内源性大麻素2-AG促进HSP70基因的热应激表达

目的探讨内源性大麻素对热应激反应是否存在调控作用,及其可能的受体调控机制。方法以不同浓度(10-7、10-6、10-5mol/L)内源性大麻素2-AG(2-Arachidonylglycerol)预处理大鼠胶质瘤C6细胞1h,热刺激(42℃水浴)1h,通过RT-PCR及Western blot检测热休克蛋白70(heat shock protein70,HSP70)的mRNA及蛋白表达水平;同时观察特异性受体拮抗剂AM251或AM630的拮抗效应,探讨信号通路机制。结果内源性大麻素2-AG可显著促进热刺激处理的C6细胞HSP70基因及蛋白的表达,该调控效应由CB1介导。结论一定浓度的内源性大麻素2-AG对热刺激处理的C6细胞内HSP70基因的表达有明显促进效应,表明2-AG对细胞热应激反应可能具有一定的调控能力;同时,在C6细胞内,该调控效应主要由CB1介导。

脂筏在CB2受体介导的内源性大麻素AEA抑制大鼠肝星状细胞增殖活性中的作用

目的探讨脂筏在内源性大麻素受体2(CB2)介导的内源性大麻素(AEA)抑制大鼠肝星状细胞(HSC)增殖活性中的作用及作用机制。方法构建大麻素受体2shRNA(Cnr2-shRNA)转染HSC细胞,干扰CB2受体的表达,采用MTT法检测转染前后不同浓度的AEA和甲基-β-环糊精(MCD)对HSC的作用效应;采用Western blot检测不同浓度AEA及MCD作用后HSC中P38丝裂原活化蛋白激酶(p-P38MAPK)和c-Jun氨基端激酶/应激活化蛋白激酶(p-JNK)的表达量;采用激光共聚焦法检测HSC上的脂筏(LRs)以及CB2受体的表达;蔗糖密度梯度离心法提取脂筏,Westernblot鉴定脂筏并检测脂筏中CB2受体的表达。结果成功构建Cnr2-shRNA转染筛选Cnr2-单克隆细胞株,MTT检测发现转染后CB2受体的减少能减弱AEA对HSC细胞增殖的抑制作用,然而用MCD预处理HSC细胞后CB2受体的减少对AEA的效应无明显影响。p-P38MAPK和p-JNK的表达与AEA浓度有依赖关系,且可以被MCD部分拮抗。CB2受体在HSC膜脂筏和胞质中均有表达,但用蔗糖密度梯度离心法提取AEA刺激前HSC细胞脂筏,发现未受AEA刺激时脂筏中含有的CB2受体量很少,CB2受体大部分存在于HSC细胞胞质中。结论 CB2受体参与AEA抑制HSC细胞增殖的过程与脂筏相偶联,通过脂筏这个信号平台AEA的刺激可能使CB2受体聚集或增多从而发挥级联放大效应,且这一效应与细胞中p-P38MAPK和p-JNK信号途径的激活有关。脂筏和CB2受体介导的信号传导途径可能成为治疗肝纤维化有效的作用靶点。

内源性大麻素对海马神经元AMPA受体GluR2的作用

目的探索内源性大麻素预处理对小鼠全脑缺血再灌注损伤后海马神经元α-氨基-3羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(AMPA)受体2亚基(GluR2)表达的影响及机制。方法雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、2-花生酰基甘油(2-AG)处理组、大麻素1型受体(CB1R)拮抗剂(AM251)+2-AG组和溶剂组。2-AG处理组腹腔注射2-AG 5 mg/kg;AM251+2-AG组腹腔注射AM251 1 mg/kg,30 min后腹腔给予2-AG 5 mg/kg;溶剂组腹腔给予0.1 ml二甲基亚砜(DMSO)。各组小鼠在预处理后30 min采用夹闭双侧颈总动脉20 min行再灌注的方法制备全脑缺血再灌注损伤模型。再灌注2 h取材行Western blot及免疫荧光检测。结果 GluR2高表达于正常小鼠海马CA1区锥体神经元;C57小鼠全脑缺血20 min,再灌后2 h海马组织GluR2表达明显下调(P<0.05);与模型组比较,2-AG处理组海马组织GluR2明显增高(P<0.05);与2-AG处理组比较,AM251+2-AG组海马组织GluR2明显下降(P<0.05)。结论内源性大麻素2-AG作用于神经元CB1R,逆转全脑缺血损伤导致的海马神经元GluR2表达下降。

