±0.91)ng/ml、(11.61±1.28)ng/ml、(13.85±1.18)ng/ml、(8.50±1.08)ng/ml,排卵期AEA水平最高,黄体期最低(P<0.05)。横断面研究组和纵向研究组各个时期的AEA水平比较均无显著性差异(P>0.05)。AEA与FSH、LH、E2之间存在显著的正相关(P<0.05),与P水平则无显著相关性(P=0.067)。结论正常女性血浆内AEA的浓度随月经周期的变化而变化,且与性激素和促性腺激素呈明显相关。但AEA与FSH、LH、E2、P之间的具体作用机制,有待进一步研究。

电针对偏头痛大鼠内源性大麻素及其分解酶活性的调控作用研究

目的:研究电针对电刺激硬脑膜大鼠偏头痛内源性大麻素及其分解酶活性的调节作用。方法:成年雄性SD大鼠随机分为4组,对照组、模型组、单穴组和假穴组。实验第9天取大鼠颈静脉血清,用酶联免疫吸附测定测定AEA、2-AG、MAGL、FAAH,结果:与模型组比较,单穴组AEA含量提高,差异有统计学意义(P<0.05),MAGL含量降低,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,模型组AEA含量降低,差异有统计学意义(P<0.05),MAGL含量提高,差异有统计学意义(P<0.05);与假穴组比较,单穴组AEA含量提高,差异有统计学意义(P<0.05),MAGL含量降低,差异有统计学意义(P<0.05);各组大鼠血清FAAH和2-AG含量无显著变化。结论:提示电针对偏头痛大鼠模型的内源性大麻素及其分解酶具有调节作用。

内源性大麻素N-花生四烯酸氨基乙醇介导卵巢癌细胞自噬和内质网应激

目的:探讨内源性大麻素N-花生四烯酸氨基乙醇(AEA)在卵巢癌中的作用,并深入研究其作用机制。方法:ELISA实验分析健康对照组和卵巢癌组患者血清中AEA的水平,并结合ROC曲线评估AEA对卵巢癌患者的诊断价值;结合CCK-8实验、Transwell小室侵袭实验和划痕实验检测AEA对卵巢癌细胞活性、迁移和侵袭的影响;并通过肿瘤体积、瘤重的测量及瘤组织肉眼观图进一步验证AEA对卵巢癌的作用;同时用流式细胞术和Western blot检测AEA对卵巢癌细胞凋亡的影响,进而采用Western blot检测卵巢癌细胞自噬及内质网应激相关蛋白的水平,探究其促进卵巢癌细胞凋亡的机制。结果:卵巢癌患者体内AEA的含量较健康对照组显著下降,ROC结果提示AEA有望成为区分卵巢癌患者和健康个体的灵敏性生物学标志物,且AEA可以抑制卵巢癌细胞的活力、迁移、侵袭,抑制卵巢癌组织生长。结论:AEA通过促进卵巢癌细胞内质网应激并影响其自噬,进而促进卵巢癌细胞凋亡。