怀山药内生真菌Trichoderma sp.L12多糖的提取纯化、理化表征及抗氧化活性研究

目的研究怀山药多糖内生真菌多糖的提取纯化、理化特征和抗氧化活性。方法从一株来源于怀山药的木霉属真菌Trichoderma sp.L12的菌丝和菌液中分离多糖,分析其胞内多糖(extracellular polysaccharides,JSP)和胞外多糖(intracellular polysaccharides,JYP)的理化性质及抗氧化活性。结果JSP和JYP的糖含量、蛋白含量分别是(836.91±1.57)和(690.58±1.72)mg/g、(19.15±0.61)和(12.33±3.03)mg/g,且二者均未检测到糖醛酸和多酚。JSP和JYP相对分子质量主要以1.305×10^(6)和5.114×10^(4)为主,二者单糖组成均以半乳糖、葡萄糖和甘露糖为主,质量百分比分别为27.6∶46.1∶24.9和33.4∶31.3∶26.4。环境扫描电子显微镜(Environmental scanning electron microscopy,ESEM)结果表明,两种多糖表面均有较多明显的粗糙凹痕,且JSP碎片尺寸相对较大。另外,JSP和JYP在较低浓度下(3.0 mg/mL)清除DPPH自由基作用较强,清除率达到90%和70%,且对羟自由基和超氧阴离子自由基也具有一定的清除能力。结论JSP和JYP均有较好的抗氧化作用,是潜在的天然抗氧化剂,能够为怀山药内生真菌多糖的开发利用提供一定的技术和理论支持。

内生真菌Trichoderma harzianum次生代谢产物研究

目的:对格木Erythrophleum fordii Oliver的内生真菌菌株Trichoderma harzianum次生代谢产物进行研究。方法:将此内生真菌进行发酵培养,对其发酵液利用色谱方法进行分离纯化,利用波谱方法鉴定得到化合物结构。结果:从其发酵液中分离得到了10个化合物,包括7个环二肽类、2个酚酸和1个嘧啶类化合物,其结构分别为环(R-脯氨酸-甘氨酸)(1)、环-(R-脯氨酸-R-丙氨酸)(2)、环-(S-脯氨酸-R-缬氨酸)(3)、环-(4-甲基-R-脯氨酸-S-正缬氨酸)(4)、环-(R-脯氨酸-R-亮氨酸)(5)、环-(R-脯氨酸-R-苯丙氨酸)(6)、环-(4-羟基-S-脯氨酸-S-亮氨酸)(7)、尿嘧啶(8)、对羟基苯乙醇(9)、间羟基苯乙酸(10)。结论:这些化合物均是首次从该菌株中分离得到。

一株苦槛蓝内生真菌Trichoderma sp.09抗植物病菌产物的研究

从一株苦槛蓝内生真菌Trichoderma sp.09中寻找有抗植物病原菌活性的化合物,利用硅胶柱层析分离到6个化合物,用波谱技术分别鉴定为N-2’-羟基-3'E-十八碳烯酰基-1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-9-甲基-4E,8E-sphingadiene(1),(4E,8E)-1-O-(β-D-吡喃葡萄糖)基-2-(2’-羟基-(E)-3’-十七碳烯酰胺)-3-羟基-9-甲基-4,8-十九碳二烯(2),麦角甾-7,24(28)-二烯-3β-醇(3),胆甾-4-烯-3-醇(4),正癸酸甲酯(5),正十六碳酸甲酯(6)。化合物1、2为首次从Trichoderma sp.中分离得到,生测结果表明,在0.5μmol/mL浓度下化合物1对小麦赤霉、香蕉炭疽和柑橘青霉有中度抗菌活性,化合物2对小麦赤霉、香蕉炭疽有中度抗菌活性,对柑橘青霉具有轻度抗菌活性。

