配戴隐形眼镜后角膜内皮细胞短暂的改变

利用新型非接触式角膜内皮显微镜SP-500(日本,SEED Co.Ltd.),观察无戴镜史健康眼,在配戴各种不同隐形眼镜(CL)的状态下角膜内皮细胞出现的短暂性变化。戴镜20分钟后,PMMA HCl引起角膜中央区bleb改变,软性隐形眼镜(SCL)则引起角膜整体的变化,而且高含水性SCL的bleb发生率明显低于低含水SCL。高透气性硬镜(Dk=105×10^(-11))配戴时,角膜内皮细胞不出现任何改变。

早期2型糖尿病患者肱动脉内皮依赖性血管舒张功能的变化

目的：探讨早期２型糖尿病患者内皮功能的变化。方法：选择５０例无血管并发症且符合世界卫生组织１９９９年糖尿病诊断标准的２型糖尿病患者（２型糖尿病组）和２５例年龄、性别匹配的健康个体（对照组）。测定研究对象的血脂、血糖及糖化血红蛋白。分别测量每位受试者其休息时、反应性充血后和含服硝酸甘油后肱动脉内径。测定基础值(D0)、肱动脉内径(D1)、肱动脉最大内径(D2)。反应性充血后和含服硝酸甘油后肱动脉内径的变化,以第一次测量基础值的百分比表示,(D1-D0)/D0×100%和(D2-D0)/D0×100%分别代表血流介导的内皮依赖性血管舒张功能和硝酸甘油介导的内皮非依赖性血管舒张功能。结果:①与对照组相比,2型糖尿病组总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B、空腹血糖明显增高,而高密度脂蛋白胆固醇明显降低(t=1.999～2.313,P<0.05)。②2型糖尿病组血流介导的血管舒张功能犤(3.62±0.41)%犦明显低于对照组犤(4.68±0.31)%犦(t=2.306,P<0.05)。基础血管内径、基础血流、硝酸甘油介导的血管舒张功能在2组间无明显差异(P>0.05)。结论:早期2型糖尿病患者内皮依赖性血管舒张功能降低。

脑梗死患者颈动脉内膜-中层厚度及肱动脉内皮功能的探讨

目的:探讨脑梗死患者肱动脉内皮功能和颈动脉内膜-中层厚度改变情况及临床意义。方法:检测46例脑梗死患者和40例健康体检者颈动脉内膜-中层厚度(IMT)以及肱动脉在反应性充血前、后舒张末期内径变化。结果:脑梗死组肱动脉内皮依赖性舒张(FMD)功能显著低于对照组,颈动脉内膜-中层厚度较对照组明显增加,脑梗死组IMT与FMD呈显著负相关。结论:脑梗死患者存在较严重的FMD减低及IMT增厚,肱动脉内皮功能障碍与动脉粥样硬化显著相关。

球状脂联素对晚期糖基化终产物诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的蛋白表达影响

目的:研究球状脂联素(gAd)抑制晚期糖基化终产物(AGEs)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的相关蛋白表达。方法:体外用AGEs培养HUVECs,经四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)测定细胞活性,Annexin V-FITC/PI双染标记法检测细胞凋亡,免疫印记法检测Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果:AGEs作用HUVECs,经MTT和流式细胞仪检测,细胞凋亡具有AGEs浓度依赖性。相同浓度AGEs作用HUVECs时,gAd预处理组与非预处理组比较,明显抑制HUVECs凋亡。免疫印记结果显示gAd预处理组与非预处理组比较,gAd可明显抑制Bax蛋白表达,增强Bcl-2蛋白表达。结论:gAd可通过激活Bcl-2、抑制Bax蛋白表达,拮抗AGEs诱导HUVECs凋亡。

