喜树中一株特异产喜树碱内生真菌Aspergillus niger GP3的分离与鉴定

目的:从喜树内生真菌中筛选出具有产喜树碱潜力的菌株,为获得喜树碱提供一条新的药源途径。方法:从喜树根皮分离内生真菌,综合利用高效液相色谱法(HPLC)以及超高效液相色谱-高分辨质谱(UPLC-Orbitrap-MS/MS)法对内生真菌次生代谢产物有效活性成分进行分析,并通过形态学和分子学对其特异性真菌进行鉴定。结果:内生真菌GP3具有产喜树碱的化学性质,其菌落圆形、黑褐色、中心凸起、边缘呈纤毛状,经ITS序列比对,该菌与Aspergillus niger ITS序列相似性为99%。结论:GP3是一株具有产喜树碱潜力的内生真菌菌株,鉴定为黑曲霉菌(Aspergillus niger)。

滇重楼内生真菌Aspergillus fumigatus代谢产物的研究

为研究滇重楼内生真菌Aspergillus fumigatus的代谢产物,采用多种色谱分离技术对其菌丝体和发酵液进行分离纯化,得到31个化合物。根据理化性质及波谱数据,结构分别鉴定为tryprostatin B(1)、tryprostatin A(2)、12,13-dihydroxyfumitremorgin C(3)、cyclotryprostatin B(4)、14-norpseurotin A(5)、pseurotine F1(6)、pseurotine F2(7)、azaspirofuran A(8)、pseurotin D(9)、spirotryprostatin K(10)、6-methoxyspirotryprostatin B(11)、deacetylpyripyropene A(12)、烟曲霉素(13)、fuma-gillene A(14)、5,9-dihydroxy-β-trans-bergamotene(15)、对羟基苯乙酸(16)、demethoxyfumitremorgin C(17)、fumiquinazoline J(18)、烟曲霉酸(19)、麦角甾醇(20)、过氧麦角甾醇(21)、4,4-dimethyl-5α-ergosta-8,24(28)-dien-3β-ol(22)、羊毛甾醇(23)、亚油酸(24)、油酸(25)、烟曲霉毒素C(26)、烟曲霉毒素B(27)、震颤真菌毒素(28)、pseurotin A(29)、fumiquinazoline C(30)和questin(31)。其中,化合物1~16仅从发酵液中分离得到;化合物17~25仅从菌丝体中分离得到;其余化合物在发酵液和菌丝体中均分离得到。化合物15和23为首次从烟曲霉属真菌中分离得到。此外,化合物26~29的乙酰胆碱酯酶抑制活性和烟草黑胫病菌抑制活性评价表明,化合物26和27对烟草黑胫病菌具有微弱的抑制作用,抑菌率分别为19.64%和17.86%。

红树老鼠簕内生真菌Aspergillus terreus GXIMD 03158次级代谢产物研究

文章对红树老鼠簕(Acanthus ilicifolius L.)内生真菌Aspergillus terreus GXIMD 03158的抑菌活性次级代谢产物进行研究。采用多种色谱技术对该菌次级代谢产物进行分离纯化,结合核磁氢谱、碳谱和高分辨率质谱数据综合解析鉴定单体化合物结构。从A.terreus GXIMD 03158代谢产物中共分离出10个化合物,经鉴定分别为dankasterones A(1),(14α,22E)-14-hydroxyergosta-4,7,22-triene-3,6-dione(2),steresterone B(3),ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-one(4),herbarulide(5),demethylincisterol A3(6),isochaetochromin B1(7),isochaetochromin B2(8),(E)-7,9-二烯-11-羰基硬脂酸(9)和aspergilfuranone A(10)。并采用微量肉汤稀释法检测所有化合物对白色葡萄球菌(Staphylococcus albus)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)和副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentrations,MIC),结果显示化合物6对S.albus、S.aureus和S.epidermidis的MIC分别为3.12、6.25和3.12μg·mL^(−1);化合物9对S.albus和S.aureus的MIC分别为1.56和3.12μg·mL^(−1)。