马比木植物内生真菌Trichoderma sp.抗癌活性产物的液体发酵工艺优化

从马比木植物中分离获得一株木霉属内生真菌Trichoderma sp.编号为GX-8,其代谢产物中含有薯蓣皂苷类化合物,体外抗癌实验表明该物质对人肝癌细胞BEL-7402、人非小细胞肺癌细胞A549和人前列腺癌细胞PC3均具有中等的细胞毒活力。本实验以上述化合物的含量为主要指标,通过单因素和正交试验的研究分析,优化确定适宜于菌株GX-8积累目标化合物的液体发酵工艺。研究结果表明:GX-8发酵生产薯蓣皂苷类化合物的最优培养基为可溶性淀粉40 g/L、蛋白胨10 g/L、色氨酸40 mg/L、磷酸氢二钾1 g/L和硫酸镁2 g/L,p H 6.0,接种量2%(v/v),于28℃下摇瓶发酵16 d,该物质的产量可以达到87.38±5.86μg/m L,相比优化前的含量39.66±3.27μg/m L提高了120.32%。

软枣猕猴桃根内生真菌Trichoderma sp.总皂苷抗肝癌初步探究

目的:研究软枣猕猴桃根内生真菌C15(Trichoderma sp.)发酵提取物中的总皂苷成分对2种肝癌细胞HepG 2和Huh-7细胞的凋亡作用与初步作用机制。方法:采用CCK-8细胞计数(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法检测软枣猕猴桃根总皂苷(AARTS)和内生真菌C15总皂苷(C15TS)对HepG 2和Huh-7细胞的细胞活力的影响;采用细胞划痕实验和Transwell小室实验对细胞的迁移和侵袭能力进行检测;采用蛋白质印记法(Western Blot,WB)检测P53信号通路中3种凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Caspase-3)的表达水平;采用Annexin V-FITC/PI染色检测HepG 2和Huh-7细胞的凋亡时期。结果:根据细胞活力测试得出浓度为50~400μg/mL时AARTS和C15TS对HepG 2和Huh-7细胞的活力有抑制作用,且呈现剂量依赖性;细胞划痕实验表明浓度为200、400μg/mL时AARTS和C15TS可以降低HepG 2和Huh-7细胞的迁移能力;在Transwell小室实验中,浓度为200、400μg/mL时AARTS和C15TS均可抑制对HepG 2细胞和Huh-7细胞的侵袭能力;在WB实验中,AARTS和C15TS经200、400μg/mL孵育24 h后,HepG 2和Huh-7细胞胞内Bax和Caspase-3蛋白表达量增加,Bcl-2蛋白表达量减少;在Annexin V-FITC/PI染色实验中,浓度为200、400μg/mL时AARTS组和C15TS组均具有促进HepG 2和Huh-7细胞凋亡的能力,且多为早期凋亡。结论:C15TS与AARTS的作用效果相似,也可抑制HepG 2和Huh-7细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其机制可能与P53信号通路有关。

喜树中一株特异产喜树碱内生真菌Aspergillus niger GP3的分离与鉴定

目的:从喜树内生真菌中筛选出具有产喜树碱潜力的菌株,为获得喜树碱提供一条新的药源途径。方法:从喜树根皮分离内生真菌,综合利用高效液相色谱法(HPLC)以及超高效液相色谱-高分辨质谱(UPLC-Orbitrap-MS/MS)法对内生真菌次生代谢产物有效活性成分进行分析,并通过形态学和分子学对其特异性真菌进行鉴定。结果:内生真菌GP3具有产喜树碱的化学性质,其菌落圆形、黑褐色、中心凸起、边缘呈纤毛状,经ITS序列比对,该菌与Aspergillus niger ITS序列相似性为99%。结论:GP3是一株具有产喜树碱潜力的内生真菌菌株,鉴定为黑曲霉菌(Aspergillus niger)。