活动性类风湿性关节炎的血管内皮舒张功能分析

目的:探讨活动性类风湿性关节炎(RA)患者的血管内皮舒张功能。方法:利用血管外超声技术检测入选病例的血管内皮舒张功能。结果:RA活动组的血管内皮依赖性舒张功能有显著性减退,ESR、CRP、RF、BPC与血管内皮依赖性舒张功能呈直线相关,ESR、RF与血管非内皮依赖性舒张功能相关。结论:活动性RA患者存在血管内皮舒张功能减退,ESR、CRP、RF、BPC与血管内皮依赖性舒张功能有关。

还原型谷胱甘肽对2型糖尿病血管内皮功能的影响

目的:探讨还原型谷胱甘肽(GSH)对2型糖尿病(T2DM)血管内皮功能的保护及可能机制。方法:36例T2DM患者静滴GSH 1.8 g/d共2周。结果:GSH明显降低TC、TG、LDL-C、超敏C反应蛋白(sCRP)、内皮素(ET)的浓度,提高血清过氧化氢酶(CAT)超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性。结论:GSH对T2DM血管内皮功能具有保护作用。

老年冠心病与血管内皮功能及血清肌钙蛋白相关性分析

目的:探讨老年冠心病患者血管内皮功能与肌钙蛋白的变化及相关性。方法:对55例老年冠心病组,50例无冠心病老年对照组,采用高分辨率超声测算内皮依赖性血流介导的舒张功能(FMD)和非内皮依赖性硝酸甘油介导的舒张功能(NMD),全自动化学发光仪对上述组别进行血清cTnI含量测定。结果:老年冠心病组中FMD、NMD明显低于老年对照组(P<0.01),且血清cTnI含量明显高于老年对照组(P<0.01)。结论:老年冠心病与血管内皮功能的失调及肌钙蛋白的变化密切相关。

代谢综合征及其代谢指标异常对患者血浆vWF与NO含量的影响

目的：观测代谢综合征（MS）患者血浆中血管性假性血友病因子（vWF）和一氧化氮（NO）含量的改变，探讨其对内皮功能的影响。方法：79例患者按MS代谢指标异常数量的不同分为1～2个代谢指标异常组（n=43）和MS组（n=36），另设正常对照组（n=30），测定其血浆中vWF及NO含量，分析MS代谢指标异常与vWF、NO的关系。结果：MS患者的vWF含量高于1～2个代谢指标异常组（P〈0．05）和正常对照组（P〈0．01），1～2个代谢指标异常组的vWF值高于正常对照组（P〈0．05）；MS组的NO含量低于正常对照组（P〈0．05），1～2个代谢指标异常组的NO含量低于正常对照组（P〈0．05），MS组与1～2个代谢指标异常组无明显差异（P〉0．05），但是在两组去除糖尿病患者后，MS组的NO值低于1～2个代谢指标异常组。结论：随着代谢指标异常增多，患者内皮功能受损加重。

糖尿病视网膜病变患者外周血内皮祖细胞数量及功能的变化

目的观察糖尿病视网膜病变（DR）患者外周血内皮祖细胞（EPC）数量及功能变化。方法选取DR患者12例（DR组）、糖尿病（DM）患者18例（DM组）及无DM的老年性白内障患者15例（对照组）纳入研究。密度梯度离心法收集各组患者外周血单个核细胞，培养后第10天采用流式细胞仪计数EPC细胞阳性率。采用二苯基四氮唑嗅盐（MTT）比色法、黏附能力测定实验及Transwell实验检测EPC的增生、黏附和迁移能力。结果流式细胞仪检测结果显示，对照组、DM组及DR组培养后第10天EPC细胞阳性率分别为（45．190±1．287）％、（30．130±3．245）％、（37．370±2．501）％；3组间差异有统计学意义（F=27．690，P=0．001）。MTT比色法检测结果显示，对照组、DM组及DR组吸光度[A，旧称光密度（OD）]值分别为0．330±0．047、0．225±0．042、0．120±0．029；3组间差异有统计学意义（F=29．327，P=0．000）。黏附能力测定实验结果显示，对照组、DM组及DR组EPC细胞数分别为76．400±7．503、51．167±6．646、26．500±7．853；3组间差异有统计学意义（F=56．612，P=0．000）。Transwell实验结果显示，对照组、DM组及DR组EPC细胞数分别为23．600±6．504、20．833±4．491、12．000土2．944；3组间差异有统计学意义（F=6．477，P=0．012）。结论DR患者外周血EPC数量减少，且其增生、黏附和迁移能力受损。

