内源性禽白血病病毒ev/J基因克隆与分析

用位于内源性禽白血病病毒ev/J 5′和3′长末端序列(LTR)上的引物,对我国的灵山麻鸡、江汉鸡、肉鸡和SPF鸡正常基因组中内源性ev/J进行扩增,结果扩增出长约为4 kb、2.2 kb和2 kb 3种大小的片段。测序分析表明,这些片段分属于Ⅱ型和Ⅳ型ev/J以及另一类具有更大缺失的ev/J基因。ev/J在这几个品系鸡中分布并不完全相同,肉鸡和SPF鸡均具有Ⅱ型和Ⅳ型ev/J,江汉鸡只含Ⅱ型ev/J,而灵山麻鸡则含有另一类具有更大缺失的ev/J基因。此次获得的Ⅳ型ev/J序列不仅相互之间高度同源,而且其env基因与外源性ALV-J原型株HPRS-103env基因以及我国外源性ALV-J主要分离株env基因也高度同源,表明内源性ev/J在宿主正常基因组中高度保守。

内源性禽白血病病毒ev/J gp85基因的表达

从已构建的质粒pGEM-MTCgp85中酶切回收ev/J gp85基因,通过构建杆状病毒转移载体pFast-Bac1-ev/Jgp85和重组杆状病毒穿梭载体Bacmid-ev/Jgp85,将ev/Jgp85基因转入Bac-to-Bac高效真核表达系统的Sf9昆虫细胞进行真核表达。间接免疫荧光试验显示,构建的重组杆状病毒感染的Sf9细胞出现与野生型杆状病毒感染的Sf9细胞阴性对照明显不同的亮绿荧光;Western blot分析DAB显色,重组病毒感染的Sf9细胞蛋白显示出约35ku的阳性条带。结果表明,内源性ev/Jgp85基因在Sf9细胞中得到良好的表达,并且其编码产物完全可以被外源性ALV-J的特异性单抗JE9识别。

腺病毒载体介导编辑chNHE1基因对J亚群禽白血病病毒抗性研究

鸡Na~+/H~+离子交换蛋白-1(chNHE1)是J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的细胞受体,是ALV-J感染的细胞靶点。为了探索鸡抗禽白血病的育种目标,试验构建了定点编辑chNHE1基因的CRISPR/Cas9腺病毒系统,并对编辑后细胞抗ALV-J感染能力进行评价。结果显示:使用CRISPR/Cas9腺病毒载体介导的ssODNs同源重组方案可以在chNHE1中引入突变,其中36%单克隆细胞株存在W38缺失;T37缺失的细胞对ALV-J感染具备极显著的抗性;W38缺失的细胞对ALV-J感染具有完全抗性,同时具有E35A替换、P36缺失、T37缺失的细胞对ALV-J感染也具有完全抗性。研究表明,CRISPR/Cas9腺病毒载体可以有效地编辑鸡DF-1细胞,W38缺失或E35A替换P36、T37缺失都可以使DF-1对ALV-J感染具有抗性,该方案为培育抗ALV-J感染的基因编辑鸡提供技术储备。

利用三代全长转录组测序对禽内源性白血病病毒ALVE3不同插入类型鸡进行血液转录组分析

为进一步探索不同内源性禽白血病病毒3(Avian leukosis virus subgroup E,ALVE3)插入个体间的转录本差异,研究利用PacBio三代测序平台对ALVE3无插入、杂合插入和纯合插入的白来航公鸡血液样本进行全长转录组测序,分别获得27 784、38 460、44 487条转录本,平均长度分别为2 850 bp、3 078 bp和3 166 bp,辅助二代测序数据对其进行校正和定量,并将所得数据与GRCg6a参考基因组比对,将比对到基因组上的转录本进行差异表达分析及lncRNA预测。结果显示,在有ALVE3插入个体中特异存在的转录本有3 657条,将这些转录本利用BLAST与ALVE3全长序列比对,发现转录本Novelgene1474_novel01与ALVE3互补链对应序列高度同源,长度为5 575 bp,说明ALVE3互补链能够产生转录本,对其翻译潜能进行预测后,推测该转录本为lncRNA。此外对不同ALVE3插入情况个体间的差异表达基因进行富集分析,在GO/KEGG中富集到多条免疫相关通路,说明ALVE3的插入可能对机体内免疫相关基因的表达有影响。研究表明,检测到ALVE3反义链可转录产生一段长为5 575 bp的lncRNA,该转录本在介导先天免疫通路中可能发挥作用。