蓝莓内生真菌的分离鉴定及多样性分析

揭示蓝莓内生真菌的多样性,可以为蓝莓内生真菌资源的开发与利用,以及进一步探究内生真菌与蓝莓的共生关系奠定理论基础。以2022年9月和2023年6月在长白山地区采集的栽培蓝莓根系为试验材料,采用植物组织分离法对蓝莓内生真菌进行了分离与纯化,并研究了其菌落形态特征;采用分子生物学鉴定法对所得菌种进行了鉴定,并分析了其分布情况。结果表明:从2 a样本中共分离出菌株136株,根据菌株菌落形态特征进行初步合并后得到52个菌株类型;根据序列相似性原则,52株内生真菌归于17个属,分别是卵菌(Oomycota)1个属、接合菌(Zygomycota)2个属、子囊菌(Ascomycotina)14个属,其中镰刀菌属(Fusarium sp.)真菌为优势菌群。从9月样品中分离出内生真菌27株,归于12个属,其中镰刀菌属(Fusarium sp.)真菌为优势菌群;从6月样品中分离出内生真菌25株,归于9个属,其中镰刀菌属(Fusarium sp.)真菌为优势菌群。不同内生真菌在蓝莓生长周期内共生的时间不同,9月蓝莓的内生真菌多样性高于6月蓝莓。

细梗香草及近缘种内生真菌的多样性

研究细梗香草(Lysimachia capillipes Hemsl.)及近缘种内生真菌多样性,为开发新微生物药物资源奠定基础。采用4种不同培养基分离不同地点样品内生真菌菌种,提取菌丝DNA,扩增ITS序列,测序后GenBank中Blast对比得到同源相似度较高的菌种。获得分离内生真菌共258株;马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)和改良马丁氏培养基(改良MRS)分离内生真菌数量较多,分别占总数的32.56%和28.68%,菌种生长速率较快,而水琼脂(WA)培养基分离菌种数最少,占总数的17.05%,菌落生长速率较慢。相似度较高的菌种有27种,占总菌种数的10.47%。PDA和改良MRS是分离培养细梗香草内生菌较好的培养基,分离得到的菌种重复性较高,4种培养基分离的菌种差异较小。

草珊瑚内生真菌SgG4抗植物病原真菌的活性物质研究

对草珊瑚内生真菌卷曲木霉Trichoderma spirale SgG4抗植物病原真菌的活性物质进行研究。采用菌丝生长速率法对SgG4发酵产物进行抑菌活性测定,采用硅胶柱层析法并结合活性追踪对发酵产物的活性萃取物进行活性物质分离纯化,运用核磁共振谱和质谱技术对活性化合物进行结构鉴定。结果表明,抗菌活性物质主要存在于发酵产物的乙酸乙酯萃取物中,该萃取物对13种植物病原真菌均有较好的抑制活性,EC 50值为0.0002~2.4757 g/L,其中对甘蔗凤梨病菌的抑制活性最好。从发酵产物的乙酸乙酯萃取物中分离出1个抑菌活性化合物,鉴定为木霉酸(trichoderma acid)。木霉酸在0.1 g/L时,对13种植物病原真菌均有抑制作用,其中对茶轮斑病菌、烟草黑胫病菌、甘蔗凤梨病菌和白绢病菌的抑菌率为100%,对其余9种植物病原真菌的抑菌率为21.43%~85.71%。可见,木霉酸的抑菌活性较好且抗菌谱广,在微生物源杀菌剂方面具有较好的开发应用前景。