辛伐他汀对糖尿病视网膜病变大鼠外周血内皮祖细胞数量和视网膜病变的影响

目的探讨辛伐他汀对糖尿病视网膜病变（DR）大鼠外周血内皮祖细胞（EPCs）数量及视网膜病变的影响。方法雄性成年Wistar大鼠80只，以随机数字表法分为正常对照组、模型对照组、安慰剂组、辛伐他汀组，每组各20只大鼠。采用腹腔注射链脲佐菌素（STZ）建立DR大鼠模型。正常对照组、模型对照组不给予任何干预；辛伐他汀组予辛伐他汀20mg／kg灌胃，1次／d；安慰剂组给予等量蒸馏水灌胃，1次／d。分别于1、4及12周时取静脉血，采用流式细胞仪分别计数各组大鼠外周血EPCs数量的变化。于12周时处死大鼠，摘除眼球行苏木精伊红（HE）染色，采用伊文思蓝（EB）定量检测血视网膜屏障的破坏程度，免疫组织化学法分析CD31在大鼠视网膜中的表达。实时定量逆转录聚合酶链反应检测内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）及血管生成素-1（Ang—1）在视网膜的表达。对比分析EPCs的数量改变与视网膜病理变化的相互关系。结果与正常对照组大鼠相比，注射STZ后1、4、12周时安慰剂组大鼠外周血EPCs数均降低；注射STZ后1、4、12周时辛伐他汀组大鼠外周血EPCs数明显高于模型对照组和安慰剂组，差异均有统计学意义（t=4．967，5．648，6．688，6．042，7．392，7．454；P〈0．05）；模型对照组和安慰剂组大鼠外周血EPCs数相比，差异无统计学意义（t=0．525，-0．249，-0．619；P〉0．05）；正常对照组和辛伐他汀组大鼠外周血EPCs数相比，差异均有统计学意义（t=6．733，2．794，-5．535；P〈0．05）。组织病理学检查显示，正常对照组大鼠视网膜各层结构清晰、排列整齐、形态正常；模型对照组和安慰剂组大鼠视网膜细胞排列紊乱，细胞核肿胀、体积增大，视网膜组织水肿；辛伐他汀组大鼠视网膜各层组织水肿减轻，细胞排列渐规则。模型对照组和辛伐他汀组大鼠视网膜平均EB渗漏量较正常对照组显著增加，辛伐他汀组较模型对照组明显减少，差异均有统计学意义（F=65．808，P〈0．05）。正常对照组、模型对照组和安慰剂组中表达CD31的阳性细胞数显著低于辛伐他汀组，组间CD31阳性细胞数比较，差异有统计学意义（F=24．799，P％0．05）；eN（）S在模型对照组表达较正常对照组明显减弱，辛伐他汀组表达强度较模型对照组增强（t=-2．750，2．230；P〈0．05）；iNOS和Ang-1在模型对照组表达较正常对照组明显增强，辛伐他汀组表达强度较模型对照组减弱，差异均有统计学意义（t=3．881，-1．144，4．244，-1．458；P〈0．05）。安慰剂组视网膜EB渗漏量、eNOS、iNOS及Ang-1的相对表达量与模型对照组相比，差异均无统计学意义（t=0．480，-0．877，0．062，0．220；P〉0．05）。结论辛伐他汀可动员DR大鼠外周血EPCs，诱导视网膜内皮细胞迁徙分化，减缓DR进展。其可能机制为调节eNOS和iNOS等内皮形成相关因子。

