内皮克隆形成细胞的研究进展

内皮克隆形成细胞(endothelial colony-forming cells,ECFCs)是一种有别于经典内皮祖细胞的具有强大血管新生功能的晚期内皮祖细胞。ECFCs在心、肺、脑的缺血修复中具有强大的血管生成潜能,在缺血肢体及损伤骨组织的修复中能明显诱导血管相关因子的表达并促进血管新生。ECFCs具有强大的肿瘤归巢效应,与肿瘤的发生发展及预后关系密切,可为血管再生研究、肿瘤治疗、组织再生工程等领域提供新的方向。

内皮克隆形成细胞条件培养基对人真皮成纤维细胞生物学作用的影响

目的:探讨内皮克隆形成细胞条件培养基(ECFCs-CM)对人真皮成纤维细胞(HDFs)生物学作用的影响。方法:从人脐带血中分离内皮克隆形成细胞(ECFCs)并鉴定;采用抗体芯片检测ECFCs-CM中细胞因子表达谱;将ECFCs-CM作用于HDFs,EBM-2作为对照,采用CCK-8法、细胞划痕实验及流式细胞术分别检测细胞的增殖、迁移及凋亡情况。结果:原代培养细胞符合ECFCs的特征;ECFCs-CM相对高表达PDGF-BB、EGF等细胞因子;实验组HDFs增殖能力和迁移能力均高于对照组,且在血清饥饿环境下实验组HDFs凋亡率低于对照组。结论:ECFCs-CM可促进HDFs增殖和迁移,并可抑制其在血清饥饿环境下的凋亡。

人脐静脉血内皮克隆形成细胞的分离培养与鉴定

目的体外建立一种简便的人脐静脉血内皮克隆形成细胞(ECFCs)分离培养方法,并对其进行鉴定。方法无菌条件下收集脐静脉血,以密度梯度离心法分离脐血单个核细胞(MNCs),诱导分化为ECFCs,倒置显微镜下观察其原代及传代培养细胞生长状况并通过流式细胞仪、免疫细胞化学、荧光双染色对ECFCs进行鉴定。结果 ECFCs培养过程可出现边界清楚的类圆形单层鹅卵石样细胞集落,细胞增殖能力强,连续传十几代细胞形态稳定,ECFCs高表达内皮系细胞表面抗原,而不表达造血系表面标记;可吞噬Dil-ac-LDL并结合FITC-UEA-1。结论通过简单、可靠的实验方法获得了ECFCs,为进一步探讨其生物学功能及临床应用提供了基础。

AMPK—KLF2参与促红细胞生成素诱导的内皮克隆形成细胞血管新生潜能

目的血管新生是影响动脉粥样硬化和其他缺血缺氧性心血管疾病病程发展、转归的重要过程。在心血管疾病中，如何有效地促进缺血区域的血管新生具有重要的研究价值。既往研究表明，血管内皮生长因子（VEGF）和他汀类药物可以通过激活腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）．继而上调转录因子KLF2的表达，促进内皮一氧化氮合酶（eNOS）表达，进而增加NO产生，从而促进内皮克隆形成细胞（endothelialcolonyformingcells，ECFC）向内皮细胞（endothelialcells，Ec）分化，有效地促进血管新生。促红细胞生成素（EPO）是一种糖蛋白激素，是哺乳动物调节红细胞生成所必需的体液性生长因子。已有研究表明，EPO在心血管系统中具有重要的生理作用。本研究旨在探讨EPO在血管新生中的作用及其分子机制。

内皮克隆形成细胞旁分泌对人脐静脉内皮细胞生物学功能的影响

背景:研究表明,内皮克隆形成细胞移植对缺血损伤组织的血管新生具有促进作用。然而,这一作用是否与其旁分泌效应有关,仍有待进一步研究证实。目的:检测人脐血来源内皮克隆形成细胞条件培养基中细胞因子分泌谱,并观察内皮克隆形成细胞条件培养基对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移及成管能力的影响。方法:从人脐血中分离、培养内皮克隆形成细胞,并进行细胞鉴定。采用抗体芯片对无血清内皮克隆形成细胞条件培养基中的细胞因子进行检测。采用无血清EBM-2培养基作为对照组,应用CCK-8、细胞划痕实验、Matrigel成管实验检测内皮克隆形成细胞条件培养基对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移及成管能力的影响。结果与结论:(1)原代培养细胞形态:培养的细胞呈"铺路石"样生长,表达CD34,KDR及CD144,不表达CD45及CD133,Dil-acLDL摄取及FITC-UEA-I结合双阳性,在Matrigel基质胶中可形成管腔样结构,以上均符合内皮克隆形成细胞的特征;(2)抗体芯片检测:内皮克隆形成细胞条件培养基高表达30种促血管新生因子;(3)CCK-8检测:实验组人脐静脉内皮细胞在24,48,72 h增殖活性均高于对照组(P<0.01);(4)细胞划痕实验结果显示,实验组人脐静脉内皮细胞迁移率在12,24 h均高于对照组(P<0.01);(5)与对照组相比,实验组人脐静脉内皮细胞在Matrigel基质胶上可形成更多的管状结构(P<0.01)。(6)结果表明:内皮克隆形成细胞能通过旁分泌效应促进成熟内皮细胞的生物活性。