头花蓼内生真菌Aspergillus terreus油脂类代谢物的鉴定及其抗多药耐药菌和抗炎作用研究

目的:鉴定头花蓼内生真菌Aspergillus terreus油脂类代谢物并考察其抗多药耐药菌和抗炎作用。方法:采用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)分析、鉴定A.terreus的油脂类代谢物;采用96孔板微量稀释法测试油脂类代谢物和主要成分对10株多药耐药菌(肺炎克雷伯杆菌、普通变形杆菌、表皮葡萄球菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌、奇异变形杆菌、屎肠球菌和鲍曼不动杆菌)的最低抑菌浓度(MIC),用涂布平板法测定各样品对细菌的最低杀菌浓度(MBC)。以脂多糖诱导体外RAW264.7细胞炎症模型,考察不同质量浓度(50、100、200μg/m L)油脂类代谢物作用24 h后对细胞中一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)释放的影响。结果:从A.terreus的油脂类代谢物中共鉴定了13个化合物,其中棕榈酸、硬脂酸、亚油酸和油酸为主要成分,其相对百分含量依次为29.35%、10.87%、21.94%、34.85%。油脂类代谢物对大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌表现出较好的抗菌活性,MIC分别为12.5、50 mg/m L,MBC分别为25、100 mg/m L;4个主要成分均具有抑制大肠埃希菌生长的作用,MIC范围为0.5~1 mg/m L,其中棕榈酸显示出较为广泛的抗菌活性,且对屎肠球菌活性最强(MIC为0.25 mg/m L)。50、100μg/m L的油脂类代谢物可显著抑制RAW264.7细胞中炎症因子NO和TNF-α的释放。结论:头花蓼内生真菌A.terreus的油脂类代谢物具有抗多药耐药菌和抗炎作用。

紫苏内生真菌Aspergillus sp.12Y03化学成分研究

采用硅胶柱层析和Sephadex LH-20凝胶柱层析等分离方法,从紫苏内生真菌Aspergillus sp.12Y03发酵产物中分离鉴定了10个化合物,经现代光谱学技术鉴定为:环-(脯氨酸-甘氨酸)(1)、环-(脯氨酸-丝氨酸)(2)、环-(丝氨酸-4-OH-脯氨酸)(3)、环-(丙氨酸-4-OH-脯氨酸)(4)、环-(苯丙氨酸-甘氨酸)(5)、环-(丙氨酸-甘氨酸)(6)、亚油酸(7)、α-亚麻酸(8)、cerevisterol(9)和22E,24R-5α,6α-环氧麦角甾-8(14),22-二烯-3β,7α-二醇(10),均为首次从该菌种中分离得到,化合物3和4具有中等强度的海虾致死活性。

老鼠簕植物内生真菌Aspergillus terreus (W-8)抗肿瘤活性成分的研究

对红树林植物的枝干、枝叶样品进行微生物分离,以P388细胞为模型进行活性评价得到14株具有抗肿瘤活性的真菌。采用溶剂萃取、柱色谱及半制备HPLC等分离手段对来源于红树林植物老鼠簕Acanthus ilicifolius Linn.的菌株Aspergillus terreus(W-8)发酵产物进行了活性追踪分离,共得到5个化合物。通过理化性质及波谱技术,结合文献,鉴定其结构分别为aspulvinone H1(1)、aspulvinone H(2)b、utyrolactone I(3)t、errein(4)和3-propylbenzene-1,2-diol(5),其中化合物1的核磁数据为首次报道。采用MTT法初步评价了单体化合物的抗肿瘤活性,结果表明化合物4、5对A549、K562和Hela细胞均具有中等强度的细胞毒活性。

白木香内生真菌Aspergillus sp.A14的挥发性成分及其抗菌活性

通过溶剂萃取法提取白木香内生真菌A14(Aspergillus sp.)的挥发油,采用滤纸片琼脂扩散法分别测定了其对3种人体病原菌的体外抑菌活性。结果表明:A14挥发油对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant S.aureus,MRSA)和白色念珠菌(Candida albicans)均表现出一定抑制作用。应用GC-MS技术,分析鉴定了内生真菌A14挥发油的14个化学成分,显示蜂蜜曲菌素是其中的主要成分,占挥发油峰面积的93.41%。