铝胁迫下5种内生真菌的生长与吸收动力学特征

为了解铝(Al)胁迫下不同内生真菌的生长情况及其对Al^(3+)的吸收动力学特征,筛选抗铝性较强的优良菌株。选取分离自南方酸性红壤区耐铝树种千年桐的5种不同内生真菌(分别隶属于拟盘多毛孢属、链格孢属、盾壳霉属、青霉属和嗜热真菌属)为供试材料,设置5个Al^(3+)浓度(0、0.555、0.746、1.111、1.852 mmol·L^(-1)),研究内生真菌的生长情况及其对Al^(3+)的吸收、吸附特征,并分析5种内生真菌的阳离子交换量和吸收动力学情况。结果表明:5种内生真菌菌株的生物量总体随着Al^(3+)浓度的升高呈现先增加后减少的趋势;当Al^(3+)浓度低于1.111 mmol·L^(-1)时,5种内生真菌均具有较强的耐铝性,当Al^(3+)浓度为1.852 mmol·L^(-1)时,5种菌株对Al^(3+)的耐受能力显著下降(P<0.05);各菌株对Al^(3+)的吸收和吸附均随着Al^(3+)浓度的升高而增加。其中,青霉属菌株的平均生长量达158 mg,其生物量显著大于其他4种菌株(P<0.05),其耐受指数、吸收动力学指标及吸附性Al^(3+)含量也相对较高,而其吸收性Al^(3+)含量均小于其他4种菌株。综合上述各项指标,相较于其他4种菌株,青霉属菌株细胞壁的吸附性Al^(3+)含量较多,能够防御Al^(3+)进入细胞内。

野生大豆内生真菌YD09鉴定及促生耐盐特性研究

为从野生大豆中筛选具有促生抗逆的内生菌,利用组织分离法从野生大豆根中分离内生真菌,根据菌株形态和ITS序列系统发育树对菌株进行鉴定,研究菌株自身耐盐特性、胞内和胞外产物对大豆幼苗生长及耐盐性的影响。结果显示:分离得到1株内生真菌,基于菌株形态学和rRNA基因ITS序列系统发育分析,鉴定为交链孢霉菌(Alternaria alternata),命名为YD09。菌株YD09耐NaCl浓度可达30%。菌株YD09作用于大豆幼苗,具有良好的促生效果,且可使幼苗耐NaCl浓度达到200 mmol·L^(-1)。菌株YD09胞内产物对大豆幼苗具有明显的促生效果,胞外产物能提高大豆幼苗对盐胁迫的抗性。综上,菌株YD09具有较好的促生、耐盐能力,能够缓解盐胁迫对大豆幼苗的伤害,可作为农业生产上应用的新菌种资源。

深色有隔内生真菌(DSE)功能和重金属耐性机制研究进展

重金属污染具有滞留时间久、难恢复和难治理等特点,重金属污染土壤修复备受关注。深色有隔内生真菌(Dark septate endophytes,DSE)可与多种植物建立良好的共生关系,其在促进植物生长、与植物联合共生增强植物对重金属的耐性机制及修复重金属污染土壤方面发挥着重要作用。为系统阐述DSE功能及其对重金属耐性机制,本文综述了DSE的结构特征及定植规律,其促进宿主植物生长的作用机制,重点分析了重金属胁迫下DSE的应答机制(吸附螯合、调控基因表达、抗氧化应激和“区室化”作用等),总结了DSE-植物共生体系在修复重金属污染土壤中的应用现状和前景,以期为DSE在重金属污染环境中的应用提供理论参考。

苦木内生真菌的分离鉴定及生物活性研究

以苦木的根、茎、叶为试材,采用组织分离法从苦木的根、茎、叶中分离得到内生真菌,通过ITS序列分析,对其进行鉴定。采用K-B纸片法和最小抑制浓度法,研究了内生真菌发酵液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制效果,以期为苦木内生真菌在抗菌方面的研究价值提供参考依据,为寻找新型绿色高效的抗菌活性物质提供新思路。结果表明:苦木植物中蕴含丰富的内生真菌资源,从苦木根、枝、叶中分离得到16株内生真菌,分属于4门6纲8目8科8属,链格孢属(Ilternarsa)和葡萄座腔菌属(Botryosphaeria)为优势菌属。13株苦木内生真菌的发酵液提取物对2株指示菌表现出不同强度的抑菌作用,其中3株内生真菌的发酵液粗提物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有较强抗菌活性,MIC值介于0.024~3.120μg·mL^(-1)。综合抑菌的广谱性和效能而言,G1菌株的抗菌效果最好。