血浆致动脉硬化指数与2型糖尿病患者早期血管内皮依赖性舒张功能的相关性研究

目的:探讨2型糖尿病早期患者血浆致动脉硬化指数(Atherogenic index of plasma,AIP)与血管内皮依赖性舒张功能(FMD)的关系。方法:选择50例无大血管并发症的2型糖尿病患者(DM),34例年龄、性别相匹配健康个体作为对照组(NC)。在血管回声跟踪技术条件下,采用高分辨血管外超声法检测肱动脉血流介导的血管内皮依赖性舒张功能,以Log(TG/HDL-C)计算血浆致动脉硬化指数(AIP)。结果:(1)与NC组比较,DM组AIP明显升高,FMD明显下降,分别为[(0.013±0.23)vs(0.27±0.35),P<0.01]和[(7.10±2.23)%vs(4.11±1.13)%,P<0.01]。以FMD为因变量,进行多元线性回归分析提示AIP与FMD明显负相关(P<0.05)。结论:AIP间接反映LDL颗粒直径的大小,AIP升高,LDL颗粒直径变小可能促进了2型糖尿病早期血管内皮依赖性舒张功能受损。

慢病毒介导的解偶联蛋白-2基因差异表达对人脐静脉内皮细胞增生及凋亡的影响

目的 观察解偶联蛋白-2（UCP-2）基因差异表达对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增生及凋亡的影响。 方法 构建UCP-2 rs660339位点碱基是胞嘧啶（C）或胸腺嘧啶（T）的慢病毒载体UCP-2C、UCP-2T。将HUVEC分为UCP-2C组、UCP-2T组、阴性对照（NC）组，分别转染UCP-2C、UCP-2T、无意义阴性病毒。荧光显微镜观察各组HUVEC病毒感染效率；实时定量聚合酶链反应检测各组HUVEC UCP-2 mRNA表达；细胞计数试剂盒、流式细胞仪检测各组HUVEC增生、凋亡情况；蛋白免疫印迹法、激光共聚焦显微镜检测各组HUVEC B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）蛋白的表达及荧光强度。 结果 各组HUVEC病毒感染效率均＞80%。UCP-2C组、UCP-2T组HUVEC UCP-2 mRNA表达较NC组显著增高,差异有统计学意义（F=29.183，P=0.001）。目的病毒感染后48、72、96 h，UCP-2C组、UCP-2T组HUVEC增生显著高于NC组，差异有统计学意义（F=15.970、16.738、5.414，P=0.004、0.004、0.045）。感染后72 h，与NC组比较，UCP-2T组、UCP-2C组HUVEC凋亡率均降低，差异有统计学意义（F=277.138，P=0.000）；UCP-2T组HUVEC凋亡率较UCP-2C组低（P=0.003）。UCP-2T组、UCP-2C组HUVEC Bcl-2蛋白表达显著高于NC组，差异有统计学意义（F=425.679，P=0.000）；UCP-2T组HUVEC Bcl-2蛋白表达高于UCP-2C组（P=0.002）。UCP-2T组、UCP-2C组HUVEC Bcl-2蛋白荧光强度显著高于NC组，差异有统计学意义（F=11.827，P=0.008）；UCP-2T组、UCP-2C组之间HUVEC Bcl-2蛋白荧光强度差异无统计学意义（P=0.404）。 结论 UCP-2 rs660339位点差异表达可能影响HUVEC增生及凋亡；UCP-2T较UCP-2C抑制凋亡作用更显著。