内源性大麻素CB2受体拮抗剂AM630对电针镇痛作用的影响

目的：研究内源性大麻素2型受体（CB2受体）拮抗剂AM630对电针镇痛作用的影响。方法：本课题组采用健康成年雄性SD大鼠共50只，随机分为五组：空白对照组（n=10）；炎症组（n=10）；电针治疗组（n=10）；电针＋CB2拮抗剂AM630组（n=10）：电针＋溶媒对照组（n=10）。除空白对照组外其它各组大鼠于左后肢外踝关节皮下注射完全弗式佐剂50μl，制备单发局限性佐剂关节炎模型，

内源性大麻素的COX-2氧化产物在突触传递中的作用

内源性大麻素(eCBs)是在各种生理和病理过程中具有重要作用内源性脂质介质,通过结合和激活大麻素受体调节突触功能。环氧合酶-2(COX-2)是催化花生四烯酸转化为前列腺素的限速酶,广泛参与脑创伤、缺血诱导的神经元损伤、炎症反应及神经退行性疾病等。eCBs及其COX-2氧化代谢物形成新颖的前列腺素在突触传递和可塑性中起着不同的作用。因此,阐明eCBs的COX-2氧化代谢物在突触信号中的作用,有助于理解eCBs及其COX-2氧化代谢物在COX-2相关的神经退行性疾病中的作用机制,为减轻或阻止由于COX-2的过度表达导致的神经退行性疾病探索新的治疗方法和途径提供依据。

内源性大麻素系统调控对心肺复苏后肾脏TXB、PGE2和PGD2含量的影响

目的 观察内源性大麻素单酰甘油脂肪酶抑制剂对心肺复苏后大鼠肾脏血栓素B2(TXB2)、前列腺素E2(PGE2)和前列腺素D2(PGD2)的影响。方法 将健康雄性SD清洁级大鼠分为3组,Sham组、CPR组和CPR+URB602组。CPR+URB602组和CPR组建立心肺复苏模型,并分别在复苏后即刻给予肾上腺素,自主循环恢复(ROSC)后1 min腹腔注射URB602(5 mg/kg)和同等剂量溶剂。ROSC后6 h后取标本检测肾脏组织TXB2、PGE2和PGD2、内源性大麻素2-酰基甘油(2-AG)、N-花生四烯酸氨基乙醇(AEA)、花生四烯酸(AA)含量。结果 CPR+URB602组和CPR组在ROSC后6 h AEA、2-AG、AA、PGE2、PGD2和TXB2都升高,CPR组AA、PGE2、PGD2和TXB2较CPR+URB602组升高更明显(P<0.05),但CPR+URB602组2-AG升高较CPR组更明显(P<0.05)。结论 心搏骤停-心肺复苏后肾脏内源性大麻素系统和花生四烯酸代谢通路激活,而内源性大麻素单酰甘油脂肪酶水解酶抑制剂URB602可以抑制AA代谢。