银杏叶内生真菌Aspergillus sp．YXf3活性次生代谢产物的研究

采用多种柱层析技术,从银杏叶内生真菌Aspergillus sp.YXf3发酵液的乙酸乙酯提取物中分离得到5个化合物,根据理化性质和波谱数据鉴定其结构分别为terreinol(1)、cyclo-(L-Leu-L-Trp)(2)、sphaeropsidin A(3)、sphaeropsidin B(4)和4-hydroxy-3-(3'-methyl-2'-butenyl)benzoic acid(5)。以上化合物均为首次从银杏内生真菌中分离得到。神经氨酸酶抑制剂活性测试结果表明,化合物2和4具有较强的抑制活性,其IC50分别为4.67和3.40μM。

水母雪莲内生真菌Aspergillus sp.TPXq的次级代谢产物研究

目的研究藏药水母雪莲内生真菌Aspergillus sp.TPXq的次级代谢产物。方法菌种采用震荡培养箱扩大培养,经反复硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、开放ODS柱色谱、高效液相色谱等方法进行分离纯化;并根据化合物的理化性质及波谱数据鉴定结构。结果从来自藏药水母雪莲的一株内生真菌Aspergillus sp.TPXq的培养液中分离得到8个环二肽和1个生物碱类化合物。分别鉴定为3-异丁基-吡咯并哌嗪-2,5-二酮（Ⅰ）、3-异戊基-吡咯并哌嗪-2,5-二酮（Ⅱ）、3-仲丁基-吡咯并哌嗪-2,5-二酮（Ⅲ）、3-苄基-吡咯并哌嗪-2,5-二酮（Ⅳ）、3-苄基-6-对羟基苄基-2,5二酮（Ⅴ）、3,6-二甲基哌嗪-2,5-二酮（Ⅵ）、3-异丁基-6-异丙基哌嗪-2,5-二酮（Ⅶ）、3-异丁基-6-苄基哌嗪-2,5-二酮（Ⅷ）、Chaetominine（Ⅸ）。结论其中化合物Ⅳ~Ⅷ为曲霉属Aspergillus.sp真菌中首次分离得到。细胞毒测试结果表明,以上化合物Ⅰ~Ⅷ对于A549和MCF-7肿瘤细胞均显示弱细胞毒活性（〉50μg/mL）,化合物Ⅸ对A549和MCF-7肿瘤细胞均具有显著的细胞毒活性,IC50值分别为0.18μg/mL和0.89μg/mL。

甘蔗叶内生真菌Aspergillus niger GZ-4总黄酮含量测定方法研究

采用硝酸铝显色法、三氯化铝显色法和紫外分光光度法对甘蔗叶内生真菌Aspergillus niger GZ-4总黄酮含量的测定结果进行比较。结果表明:硝酸铝显色法和三氯化铝显色法不适用于GZ-4菌株总黄酮含量的测定;采用紫外分光光度法,以芦丁为对照品,在0~0.048mg·mL^(-1)范围内吸光度与浓度的线性关系良好(R=0.9999),平均加样回收率为101.4%,RSD为1.8%(n=5)。该方法可以简便、快速、准确地测定GZ-4菌株总黄酮含量。

海藻内生真菌Aspergillus sp.Jcma1F17化合物研究

通过硅胶和半制备液相方法从真菌Aspergillus sp.Jcma1F17发酵液中共分离得到6个化合物,经过质谱及核磁共振波谱鉴定,化合物分别为cis-4-hydroxymellein(1)、trans-4-hydroxymellein(2)、(R)-mellein(3)、penicillic acid(4)、aspyrone(5)和asperlactone(6)。化合物3对乙酰胆碱酯酶有较弱的抑制作用,IC50为57.5μg/m L,其他化合物IC50均大于100μg/m L。