鸡内源性类J亚群禽白血病病毒gp85基因的克隆及分析

为深入探讨J亚群禽白血病病毒(AvianleukosisvirussubgroupJ,ALV J)的亚群特性,利用ALV Jgp85基因两侧的序列片段为引物,从正常SPF蛋鸡、商品肉鸡和DF1细胞基因组中完整地扩增了内源性类ALV Jgp85基因。肉鸡和DF1细胞内源性类ALV Jgp85基因同源性达99 9%;SPF蛋鸡内源性类ALV Jgp85基因与肉鸡和DF1细胞的内源性类ALV Jgp85基因之间同源性达95 6%、95 3%。三种不同来源的内源性类ALV Jgp85基因DNA与IMC10200株ALV J的gp85基因的同源性分别为91 8%、94 1%、94 0%;与ALV J原型株HPRS 103gp85基因的同源性分别为95 6%、98 3%、99 9%。内源性类ALV Jgp85序列与外源性ALV Jgp85基因具有相似或一致的ORF和Jameson Worlf抗原表位优势。

J亚型禽白血病病毒感染琅琊鸡的排毒动态及对繁殖性能的影响

【背景】我国地方鸡资源丰富,J亚型禽白血病(J subtype avian leukemia,AL-J)在地方鸡种中的传播制约着地方鸡的保种、开发利用等工作的进行。【目的】通过分析J亚型禽白血病病毒(J subtype avian leukemia virus,ALV-J)阳性琅琊鸡公鸡排毒动态、ALV-J阳性琅琊鸡母鸡在开产前至自繁时的排毒动态及ALV-J对繁殖性能(受精率、孵化率、产蛋数及高峰产蛋后产蛋下降速率)的影响,为我国地方鸡品种的AL-J净化提供参考依据,助力我国地方鸡品种的保护、开发利用。【方法】对ALV-J阴、阳性琅琊鸡母鸡群体自145日龄开始,每30 d进行血液病毒分离、泄殖腔拭子P27抗原检测;ALV-J阳性公鸡群体自330日龄开始,每隔4 d进行精液病毒分离、泄殖腔拭子P27抗原检测;进行ALV-J阴、阳性公鸡精液品质、DNA损伤程度和ALV-J阴、阳性母鸡蛋品质测定,并进行ALV-J阴、阳性公母鸡配种输精试验(G1组:阳性公鸡×阳性母鸡;G2组:阳性公鸡×阴性母鸡;G3组:阴性公鸡×阳性母鸡;G4组:阴性公鸡×阴性母鸡),统计各组种蛋的受精率和孵化率。对ALV-J阴、阳母鸡群体从开产至43周龄的周均产蛋数及高峰产蛋后产蛋下降速率进行分析。【结果】ALV-J阳性公鸡排毒动态研究表明,精液和泄殖腔拭子每次检测结果并不完全一致,部分阳性鸡仅精液或泄殖腔拭子检测为阳性,在20只阳性公鸡中有5只公鸡的精液在连续检测中呈现阴性。ALV-J阳性母鸡排毒动态结果显示,血液病毒分离检出率,205日龄最低(78.16%),325日龄最高(90.79%),265、295和325日龄呈逐步增高趋势,且295和325日龄相近。ALV-J阴、阳性鸡群血液病毒分离和泄殖腔拭子的检测结果比较说明,泄殖腔拭子检测存在较高的假阳性和漏检率。ALV-J阴、阳性公鸡常规精液品质和DNA损伤程度检测(DFI)无显著差异(P>0.05)。ALV-J阴、阳性母鸡的蛋品质测定结果显示,蛋重、哈氏单位、蛋黄重、蛋白高度等指标差异极显著(P<0.01)。蛋壳强度、蛋形指数、蛋黄颜色、蛋壳厚度指标差异不显著(P>0.05);配种输精试验结果显示,ALV-J阳性公鸡种蛋受精率和孵化率与阴性鸡群无明显差异,ALV-J阳性母鸡种蛋的受精率和孵化率明显低于阴性鸡群,与ALV-J阳性公、母鸡种蛋受精率、孵化率无显著差异。ALV-J阴、阳性群体产蛋性能分析表明,ALV-J阳性群体开产至43周龄的周均产蛋数显著低于ALV-J阴性群体(P<0.01),ALV-J阴性群体的产蛋高峰后产蛋下降速率(0.016)低于ALV-J阳性群体(0.033)。【结论】ALV-J阳性公鸡中鸡精液多次检测为阴性个体,在ALV-J阳性率较高的地方鸡种中可作为种公鸡使用。通过ALV-J琅琊鸡排毒动态研究结果结合自繁时间,300日龄前后为进行ALV-J血液病毒分离检测的最佳时间段。泄殖腔拭子ALV检测存在极高的假阳性和漏检率,不建议采用。ALV-J感染母鸡产蛋数显著降低,产蛋高峰后产蛋下降速率加快,并显著降低鸡蛋的蛋重、蛋黄重、蛋白高度等指标,导致受精率、孵化率降低。研究结果为琅琊种鸡的ALV-J净化方案的制定提供了数据支撑。