高脂膳食对超重和肥胖小鼠血清和脂肪组织内源性大麻素系统的影响

目的:探讨高脂膳食诱导下,不同肥胖程度小鼠血清内源性大麻素(endocannabinoids,EC)、脂肪组织大麻素受体、合成酶和降解酶的变化趋势及其机制。方法:6周龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组(n=25,喂食普通饲料)和高脂诱导组(n=205,喂食D12492高脂饲料,脂肪提供热量占60%),诱导时间10周。对照组随机挑选10只平均体重记为X(g);高脂诱导组按体重分类标准分4组(每组随机挑选10只):抵抗组(X×0.9<体重≤X×1.1)、超重组(X×1.1<体重≤X×1.2)、肥胖组(X×1.2<体重≤X×1.5)和严重肥胖组(体重>X×1.5)。采用高效液相色谱法检测血清大麻素含量,荧光定量PCR检测脂肪组织大麻素受体、合成酶和降解酶表达变化。结果:1)从对照组、超重组、肥胖组到严重肥胖组,血清大麻素平均水平依次升高,但只有严重肥胖组血清2-AG、AEA和OEA与对照组相比显著升高(P<0.01,P<0.05和P<0.05)。2)(超重+肥胖+严重肥胖组)VS对照组,脂肪组织大麻素受体CB1,CB2 m NRA表达下降(P<0.05和P<0.05),2-AG合成酶DAGLβ表达上升(P<0.01)。3)将超重、肥胖和严重肥胖组小鼠综合起来分析发现,血清2-AG与体重(P=0.004,r=0.586)和内脏脂肪量(P=0.001,r=0.647)均呈中度正相关,而血清AEA仅与内脏脂肪量呈正相关(P=0.034,r=0.453)。4)内脏脂肪量与脂肪组织2-AG合成酶ABHD4(P=0.022,r=-0.466)、DAGLβ(P=0.019,r=-0.475)、降解酶ABHD6(P=0.000,r=-0.738)、MAGL(P=0.012,r=-0.505)、AEA和OEA的共同降解酶NAAA(P=0.003,r=-0.586)m RNA表达呈负相关。结论:高脂诱导下,超重、肥胖和严重肥胖组小鼠血清循环大麻素水平依次升高,脂肪组织大麻素受体CB1表达依次下降,大麻素合成酶与降解酶与内脏脂肪量均呈负相关。因此我们推测:对于相同诱导时间下的不同肥胖程度小鼠,大麻素合成酶表达下调的速度低于降解酶和CB1受体的下调速度,使得循环大麻素水平升高,这些因素共同促成了肥胖相关的外周ECS活化。

内源性大麻素系统与肠易激综合征相关性的研究进展

肠易激综合征（IBS）是一种常见的胃肠道功能紊乱性疾病，其特征为持续或间歇发作的腹痛、腹胀、排便习惯改变和大便性状异常而无特异的生物化学或形态学异常。最近流行病学调查显示，IBS在西方国家发病率为10％～15％^[1]、在亚洲国家的发病率也达到5％～10％^[2]。在我国，北京地区、广州地区IBS患者占消化门诊患者的比例分别为25％～50％^[3]和34．3％^[41]。IBS具有反复发作的特点，严重降低患者的生活质量，并且占用大量医疗咨派^[5-6]

内源性大麻素系统在能量调节中的研究进展

随着肥胖、2型糖尿病等慢性疾病在全球流行,其对公共卫生造成严重负担、造成巨大的经济和社会后果。目前缺乏有效手段控制肥胖及相关疾病的流行.影响能量调节的中枢及外周途径是研究者关注的热点,找出一种有效控制人体内能量平衡的方式显得极其迫切。

内源性大麻素系统与老年性痴呆

老年性痴呆即阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一种慢性进行性的神经退行性病变,其特征性病理改变为β-淀粉样蛋白(β-amyloid peptide,Aβ)沉积形成的细胞外老年斑和tau蛋白过度磷酸化形成的神经细胞内神经原纤维缠结,以及神经元丢失伴随胶质细胞增生等。最近的研究发现内源性大麻素系统对AD的病程有预防治疗作用,主要基于其对神经的保护作用和抗炎功效。本文综述了内源性大麻素对AD的保护作用的几个方面,旨在为AD的治疗开辟新的策略和思路。

内源性大麻素系统与麻醉相关炎症反应的研究进展

炎症是机体的一种防御反应,其主要目的为根除致病因子造成的机体损伤并且恢复受损组织功能。在某些炎症环境中,因致病因子毒性过强或致病因子存在时间过长等导致机体中的炎症因子和炎症介质代谢失衡,从而引起其他系统的疾病;如与麻醉相关的脓毒症和慢性病理性痛。最近研究显示,内源性大麻素系统的代谢与炎症的产生、维持和消退都有关联。本文以内源性大麻素系统与炎症的关系为基础,综述其在麻醉相关炎症性疾病中的研究进展。

