超滤膜截留-二氧化钛选择性富集-纳升级液相色谱-串联质谱法检测血清中内源性磷酸化肽

采用超滤膜(Ultrafiltration membrane)去除血清中的大量高丰度蛋白、DNA和RNA等大分子量干扰化合物,然后利用TiO2富集超滤膜滤过液中的磷酸化肽,结合纳升级超高压液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(nano UPLC-Q-TOF)分离和检测技术,提高了内源性磷酸化肽的检测灵敏度;将本方法应用于肺癌患者血清中的内源性磷酸化肽分析,成功检测到18种内源性磷酸化肽。本方法实现了高灵敏度、高选择性血清中内源性磷酸化肽的富集和检测,为肿瘤生物标志物的发现奠定了方法学基础。

妊娠合并宫颈癌中唾液内源性磷酸化肽段的诊断价值

目的研究唾液内源性磷酸化肽段在妊娠合并宫颈癌中的诊断价值,筛选出可能的诊断标志物。方法选择2016年至2018年在武警福建省总队医院、上海第一妇婴和福建省人民医院接受妊娠合并宫颈癌检查的36例患者,按临床分期分为Ⅰ期组12例、Ⅱ期组13例、Ⅲ期组11例,同期在武警福建总队医院妇产科生产的健康孕妇38例作为健康孕妇组。使用唾液采集管分别采集每位健康孕妇和患者的唾液。使用磷酸化肽段富集试剂盒处理唾液样品,得到含内源性磷酸化肽段的洗脱液。使用质谱仪分析洗脱液样品中内源性磷酸化肽段的种类及丰度。结果在全部74例受试者的唾液样品中,共鉴定到25条内源性磷酸化肽段。其中,健康孕妇唾液中鉴定到22条(88%,22/25),Ⅰ期妊娠合并宫颈癌患者唾液中鉴定到20条(80%,20/25),Ⅱ期患者唾液中鉴定到21条(84%,21/25),Ⅲ期患者唾液中鉴定到19条(76%,19/25)。15条(60%,15/25)唾液磷酸化肽段的丰度在健康孕妇和妊娠合并宫颈癌患者之间差异有统计学意义(P<0.05)。共有11条唾液内源性磷酸肽段(44%,11/25)是潜在的妊娠合并宫颈癌诊断标志物,其质荷比(m/z)分别为1076.4、1230.3、1270.3、1461.4、1589.4、1784.6、2004.7、2119.7、2323.7、2541.8、2722.8。其中,质荷比为2119.7的唾液内源性磷酸化肽段对Ⅰ期妊娠合并宫颈癌患者的诊断准确率最高,可达66%。结论根据特定唾液内源性磷酸化肽段的丰度可以在一定程度上区分健康和Ⅰ~Ⅲ期妊娠合并宫颈癌患者,唾液内源性磷酸化肽段具有早期诊断妊娠合并宫颈癌的价值。