J、K亚群禽白血病病毒的分离和囊膜蛋白(gp85)基因序列分析

为了解现阶段我国禽白血病病毒(ALV)的流行特征和演化趋势,本试验于2021—2022年从国内某鸡场采集蛋清ALV衣壳蛋白(p27)抗原阳性的鸡血浆,接种鸡胚成纤维细胞(DF-1)分离病毒并进行亚群鉴定;采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增分离株的囊膜蛋白(gp85)基因片段,并对其进行测序,将基因序列与ALV不同亚群毒株进行比对和遗传进化分析;选取氨基酸变化差异较大的分离毒株进行间接免疫荧光鉴定。结果显示,共分离到7株ALV毒株(3株J亚群,4株K亚群),ALV-J分离毒株CAU4932、CAU4860和CAU2259的gp 85基因片段长度为918 bp,编码306个氨基酸,分离毒株之间gp 85基因核苷酸同源性为90.5%~95.2%,gp85蛋白氨基酸同源性为95.1%~99.3%;ALV-K分离毒株CAU7049、CAU5006、CAU7176和CAU7168的gp 85基因片段长度为1008 bp,编码336个氨基酸,分离毒株之间gp 85基因核苷酸同源性为89.4%~92.3%,gp85蛋白氨基酸同源性为94.0%~99.7%。gp85蛋白氨基酸序列同源性比对发现,分离株gp85蛋白氨基酸序列均会发生突变,但高变区hr1和hr2所占比例较多,证实了gp85的高变性。在gp85蛋白B细胞抗原表位中存在部分位点的氨基酸突变,可能导致gp85蛋白抗原性发生变化。间接免疫荧光鉴定结果显示,5株分离毒株均可在DF-1细胞内复制并存在可被抗体识别的p27抗原表位。结果表明,本试验分离的7株ALV毒株是国内ALV-J和ALV-K流行毒株的突变株,不仅丰富了ALV基因组库资源,且为后续研究ALV的遗传变异特征和流行趋势等提供参考依据。