环状RNA Amotl-1对内皮克隆形成细胞影响妊娠期糖尿病早产的调控

目的:探讨内皮克隆形成细胞对妊娠期糖尿病(GDM)孕妇发生早产的影响机制,分析环状RNA Amotl-1与内皮克隆形成细胞关系。方法:分别选取早产的GDM孕妇及健康孕妇,收集血样内皮克隆形成细胞,通过小管形成和划痕实验实验,观察环状RNA Amotl-1与内皮克隆形成细胞的关联性。结果:早产的GDM孕妇内皮克隆形成细胞(99.2%)多于健康孕妇(35.7%);小管形式实验小管长度,si RNA转染组(105.17±1.34μm)、质粒转染组(151.62±2.51μm)和空白对照组(98.56±3.71μm)存在差异(P<0.05)。细胞划痕平面迁移实验迁移率,RNA-环状RNA Amotl-1质粒近100%、si RNA为55.9%、对照组为5.2%。结论:环状RNA Amotl-1通过对内皮克隆形成细胞的促进调控GDM孕妇早产的发生和发展。

人脐带血中内皮克隆形成细胞的分离和培养

目的:脐带血来源的内皮克隆形成细胞具有高度增殖、自我更新和血管生成的能力,是再生医学和母胎医学领域研究的热点。本研究旨在提出一种有效的、可靠的人脐带血中内皮克隆形成细胞分离和培养方法。方法:取抗凝脐血,采用密度梯度离心法分离单核细胞并进行贴壁培养,在细胞克隆形成但未融合成片时,进行单克隆的挑取再培养,最后对所得细胞进行表型和功能的鉴定。结果:所获细胞增殖能力强,形态单一,呈鹅卵石样,连续传代8次,未见细胞性状改变。接种到基质胶上,细胞可连接为管状、网状结构。能摄取培养液中的低密度脂蛋白并结合荆豆凝集素,细胞免疫荧光显示其表达典型的内皮细胞标志性分子CD31、e NOS、VE-Cadherin、v WF。结论:通过本研究的方法,我们从脐带血中获得足够数量和高纯度的内皮克隆形成细胞,这为进一步的实验研究提供了可靠的基础。

内皮克隆形成细胞的研究进展和应用前景

内皮克隆形成细胞(endothelial colony-forming cells, ECFCs)是内皮祖细胞(endothelial progenitor cells, EPCs)的一种亚型,具有高度增殖、克隆形成和裸鼠体内血管形成的能力,在维持血管稳态方面发挥着重要作用。ECFCs的来源很广,包括外周血、脐血、骨髓、血管壁,以及人诱导的多功能干细胞(human-induced pluripotent stem cells, hiPSCs),其中研究较为深入的是外周血ECFCs(PB-ECFCs)和脐血ECFCs(CB-ECFCs)。在此,我们将简要介绍ECFCs功能障碍与疾病的相关性,总结ECFCs在缺血损伤、组织工程以及肿瘤治疗领域的基础研究进展和应用前景,最后对小鼠体内研究的局限性以及细胞体外培养条件改良等问题进行探讨。

内皮祖细胞与糖尿病血管再生障碍的研究进展

糖尿病内皮功能障碍和新生血管受损,与糖尿病心血管并发症发生密切相关.内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)是一类骨髓来源的细胞,其在机体受损后的内皮化过程和血管修复中发挥重要作用,不仅可以将自身整合到新形成的毛细血管中,还可以旁分泌促血管生成因子发挥作用.糖尿病患者EPCs数目减少、功能受损与外周动脉粥样硬化之间联系紧密,对糖尿病大血管病变的严重程度具有指示作用,改善EPCs的功能可以促进糖尿病下肢缺血模型的血流恢复.因此,EPCs有望成为糖尿病大血管病变的治疗靶点.