基于Web of Science数据库的植物内生真菌研究的可视化分析

植物内生真菌作为一种高度生物多样性和多用途的微生物群落而备受关注。深入了解植物内生真菌研究现状,可为该领域未来研究方向的确立及发展趋势预测提供理论依据。本文通过文献计量学方法,对1926年至2022年11月期间Web of Science核心合集数据库收录的植物内生真菌相关论文,以“植物内生真菌(Endophytic Fungi)”为检索词进行主题检索,统计相关文献的作者、国家、机构、年发表量、学科、期刊和关键词的分布情况,并利用文献可视化软件VOSviewer对所得数据进行分析。检索结果显示,1926年至2022年11月Web of Science一共收录“Endophytic Fungi”相关论文9945篇,从作者来看,以佘志刚、Proksch Peter、王斌贵以及Lee In-Jung等人为核心的研究团队发文量最高。中国、美国、印度、德国和巴西是发文量最多的国家,其中中国在该领域的发文量占总发文量的33.9%。国内主要发文机构集中在中国科学院、中国科学院大学、中山大学,国外的主要发文机构是圣保罗大学、美国农业部、法国国家科学研究中心。植物内生真菌生物多样性、植物内生真菌与宿主互作机制及利用以及植物内生真菌次生代谢产物生物活性物质挖掘为本领域研究热点,植物内生真菌代谢组学和天然衍生产品合成也是诸多学者关注的重点。本文为植物内生真菌相关领域的学者寻找潜在合作者与合作机构,并为其追踪当下研究热点和分析未来研究发展趋势提供重要参考依据。

宿主身份与叶性状对海南热带山地雨林樟科和壳斗科植物叶内生真菌群落的影响

为了揭示植物身份与叶性状在叶内生真菌群落构建中的作用,笔者使用Illumina Miseq测序平台检测海南尖峰岭热带山地雨林中优势植物叶内生真菌群落的物种组成,并探讨宿主身份和叶性状对叶内生真菌群落物种组成的影响。本研究共检测到来自8种樟科和7种壳斗科植物的叶内共生真菌的1539567条真菌的ITS2序列,并将它们划分为5471个真菌分类单元(Operational Taxonomic Units,OTUs),隶属于8个门、30个纲、108个目、281个科、892个属。其中,子囊菌是叶内生真菌的最大类群,占所测真菌序列数的94.5%。单株樟科植物叶内生真菌物种数805±32OTUs显著高于壳斗科植物554±41 OTUs。相比之下,Shannon-Wiener、Simpson多样性指数在两科植物的叶内生真菌间均无显著差异。偏冗余分析(partial redundancy analysis)结果表明,宿主科、属、种身份对叶内生真菌群落组成有显著的影响。去除植物性状的效应后,宿主科、属、种身份能够独立解释叶内生真菌群落物种组成的变异量分别达到2.9%、15.7%、33.7%。去除宿主植物身份的影响后,叶性状在总体上能够解释叶内生真菌群落物种组成的变异量达到21.3%(P=0.003),其中,叶钙含量、比叶面积、叶氮含量和叶钾含量对叶内生真菌群落物种组成有显著影响。上述结果表明,宿主身份和叶性状是热带山地雨林叶内生真菌群落构建的重要驱动因子。

内生真菌对宿主布顿大麦耐碱性的渗透调节和膜系统影响

为了研究带内生真菌(E+)和不带内生真菌(E-)布顿大麦(Hordeum bogdanii)的耐碱性,选择来源于新疆阿克苏温宿县的带内生真菌(E+)和不带内生真菌(E-)布顿大麦种子,先在培养皿中进行发芽,然后进行室内蛭石无土栽培,对其进行21 d的不同浓度混合碱胁迫处理,测定其渗透调节和膜系统变化。结果表明,在相同混合碱处理下,E-植株的相对电导率均显著高于E+植株(P<0.05),E+植株的细胞通透性弱于E-植株。在碱胁迫下E+植株的脯氨酸、可溶性糖和可溶性蛋白含量均显著高于E-植株(P<0.05)。内生真菌具有提高宿主渗透调节物质和降低膜损伤来提高布顿大麦抗碱的能力。