禽白血病病毒A亚群和J亚群混合感染引起雏鸡腺胃炎的病理学诊断

为了明确湖北省某鸡场疑似腺胃炎病鸡发病原因,本试验对病鸡进行解剖,观察各组织病变情况;对腺胃、肝脏、法氏囊、胸腺等组织进行组织病理学检查;对腺胃石蜡切片进行禽白血病病毒(ALV)-p27抗原的免疫组织化学染色;对腺胃匀浆进行病原检测和ALV-p27抗原检测;将过滤除菌后的腺胃匀浆接种于鸡胚成纤维细胞(DF-1)分离病毒,并进行ALV亚群鉴定。结果显示,剖检可见病鸡的腺胃肿大,腺胃壁增厚,质软,腺胃乳头扁平消失;腺胃黏膜下层不同程度的淋巴细胞浸润,腺小管上皮增生,腺上皮细胞脱落坏死;其他器官不同程度的变性、坏死和炎性细胞浸润。腺管上皮胞质内出现p27抗原阳性信号。腺胃匀浆中扩增出ALV的特异性条带,同时酶联免疫吸附试验(ELISA)检测为p27抗原阳性。DF-1细胞培养物的ALV亚群鉴定为A亚群(ALV-A)和J亚群(ALV-J)共感染。结果表明,该鸡场鸡只是由ALV-A和ALV-J共同引起的腺胃炎。

禽白血病病毒J亚群感染鸡组织中细胞受体chNHE 1的表达分析

旨在研究鸡钠氢交换蛋白1(chicken sodium hydrogen exchanger isoform 1,chNHE1)在不同类型鸡组织内的表达情况,J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus, ALV-J)的组织嗜性及ALV-J感染后组织chNHE1的mRNA变化情况。本研究利用qPCR技术,检测了商品肉鸡、商品蛋鸡和SPF鸡脏器内的chNHE1转录量,ALV-J感染鸡后各组织的病毒载量及组织chNHE1的转录量的变化。结果显示,chNHE1在3种类型鸡的心、肝、脾、肺、肾、盲肠扁桃体、胸腺和法氏囊中均能检测到,但转录量高低存在较大差异,其中,免疫器官内的chNHE1转录量相对较高;SPF鸡接种ALV-J后,心、脾、肾和盲肠扁桃体中的病毒载量相对较高,而肝、肺、胸腺和法氏囊中的病毒载量相对较低;ALV-J感染后,脾、肾和盲肠扁桃体中的chNHE1转录量明显上调,但心中的转录量与空白对照相比无明显变化。本研究分析了3种类型鸡chNHE1的组织转录特点及ALV-J感染对组织内chNHE1转录的影响,该研究结果为探究受体chNHE1的转录与ALV-J的组织嗜性的关系提供重要的理论依据。

七彩山鸡内源性禽白血病病毒的鉴定及其env基因序列分析

为了解七彩山鸡感染内源性禽白血病病毒(ALV)情况,从上海某七彩山鸡场采集200份血浆样品,经DF1细胞分离和ALV p27抗原ELISA方法检测出13份阳性样品。将含有阳性样品的第一代细胞裂解液及细胞上清液同时盲传接种至第2代细胞,培养9 d后,p27抗原均未被检测到。对ALV p27抗原阳性细胞培养物进行env基因的扩增,最终得到了1株内源性ALV前病毒序列,其基因序列与已知的禽白血病病毒同源性为39.1%~66.7%。以上结果表明,该七彩山鸡品系中存在内源性禽白血病病毒感染。