虎皮楠内生真菌Aspergillus sp.DCS31化学成分研究

从长序虎皮楠韧皮部分离到内生真菌Aspergillus sp.DCS31,经ITS序列分析将该株菌鉴定为曲霉属真菌。我们从该菌的固体发酵物中分离得到了5个化合物,经质谱和核磁共振波谱解析,分别鉴定为asperpyroneD(1)、asperpyrone A(2)、flavasperone(3)、1,2-benzenedicarboxylic acid bis(2α-methyl heptyl)ester(4)、2,5-di-hydroxyphenylacetic acid methyl ester(5)。化合物1、2、3、4为首次从虎皮楠内生真菌中分离得到。

红树植物老鼠簕内生真菌Aspergillus flavipes AIL8化学成分的研究

利用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析及半制备高效液相色谱等分离手段对红树林老鼠簕内生真菌Aspergillus flavipes AIL8的提取物进行分离纯化,并利用各种波谱方法,结合文献对照,确定化合物结构。从提取物中分离得到6个化合物,经鉴定为4-羟基-3-甲氧基-5-[(2E,6E)-3,7,11-三甲基十二烷-2,6,10-三烯-1-基]苯甲酸(1)、芳香类内酯化合物(2)、一癸酸甘油酯(3)、菜子甾醇(4)、7,22(E)-麦角二烯-3β,5α,6β-三醇(5)和麦角甾-6,22-二烯-5α,8α-环二氧-3β-醇(6)。6个化合物均为首次从红树林老鼠簕内生真菌A.flavipes AIL8中分离得到,其中化合物1为新天然产物。

红树林内生真菌Aspergillus sp.085035次级代谢产物研究

目的:研究红树林内生真菌Aspergillus sp.085035的次级代谢产物。方法:采用柱色谱和半制备高效液相色谱技术对Aspergillus sp.085035的次级代谢产物进行分离纯化,并利用波谱数据和X-射线单晶衍射等方法鉴定化合物结构;采用MTT法对所得化合物进行细胞毒活性检测。结果:从红树林内生真菌Aspergillus sp.085035的乙酸乙酯粗提物中分离得到9个化合物,分别鉴定为:13R-fumigaclavine C(1)、8'-O-methylasterric acid(2)、1,2-secotrypacidin(3)、rhizoctonic acid(4)、chaetominine(5)、helvolic acid(6)、trypacidin(7)、emodin-8-methylether(8)和fumitremorgin C(9)。结论:化合物1为新天然产物,化合物1、8为首次从曲霉属中分离得到,所有化合物均为首次从该真菌中分离得到,化合物7对MDA-MB-435细胞株具有细胞毒活性。

海洋红树林植物黄槿内生真菌Aspergillus sydowii EN-198化学成分研究

对采自海南东寨港的海洋红树林植物黄瑾(Hibiscus tiliaceus)叶中分离到的一株内生真菌Aspergillus sydowii EN-198的次生代谢产物进行了研究。利用正相与反相硅胶柱层析、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱层析以及制备薄层层析(PTLC)等分离手段从其发酵液中分离得到14个化合物,通过一维、二维核磁共振技术、质谱技术等鉴定了所有化合物的结构,分别为:环-(S-脯氨酸-S-苯丙氨酸)(1),环-(S-脯氨酸-S-亮氨酸)(2),环-(S-苯丙氨酸-S-色氨酸)(3),(1S)-1-(4′-间羟基苯甲酸)-1,1,5,5-二甲基己二醇(4),曲酸(5),N-[2-(4-吲哚)乙基]乙酰胺(6),N-[2-(4-对羟基苯酚)乙基]乙酰胺(7),胸腺嘧啶脱氧核苷(8),尿嘧啶脱氧核苷(9),尿嘧啶核苷(10),过氧化麦角甾醇(11),麦角甾醇(12),(2S,2′R,3R,3′E,4E,8E)-N-(2′-羟基-3′-十六烯酰基)-9-甲基-4,8-二十碳二烯-1,3-二醇(13)以及1-O-β-D-葡萄糖基-(2S,2′R,3R,3′E,4E,8E)-N-(2′-羟基-3′-十六烯酰基)-9-甲基-4,8-二十碳二烯-1,3-二醇(14);其中化合物1和2为首次从Aspergillus sydowii中分离得到。对所有化合物测试其抑菌活性,发现化合物5与7对金黄色葡萄球菌有较好抑制活性。