铝胁迫下千年桐内生真菌对根际土壤不同铝形态的影响

【目的】了解不同浓度铝胁迫下内生真菌对根际土壤不同铝形态的影响。【方法】将5种分离自千年桐的优势内生真菌菌株配置为菌液,分别施入不同浓度铝胁迫的千年桐盆栽苗,外源铝浓度设置为0 mmol/L (A0)、0.555 mmol/L (A1)、0.745 6 mmol/L (A2)、1.111 mmol/L (A3)和1.852 mmol/L (A4)。通过测定不同菌液处理的土壤活性铝含量以及千年桐根系活力,探讨内生真菌对根际土壤活性铝含量及比例变化的影响。【结果】在非铝胁迫(A0)的条件下,不同内生真菌对千年桐根际土壤活性铝含量均有不同程度的升高。施加链格孢属菌液处理后,根际土壤交换性铝含量在A2铝浓度时较未施菌处理降低了20.58%,单聚体羟基铝含量在各铝浓度下均低于未施菌处理,降幅分别为7.19%(A1)、19.56%(A2)、6.27%(A3)和4.01%(A4)。盾壳霉属和嗜热真菌属菌液处理后,千年桐根际土壤活性铝含量均高于未施菌处理。不同菌液处理对千年桐根系活力的作用各异,其中盾壳霉属处理后的根系活力较未施菌提升了11.27%,而拟盘多毛孢属处理后根系活力与未施菌处理无显著差异。【结论】接种内生真菌能改变植株根际土壤活性铝含量和比例。链格孢属能有效降低根际土壤单聚体羟基铝含量,而盾壳霉属和嗜热真菌属提升了根际土壤活性铝含量。内生真菌的作用效果受到铝浓度、内生真菌基因型和宿主种类的影响。研究结果拓展了内生真菌对于宿主根际土壤影响的探索,可为林木-微生物互作的深入研究提供参考。

紫花苜蓿根际土壤真菌和不同部位内生真菌的菌群组成及多样性分析

采用ITS扩增子测序技术分析紫花苜蓿根、茎、叶内生真菌及根际土壤真菌的群落组成、内生真菌核心属、Alpha和Beta多样性及真菌群落相关性,结果表明紫花苜蓿根、茎、叶内生真菌和根际土壤真菌分属于13门、176科、348属、498种,不同部位真菌群落组成和多样性有一定差异。其中,根际土壤真菌类群最丰富,Alpha多样性分析表明,其ACE指数、Chao指数和Shannon指数显著高于植株各组织,Simpson指数则显著低于各组织部位,优势真菌属为赤霉菌属(Gibberella)、亚隔孢壳科未分类属(unclassified_f_Didymellaceae)、被孢霉属(Mortierella)、白僵菌属(Beauveria)和Lectera;Beta多样性分析表明,紫花苜蓿根际土壤真菌与不同部位内生真菌群落组成差异显著。属水平上,根系的优势内生真菌属为亚隔孢壳科未分类属、枝孢属(Cladosporium)、线黑粉酵母属(Filobasidium)、Titaea及双足囊菌科未分类属(unclassified_f_Dipodascaceae);茎的优势内生真菌属为线黑粉酵母属、亚隔孢壳科未分类属、壳二孢属(Ascochyta)、维希尼克氏酵母(Vishniacozyma)和枝孢属;叶的优势内生真菌为亚隔孢壳科未分类属、壳二孢属、线黑粉酵母属、Apiotrichum和枝孢属。紫花苜蓿根、茎、叶内生真菌核心菌属以亚隔孢壳科未分类属、线黑粉酵母属、枝孢属、壳二孢属、Apiotrichum及维希尼克氏酵母为主。部分真菌可由根际土壤进入根系定殖然后向上迁移,不同部位内生真菌及根际土壤真菌菌属间具有显著的相互作用,以正相关关系为主导,占66.56%。