J亚群禽白血病病毒血液核酸筛查技术的建立

为缩短J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus, ALV-J)检测周期,进一步加快禽白血病净化进程,本研究结合SYBR GreenⅠqPCR和混样检测,建立了一种适用于低ALV-J流行率场景下的快速筛检ALV-J的血液核酸筛查技术(ALV-J blood quantitative polymerase chain reaction, ALV-J-B-qPCR)。根据GenBank中ALV-J pol及env基因序列,设计ALV-J的特异性引物,并优化反应条件,建立了ALV-J SYBR GreenⅠqPCR检测方法。以ALV-J病毒分离为阳性的鸡抗凝血为实验材料,分别制备抗凝血DNA、血细胞DNA、外周血淋巴细胞DNA、外周血淋巴细胞cDNA和血浆cDNA 5类血液检测模板进行ALV-J的PCR检测,筛选最佳检测模板;进一步比较蒸馏水破裂红细胞法提取混合血液DNA的混样方法,血液混样总体积为200μL的混样方法,血液混样总体积为10μL的混样方法共3种混样方法的检测准确性,筛选最佳混样方法。综合上述qPCR方法、检测模板与混样方法,成功建立了ALV-J-B-qPCR。运用ALV-J-B-qPCR分别进行预期流行率为1%~2%、4%~5%场景下的模拟筛查试验,并与病毒分离法比较。qPCR方法的特异性、灵敏性和重复性试验显示,该方法仅特异性扩增ALV-J,对标准质粒的最低检测限度为1×10^(2)copies·μL^(-1),批内与批间变异系数均<1%。对90份临床送检血液样品的检测结果显示,该qPCR方法对ALV-J的检出率(15.6%)高于p27抗原ELISA和普通PCR的检出率(12.2%)。检测模板筛选试验中,抗凝血DNA最符合检测准确度高、操作复杂度和成本低的要求,为最佳检测模板。混样方法摸索试验中,混样总体积为10μL(混样规模<12份)的混样方法检测准确性最高,为最佳混样方法。在样本数为400份,预期流行率为4%~5%场景的模拟筛查中,ALV-J-B-qPCR检出率为6.25%,比病毒分离法高2.00%;在样本数为400份,预期流行率为1%~2%场景的模拟筛查中,ALV-J-B-qPCR检出率为2.25%,比病毒分离法高0.75%。本研究建立的ALV-J-B-qPCR技术具有灵敏性高、检测快速和节约成本的优势,为种禽场加快ALV净化进程提供了新的思路和方法。

湖北省鸡群内源性禽白血病病毒分子特征研究

为了解内源性禽白血病病毒在我国鸡群中的存在状况,利用特异性引物对湖北省鸡群—江汉鸡和灵山麻鸡的鸡胚中内源性禽白血病病毒进行了PCR检测。结果显示,所有的鸡胚中均检测出内源性禽白血病病毒EAV、ev、ev/J和ART-CH基因序列。进化树分析发现,相对于内源性病毒原型株E51,江汉鸡的EAV基因组更加接近于原型株EAV-0;江汉鸡和灵山麻鸡的ART-CH核苷酸序列之间相似度很高,但与已知的ART-CH5和ART-CH14核苷酸序列存在较大差异;尽管江汉鸡和灵山麻鸡的ev和ev/J核苷酸与其他已知的ev和ev/J的相关序列差异较小,但其在系统进化树上仍属于不同的分支。该结果说明江汉鸡和灵山麻鸡的内源性病毒基因的进化路径与其他已知的内源性病毒基因的进化路径不同。

麻黄肉种鸡蛋清中内源性禽白血病病毒的分离与遗传鉴定

为了解麻黄肉种鸡蛋清中内源性禽白血病病毒(内源性ALV)的分布情况,从广东某麻黄肉种鸡场采集1 038份蛋清,经ALV p27抗原ELISA检测出30份阳性蛋清;将阳性蛋清同时接种DF1和CEF细胞,培养7 d后,p27抗原ELI-SA检测到13份样品为DF1-CEF+;以这13份CEF+细胞培养物的基因组DNA为模板,经PCR扩增克隆测序最终得到了1株内源性ALV前病毒序列。将经ELISA、PCR和IFA等方法鉴定的该内源性ALV命名为HN1301株。基于遗传分析表明,HN1301株的前病毒基因序列与已知的E亚群毒株ev1、SD0501的相似性均为99.4%。表明该麻黄肉种鸡品系中存在有复制能力的内源性ALV,因而易干扰基于p27抗原的ELISA检测;本研究对于麻黄肉种鸡禽白血病的防控与净化有参考价值。