阳江红树林内生真菌Aspergillus sp.5Y次级代谢产物及其活性的研究

对阳江红树林内生真菌Aspergillus sp.5Y的次级代谢产物进行研究。本文采用硅胶柱层析、LH-20凝胶柱层析、ODS-C_(18)反相硅胶柱层析及HPLC等色谱技术,应用红外、紫外、质谱、核磁等现代波谱技术手段。通过对阳江红树林内生真菌Aspergillus sp.5Y进行次级代谢产物的研究,获得5个单体化合物,分别为6-epiophiobolin P(1)、strobilactone A(2)、penicisochroman E(3)、asperterpenol B(4)和(E,E)-6-(6',7'-dihydroxy-2',4'-octadienoyl)-strobilactone A(5)。在α-葡萄糖苷酶抑制实验中,化合物1,4对α-葡萄糖苷酶有显著的活性,IC_(50)分别为(676.09±10.3)μmol/L和(9.57±0.2)μmol/L,为口服降糖药物的研发提供一定的理论数据。

海南红树林内生真菌Aspergillus sp.HNY16-5C的含氮类次级代谢产物

采用大米培养基对红树内生真菌Aspergillus sp.HNY16-5C进行规模发酵,利用层析技术对发酵产物进行分离纯化,获得6个含氮类化合物。经波谱技术鉴定结构,并通过与文献对比鉴定化合物为brevianamide K(1)、brevianamide V(2)、(R)-brevianamide Q(3)、(R)-brevianamide R(4)、(±)-asperginulin A(5)和brevianamide M(6)。对化合物1~6首次进行抗结核活性测试,结果显示化合物1对结核杆菌的酪氨酸磷酸酶B(MptpB酶)显示有较强的抑制活性,IC_(50)为(7.07±2.76)μmol/L。

南海红树林内生真菌Aspergillus sp.9H次级代谢产物的研究

对南海红树林内生真菌Aspergillus sp.9H的次级代谢产物进行研究。利用土豆培养基对菌种进行培养,综合采用多种柱层析技术从Aspergillus sp.9H的次级代谢产物中分离得到了5个单体化合物,运用质谱、核磁等现代波谱技术鉴定其结构分别为brefeldin A(1),methoxyvermistatin(2),6-demethylvermistatin(3),purpurester A(4)和十一烷酸甘油酯(5)。其中化合物2,3,4均为首次从曲霉属海洋真菌中分离得到。

日本仙菜来源内生真菌Aspergillus versicolor EN-298化学成分研究

从采自烟台养马岛的日本仙菜(Ceramium japonicum)中分离得到的一株内生真菌Aspergillus versicolor EN-298,对其次级代谢产物进行了系统研究,利用反相柱层析、正相柱层析、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20以及制备薄层层析(p TLC)等分离手段获得10个单体化合物。通过一维、二维核磁共振技术(1D、2D NMR)等鉴定了所有化合物的结构。并对分离得到的化合物进行了抑菌活性测试,其中化合物10对迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)表现出一定的抑制作用。

一种内生真菌Aspergillus flavus次生代谢产物研究

为了研究内生真菌Aspergillus flavus的次生代谢产物,利用硅胶、Sephadex LH-20、反相、中压、高效液相制备等多种色谱方法从内生真菌Aspergillus flavus发酵液的乙酸乙酯萃取部位中分离得到7个化合物,并通过1H NMR、13C NMR、ESI-MS等波谱技术鉴定其结构,依次为:对羟基苯乙酸(1),对羟基苯乙醇(2),环(D)-脯氨酸-(L)-苯丙氨酸(3),Nb-乙酰基色胺(4),(E)-4-(4-hydroxyphenyl) but-3-en-2-one(5),N-isobutylacetamide(6),琥珀酸乙酯(7)。所有化合物均为首次从该菌中分离得到。