内源性大麻素含量升高可激活脊髓背角星形胶质细胞并导致机械性触诱发痛

目的:观察丁高大鼠鞘内大麻素水平后实验动物的疼痛行为学变化及脊髓背角星形胶质细胞的激活状态,探讨内源性大麻素参与触诱发痛的可能机制。方法:成功建立大鼠鞘内置管模型后,分别鞘内注射外源性大麻素2-AG、大麻素受体激动剂CP55940、大麻素水解酶抑制剂JZL195。使用Von-frey纤维丝观察给药后不同时间点大鼠机械性缩足反射阈值的变化,运用共聚焦显影观察脊髓背角星形胶质细胞的激活状态。结果:(1)鞘内注射2-AG、CP55940、JZLl95后1 d即产生明显的触诱发痛(P<0.01)并至少持续到给药后第21 d(P<0.001);(2)鞘内注射2-AG、CP55940和JZLl95后第5 d即有明显的星形胶质细胞激活(P<0.01),并可持续到给药后第21 d(P<0.01)。结论:升高鞘内大麻素水平可能通过激活星形胶质细胞导致触诱发痛。

内源性大麻素对神经元损害的保护作用的研究进展

内源性大麻素(eCBs)作为内源性脂质介质参与各种生理和病理过程。环氧合酶-2(COX-2)是神经源性炎症的重要分子,与神经变性病(如多发性硬化,帕金森氏综合症及老年性痴呆)的发病机理有关,同时参与创伤性脑外伤和缺血诱导的神经元损伤的病理过程。eCBs及其COX-2氧化代谢物对神经元起着不同的作用。因此,阐明eCBs对神经元损害的保护作用,有助于理解eCBs及其COX-2氧化代谢物在COX-2相关的神经变性病中的作用机制。

内源性大麻素系统在神经病理性疼痛中的作用和研究进展

神经病理性疼痛(Neuropathic pain, NP)作为慢性疼痛的常见来源,其发病机制复杂且目前尚无有效治疗手段;又因其发病时产生持续的灼烧似疼痛而严重影响患者的正常生活,给个人和社会带来沉重负担。内源性大麻素系统(Endocannabinoid System, ECS)已被证实是内源性抗伤害系统的一部分, 包含多个有前景的NP治疗靶点:目前研究表明激活外周CB1受体通路、靶向激活CB2受体、抑制内源性大麻素降解酶和调节瞬态受体电位通道(TRP)等都是有效减轻NP症状的策略。本文主要从上述四个方面对ECS在疼痛管理中的作用和分子机制及相关NP治疗靶点的研究进展做一综述,以期为NP的治疗及ECS相关药物的开发提供理论支持。