鸡内源性白血病毒ev21与其侧翼区SNP位点的连锁关系

鸡内源逆转录病毒ev21的转录表达影响宿主机体健康。本试验通过PCR检测海兰褐、太行鸡、海兰灰和SPF鸡292份DNA样品的ev21阴阳性、羽型和性别,测序筛选ev21插入位点OS和US区的SNP位点,Mbo II酶切检测C>T突变的群体多样性,分析C>T突变与ev21整合的连锁关系;最后利用TRANSFAC®Professional预测C>T突变引起的转录因子变化。测序峰图发现,ev21插入位点上游278 bp处的C>T突变。OS和US共有610 bp酶切结果发现,快羽ev21阴性鸡为CC基因型,快羽ev21阳性鸡为CT基因型;慢羽除海兰灰和海兰褐祖代ev21阳性鸡为TT基因型外,其他均为CT基因型。OS特异1036 bp酶切显示ev21整合的OS区全部为T单倍型,C>T突变造成转录因子结合变化。研究表明ev21整合的OS区和未整合的US区的C>T突变有5种单倍型,ev21整合与T等位基因连锁。

慢羽鸡成纤维细胞内源性白血病病毒ev21基因敲除

【目的】探索在慢羽鸡成纤维细胞中敲除ev21基因的可行性,净化鸡群内源性逆转录病毒,同时为快速培育缺失ev21基因的慢羽鸡配套系打下基础。【方法】根据ev21基因序列(KY235336)特点,分别在其5’和3’端各设计2个sgRNA,用于构建4种不同sgRNA的打靶质粒,筛选出在5’和3’端打靶效率较高的sgRNA。然后基于CRISPR/Cas9基因编辑技术对ev21基因进行剪切,并通过同源重组方式以红色荧光蛋白(mCherry)的DNA片段(CAG-mCherry)替换ev21基因,实现对慢羽鸡成纤维细胞内源性白血病病毒ev21基因定点敲除。【结果】在慢羽鸡成纤维细胞中能检测到ev21基因,构建的4种sgRNA(sgRNA1~sgRNA4)均能成功插入对应的打靶质粒中,经嘌呤霉素筛选及T7E1酶切检测,发现转染4种不同sgRNA打靶质粒后慢羽鸡成纤维细胞均有不同程度的死亡,其中又以sgRNA1和sgRNA3的基因敲除效率较高。同时针对同源位点左右同源臂构建表达mCherry的供体质粒,以其转染293T细胞12 h后均能表达出mCherry。以sgRNA1和sgRNA3打靶质粒及供体质粒共同转染慢羽鸡成纤维细胞,观察发现成纤维细胞内的mCherry持续表达,至转染后第30 d通过流式细胞仪分选收集红色荧光阳性成纤维细胞,并提取其总DNA进行PCR鉴定与基因测序,结果显示红色荧光阳性成纤维细胞中有目的片段(CAG-mCherry)插入,即以插入替换方式能实现对ev21基因的敲除。【结论】基于crispr/cas9基因编辑技术的基因敲除方法能成功敲除慢羽鸡成纤维细胞内源性白血病病毒ev21基因,为培育缺失ev21基因的慢羽鸡品系提供技术支持。

禽内源白血病病毒ev3、ev6和ev21对雏鸡免疫器官指数和血清指标的影响

试验旨在探究禽内源性白血病病毒ev3、ev6和ev21对雏鸡免疫性能的影响。试验利用PCR技术检测太行鸡、大午金凤雏鸡的羽型和ev3、ev6、ev21整合性,测定雏鸡的体重、免疫器官指数,利用ELISA技术检测雏鸡血清免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白A(IgA)、白细胞介素4(IL-4)和白细胞介素10(IL-10)含量。结果显示,ev3在太行鸡的整合阳性率显著高于大午金凤鸡(P<0.05)。ev3整合阳性太行鸡的法氏囊指数显著高于阴性个体(P<0.05),体重显著低于阴性个体(P<0.05)。ev21阴性太行鸡体重显著高于阳性鸡(P<0.05)。太行鸡母鸡体重和免疫器官总重显著高于公鸡(P<0.05)。ev3阳性太行鸡血清IgG和IL-4含量显著高于ev3阴性鸡(P<0.05)。ev6阳性太行鸡血清IL-10含量显著低于ev6阴性鸡(P<0.05)。ev3阳性大午金凤鸡血清IgM含量显著低于ev3阴性鸡(P<0.05)。ev21阳性慢羽大午金凤公鸡血清IL-4含量显著高于ev21阴性快羽母鸡(P<0.05)。太行慢羽鸡和母鸡的血清IgG含量显著高于快羽鸡和公鸡(P<0.05)。ev21阴性太行快羽鸡血清IgG含量显著低于ev21阴性太行慢羽鸡和ev21阳性太行慢羽鸡(P<0.05)。研究表明,ev3整合提高了1日龄太行鸡的免疫性能,降低了其体重和大午金凤鸡血清IgM含量;ev6整合降低了太行鸡血清IL-10含量;ev21整合降低了1日龄太行鸡的体重,提高了大午金凤鸡血清IL-4含量。