长期施氮对甘蔗根际土壤真菌和根系内生真菌群落结构的影响

探究长期施氮对甘蔗根际土壤真菌和根系内生真菌的影响,为甘蔗生产的可持续发展和科学合理利用氮肥提供理论依据。基于高通量测序技术,分析长期4个施氮处理(CK、L、M、H对应的施氮量分别为0、96、482、964 kg/hm^(2))对甘蔗根际土壤和根系内生真菌群落结构组成的影响。结果显示:与不施氮(CK)处理相比,不同施氮处理均能显著提高甘蔗根际土壤真菌丰富度(P<0.05),其中L、M、H处理分别提高39.58%、24.04%和35.33%,但对甘蔗根际土壤真菌多样性无显著影响。不同施氮处理对甘蔗根系内生真菌多样性和丰富度均无显著影响;不同施氮处理均提高了甘蔗根际土壤中沙蜥属(Saitozyma)、木霉属(Trichoderma)、unclassified_p__Ascomycota、镰刀菌属(Fusarium)等优势真菌属的相对丰度,降低了篮状菌属(Talaromyces)、unclassified_f__Herpotrichiellaceae、梨孢霉属(Coniosporium)、青霉属(Penicillium)、刺球菌属(Chaetosphaeria)、毛壳菌属(Chaetomium)、unclassified_o__Hypocreales等优势真菌属的相对丰度;不同施氮处理亦提高了unclassified_k__Fungi、unclassified_p__Ascomycota等优势甘蔗根系内生真菌属的相对丰度,降低了篮状菌属、毛壳菌属和unclassified_f__Strophariaceae等优势甘蔗根系内生真菌属的相对丰度。结果表明,长期单一的施氮处理容易诱导甘蔗根际土壤或根系内生真菌群落组成趋向单一,具有降低甘蔗植株抵御外界胁迫能力的潜在风险。基于维护甘蔗根际土壤生态健康的视角,适宜甘蔗的施氮量以低氮处理(L)的施用量(96 kg/hm^(2))为佳。

冬季油樟产黄酮内生真菌的分离鉴定及其抗氧化和挥发性成分分析

目的深入挖掘油樟内生真菌资源,从冬季油樟根、茎、叶中筛选产黄酮菌株并对其抗氧化和挥发性成分进行分析。方法采用组织培养、形态学观察和分子生物学方法分离鉴定油樟内生真菌,借助显色反应和NaNO_(2)-Al(NO_(3))_(3)比色法筛选具有产黄酮能力菌株,利用清除自由基初步评估产黄酮最优菌株的抗氧化活性,并通过气相色谱-质谱法(GC-MS)分析菌株的发酵产物成分。结果共获得61株内生真菌,隶属于3门23科29属,子囊菌门(Ascomycota)为优势门,肉座菌科(Hypocreaceae)和小丛壳科(Glomerellaceae)为优势科,木霉属(Trichoderma)和炭疽菌属(Colletotrichum)为优势属。不同组织间内生真菌种类和数量存在明显差异,其中茎部菌株多样性、均匀度和丰富度指数均最高,且茎部和叶部相似性系数最高。通过产黄酮筛选到WG5(Trichoderma)和WG15(青霉属,Penicilium)2株内生真菌,其中WG15总黄酮含量较高且表现出较好的抗氧化活性,DPPH和ABTS自由基清除率的IC50分别为0.52和0.49 mg/L。挥发性物质分析显示,2株菌株代谢产物存在共性和差异,主要包括酯类、酸类、醇类和酚类等物质,共有苯乙醇、2,6-二叔丁基苯酚和棕榈酸成分。结论WG15具有较好的产黄酮和抗氧化能力,可用于后续其他功能的开发,为内生真菌次生代谢产物的活性研究提供了菌种资源。