电针激活CB2受体增强细胞自噬功能缓解炎性痛的机制

目的观察电针对野生型小鼠和内源性大麻素2型受体(Canabinoid receptor 2,CB2受体)基因敲除小鼠完全弗氏佐剂(Complete Freund’s adjuvant,CFA)诱导的炎性痛的缓解作用和炎症皮肤组织中细胞自噬功能的影响;激活CB2受体模拟电针作用,观察其对NR8383巨噬细胞自噬功能以及线粒体受损情况的影响,探讨电针能否通过激活CB2受体增强炎症皮肤组织自噬功能并清除受损线粒体从而缓解炎性痛。方法采用热板测痛法测定小鼠的热痛阈;采用von Frey丝,以“up and down”方法测定小鼠机械痛阈;采用Western blot检测野生型和CB2受体基因敲除小鼠足背皮肤组织中自噬相关蛋白p62和微管相关蛋白轻链3(light chain 3,LC3)的表达及NR8383巨噬细胞中p62和LC3的表达;采用流式细胞术检测受损线粒体的数量。结果①CFA诱导炎性痛模型的野生型小鼠和CB2受体基因敲除小鼠的热痛阈值和机械痛觉阈值均较溶媒对照组显著下降(P<0.01);电针可显著提高野生型炎性痛模型小鼠的热痛阈值和机械痛阈值(P<0.05),而对CB2受体基因敲除炎性痛模型小鼠无显著影响(P>0.05)。②电针可翻转炎性痛模型的野生型小鼠炎症皮肤组织中自噬相关蛋白p62表达增加和LC3-Ⅱ/Ⅰ比值降低,从而促进炎症皮肤组织中细胞自噬功能,而对CB2受体基因敲除炎性痛模型小鼠无影响;③采用CB2受体激动剂AM1241激活NR8383巨噬细胞中CB2受体可减少p62蛋白表达,升高LC3-Ⅱ/Ⅰ比值,从而改善CFA引起的自噬功能减弱,该作用可被CB2受体拮抗剂AM630所翻转;④采用CB2受体激动剂AM1241激活NR8383巨噬细胞中CB2受体可减少受损线粒体的数量,该作用可被CB2受体拮抗剂AM630所翻转,提示CB2受体的激活能促进巨噬细胞的自噬作用,从而清除受损的线粒体。结论电针通过激活CB2受体,增强炎症皮肤组织细胞自噬功能,清除受损的线粒体,从而缓解炎性痛。

脂筏介导的内源性大麻素对HepG2细胞的作用及其机制

目的研究内源性大麻素（AEA）以脂质为基础的信号途径对肝癌细胞株HepG2的作用机制，探讨AEA在肝癌发生和发展中的作用。方法免疫荧光检测脂肪酸水解酶、大麻素受体（CB）1和CB2在胎肝细胞株L02和肝癌细胞株HepG2中的定位。以不同浓度的AEA及膜胆固醇耗竭剂甲基-β-环糊精（MCD）处理，分为AEA10μmol／L组、AEA20μmol／L组、AEA40μmol／L组、MCD10mmol／L＋AEA10μmol／L组、MCD10mmol／L＋AEA20μmol／L组和MCD10mmol／L＋AEA40μmol／L组，分别孵育L02细胞和HepG2细胞，流式细胞术碘化丙啶单染法检测细胞的坏死率。WesternBlot检测L02和HepG2细胞中脂肪酸水解酶、CBl和CB2的蛋白表达及其下游信号通路磷酸化P38促分裂原活化蛋白激酶（P—P38MAPK）和磷酸化CJun氨基端激酶（P—JNK）的表达变化。组间均数的比较采用独立样本t检验或单因素方差分析。结果AEA可有效地导致肝癌细胞坏死，以浓度为AEA40μmol／L组达到最大效应，F=108．594，P〈0．05，差异有统计学意义。MCD10mmol／L预孵育后的HepG2细胞坏死率在AEA10μmol／L组、AEA20μmol／L组和AEA40μmol／L组分别为7盘3％±2．13％，16．30％±0．94％，43．09％±5．10％，MCD处理前AEA10μmol／L组、AEA20μmol／L组、AEA40μmol／L组分别为13．64％±1．69％、20．28％±0．91％、52．71％±4．29％，处理前后比较，t值分别为3．702，5．274和3．503，P值均〈0．05，差异均有统计学意义。同时，AEA能激活HepG2细胞中P38MAPK和JNK，以AEA40μmol／L组作用明显，F值分别为11．908和26．054，P值均〈0．05，差异均有统计学意义，MCD作用前P—P38MAPK和P—JNK／D-肌动蛋白灰度值分别为1．63±0．06，1．60±0．31，MCD作用后PP38MAPK／β-肌动蛋白、P-JNK灰度值分别为1．14±0．01、1．17±0．29，作用前后相比，t值分别为2．801和12．829，雅均〈0．05，差异均有统计学意义。结论AEA可以有效地导致HepG2细胞坏死而对L02细胞无影响，AEA激活了HepG2细胞pP38MAPK和PJNK相关信号传导途径，且此过程与脂筏有关。