血小板反应蛋白1活性片段VR-10合成多肽对恒河猴脉络膜视网膜内皮细胞增生及迁移的影响

目的 观察血小板反应蛋白1（TSP-1）活性片段VR-10合成多肽对恒河猴脉络膜视网膜内皮细胞（RF/6A）增生、迁移的影响.方法 培养RF/6A细胞并将其分为对照组,0.1、1.0、10.0 μg/mlVR-10合成多肽组及1.0 μg/ml TSP-1全肽组.细胞培养后6、12、24、48 h,采用噻唑蓝（MTT）法检测各组RF/6A细胞存活率.细胞培养后24 h,Transwell小室实验检测各组RF/6A细胞迁移抑制率.采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测10.0 μg/mlVR-10合成多肽对细胞中半胱天冬酶（caspase）-3、凋亡相关因子（FAS）蛋白表达的影响.采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测10.0 μg/ml VR-10合成多肽对RF/6A细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）、FAS配体（FASL） mRNA表达的影响.结果 MTT法检测结果显示,随作用时间延长,干预组RF/6A细胞存活率越低;随VR-10合成多肽浓度增加,RF/6A细胞存活率也越低.以作用48 h时10.0 μg/ml VR-10合成多肽组RF/6A细胞存活率最低,为78％.细胞培养24 h后,10.0 μg/ml VR-10合成多肽组RF/6A细胞迁移抑制率最高,1.0 μg/ml TSP-1全肽组次之.与对照组比较,不同浓度VR-10合成多肽组及1.0 μg/ml TSP-1全肽组RF/6A细胞迁移抑制率均明显增加,差异有统计学意义（P＜0.05）.Western blot检测结果显示,在相对分子质量32＆#215;103、20＆#215;103处可见caspase-3蛋白条带,在相对分子质量48＆#215;103处可见FAS蛋白条带.10.0 μg/ml VR-10合成多肽组与对照组RF/6A细胞中caspase-3（t=-66.240、138.813）、FAS（t=163.114）蛋白表达比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）.RT-PCR检测结果显示,与对照组比较,10.0 μg/ml VR-10合成多肽组bcl-2 mRNA表达明显降低,差异有统计学意义（t=-67.419,P=0.000）;FASL mRNA表达明显增强,差异也有统计学意义（t=39.365,P=0.001）.结论 TSP-1活性片段VR-10合成多肽能抑制RF/6A细胞增生、迁移.

白细胞介素17在人视网膜血管内皮细胞增生、迁移及凋亡中的作用

目的 观察白细胞介素17（IL-17）在人视网膜血管内皮细胞（HREC）增生、迁移及凋亡中的作用.方法 体外培养HREC,并取对数生长期的细胞进行实验.采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot）检测HREC中IL-17受体（IL-17R）基因和蛋白的表达.以不含IL-17的培养液培养细胞作为对照组.以浓度50、100、200、500 μg/L的1L-17培养液干预HREC,采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）增生分析法检测不同浓度IL-17对HREC细胞增生的作用,细胞划痕法测定不同浓度IL-17对HREC细胞迁移的影响.以浓度200 μg/L的IL-17培养液干预HREC,采用流式细胞技术检测1L-17对HREC细胞凋亡的影响.以1、2 mg/L的IL-17培养液干预HREC,应用RT-PCR检测HREC中碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase3）、凝血酶敏感蛋白-1（TSP-1）的mRNA表达,Western blot检测细胞中Caspase-3的蛋白表达.结果 HREC中存在IL-17R的基因和蛋白表达.CCK-8增生分析法结果显示,随着IL-17培养液的浓度不断增加,吸光度[A,旧称光密度（OD）]值也呈上升趋势.与对照组比较,200、500 μg/L干预组A值明显升高,差异均有统计学意义（t=-3.235、-6.276,P=0.032、0.000）.细胞划痕法检测结果显示,干预12、24 h时,100 μg/L干预组（t=-3.551、-2.849,P=0.006、0.019）、200μg/L干预组（t=-10.347、-4.519,P=0.000、0.001）、500 μg/L干预组（t=-3.541、-2.607,P=0.008、0.036）HREC迁移距离均明显增加,差异有统计学意义.流式细胞技术检查结果显示,200 μg/L干预组细胞凋亡比例较对照组明显下调,差异有统计学意义（t=5.682,P=0.047）.RT-PCR及琼脂糖电泳结果显示,经IL-17干预后HREC中bFGF的mRNA表达水平呈升高趋势,而Caspase-3和TSP-1的mRNA表达水平呈下调趋势.Western blot检测结果显示,经IL-17干预后HREC中Caspase-3蛋白表达呈下调趋势.结论 IL-17能促进HREC增生、迁移,并抑制HREC凋亡.其机制可能与促进bFGF表达、抑制Caspase-3表达有关.