J亚群禽白血病病毒SCAU-0901株的分离鉴定

在组织病理学观察的基础上,经接种DF-1细胞系、ELISA抗原检测、聚合酶链式反应(PCR)以及亚群特异性免疫荧光试验(IFA),从送检的疑似禽白血病感染的麻黄肉种鸡中分离并鉴定出1株J亚群禽白血病病毒(ALV-J),命名为SCAU-0901。利用特异性引物分别扩增出长度为545 bp和2.2×103bp的目的片段,并对目的片段进行了克隆测序。序列分析发现,SCAU-0901株的gp85基因与国内外各ALV-J毒株相应核苷酸序列的相似性为86.1%～95.1%,其中与BJ0303株的相似性最高(95.1%),与ADOL-7501株的相似性最低(86.1%)。系统遗传进化分析表明,SCAU-0901株的gp85基因片段与BJ0303株的亲缘关系最近。

鸡感染J亚群禽白血病病毒的免疫抑制机理

通过人工接种建立了雏鸡感染J亚群禽白血病病毒(ALV-J)后发生免疫抑制的病理模型,对免疫抑制的机理进行了初步研究。结果表明:ALV-J感染早期可诱导胸腺、法氏囊的淋巴细胞凋亡,这种早期的淋巴细胞凋亡是胸腺和法氏囊萎缩的重要原因之一。病理组织学动态观察表明,ALV-J主要引起骨髓的髓系细胞灶状或弥漫性增生,病变导致骨髓机能受损,使机体免疫机能下降,是引起免疫抑制的根本原因。病毒感染组免疫器官均发生了严重的实质萎缩性病变,这种病变的发生除与骨髓的病变及淋巴细胞凋亡有关外,还与中后期淋巴细胞的坏死有关,从而导致严重的免疫抑制。ALV-J感染可引起免疫器官及部分内脏器官中嗜酸性粒细胞样的瘤细胞浸润增生,这可以作为病毒感染早期的病理诊断指标。

817肉杂鸡肉瘤组织分离出A、J亚型禽白血病病毒

山东某地饲养的36日龄817肉杂鸡生长迟缓并发生颈部肉瘤。取肉瘤组织上清液接种CEF,培养12d,用IFA试验进行病毒鉴定。检测结果表明,从该肉瘤组织分离到A亚型与J亚型禽白血病病毒(ALV-A、ALV-J),命名为SD1005株。取肉瘤组织上清液人工感染817肉杂鸡与SPF鸡进行动物回归试验,结果复制出同样肉瘤。用复制出的新鲜肉瘤分别制备肉瘤细胞与肉瘤组织触片,IFA试验再次验证出ALV-A与ALV-J均为阳性,而且发现ALV-A与ALV-J分别共感染同一个组织细胞。同时,通过PCR方法用针对ALV-A、ALV-J的2对引物扩增并鉴定出肉瘤组织中含有ALV-A、ALV-J。对扩增的ALV-J囊膜糖蛋白(env)基因1 710bp片段进行的遗传变异分析结果显示,SD1005株与14株国内外参考株之间的同源性为88.5%～94.0%,其中与来自白羽肉鸡的美国参考株0661(AF247566)、ADOL-Hc1(AF097731)的同源性最高,分别为94.0%、93.8%。本研究显示,来自817肉杂鸡的肉瘤组织上清液接种鸡可诱发急性肉瘤,其中既检出ALV-A,又检出ALV-J,但急性肉瘤由单个病毒诱发还是与共感染相关有待于进一步研究。