气相色谱质谱联用仪定量检测内源性大麻素花生四烯乙醇胺及2-花生四烯酸甘油在胆道恶性肿瘤中的表达规律

目的探讨两种主要的内源性大麻素花生四烯乙醇胺(AEA)及2-花生四烯酸甘油(2-AG)在胆道恶性肿瘤(BTC)患者体液及肿瘤组织中的表达规律。方法采集中山大学附属第一医院2013年12月至2014年9月收治的22例BTC患者及8例良性胆道疾病患者的外周血及胆汁,其中15例BTC患者同时收集癌巢组织及癌旁正常组织,利用氯仿/甲醇抽提法配合固相萃取,分离患者体液及组织样本中的脂质,以二甲基异丙基硅烷-咪唑对脂质进行硅烷化处理,气相色谱质谱联用仪测定AEA及2-AG的浓度。结果与良性胆道疾病患者相比,BTC患者血浆中2-AG显著升高[180.01(140.72~283.84)nmol/L vs 42.33(25.61~148.93)nmol/L,P<0.05],AEA浓度降低但差异无统计学意义;胆汁中AEA浓度显著降低[1.80(0.50~5.00)nmol/L vs 10.15(2.68~17.49)nmol/L,P<0.05],2-AG浓度升高但差异无统计学意义。BTC癌巢组织与癌旁正常组织相比,AEA浓度显著降低[22.01(16.55~53.61)pmol/g vs 58.68(25.36~68.97)pmol/g,P<0.05],2-AG显著升高[1.97(1.44~5.43)nmol/g vs 1.10(0.36~1.47)nmol/g,P<0.05]。结论本研究建立了在BTC中定量检测AEA和2-AG两种内源性大麻素浓度的有效方法,测定AEA及2-AG在BTC患者体液及肿瘤组织中的异常表达,可作为BTC的辅助诊断。

基于内源性大麻素探讨皂术抗纤方治疗肝纤维化大鼠的作用机制

目的:基于内源性大麻素研究皂术抗纤方对肝纤维化大鼠的药理效应及其作用机制。方法:按照随机数字表法将40只Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、皂术抗纤方组和安络化纤丸组,每组10只。模型组、皂术抗纤方组和安络化纤丸组给予四氯化碳(CCl4)腹腔注射8周,复制肝纤维化模型。第5~8周,皂术抗纤方组、安络化纤丸组分别给予皂术抗纤方(16.1g/kg)、安络化纤丸(30g/kg)治疗。检测各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,肝组织羟脯氨酸(Hyp)、N-花生四烯酸氨基乙醇(AEA)、2-花生四烯酸甘油(2-AG)及内源性大麻素水解酶脂肪酰胺水解酶(FAAH)、单酰基甘油酯酶(MGL)mRNA表达量变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠肝组织出现明显肝纤维化,血清ALT、AST水平及肝组织Hyp、AEA、2-AG含量显著升高(P<0.01),FAAH、MGL mRNA表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,皂术抗纤方组、安络化纤丸组血清ALT、AST水平及肝组织Hyp含量均显著降低(P<0.01),皂术抗纤方组肝组织大麻素AEA、2-AG含量显著降低(P<0.01),FAAH、MGL mRNA表达显著升高(P<0.01)。结论:皂术抗纤方治疗肝纤维化效果显著,其作用机制与调节内源性大麻素有关。

电针镇痛的外周机制与皮肤内源性大麻素系统

疼痛是与组织损伤相关联的不愉快的感觉和情绪体验。伤害性刺激引起外周组织释放多种炎性因子,免疫细胞释放各种细胞因子,参与激活和调制伤害性感受器,同时外周敏感化,致使神经-免疫微环路调节成为痛觉调制的关键环节。传统观念认为,针刺镇痛主要受中枢性镇痛机制以及内源性阿片肽系统调制;最近的研究表明,外周镇痛机制(包括局部炎性因子、内源性阿片肽系统以及皮肤内源性大麻素系统)能更好地解释针刺镇痛取得的"气至病所"的功效。