β受体阻断剂对实验性动脉粥样硬化内皮型一氧化氮合酶活性和基因表达的影响

目的比较三种β受体阻断剂卡维地洛、普萘洛尔和阿替洛尔对动脉粥样硬化家兔血管壁内皮型一氧化氮合酶的影响。方法24只雄兔随机分为高脂组、高脂+卡维地洛组[10 mg/(kg.d)]、高脂+普萘洛尔组[10 mg/(kg.d)]和高脂+阿替洛尔组[20 mg/(kg.d)]。各组给予相应处理1周后,行腹主动脉球囊损伤术,并继续相应处理10周。6只家兔给予正常饮食并施以假手术作为正常对照。实验结束时,测定血脂、脂质过氧化物及一氧化氮水平,取动脉组织检测血管内皮型一氧化氮合酶活性,用原位杂交法检测主动脉内皮型一氧化氮合酶基因表达量及分布规律。结果与正常组相比,高脂组内皮型一氧化氮合酶活性及基因表达均明显降低(P<0.01);与高脂组相比,三种β受体阻断剂在所用剂量内均未对血脂产生显著性影响;卡维地洛明显增强内皮型一氧化氮合酶活性,而普萘洛尔和阿替洛尔均未对上述指标产生明显影响。原位杂交显示,正常家兔动脉壁内皮型一氧化氮合酶mRNA主要在内皮层呈强阳性表达,高脂组内皮型一氧化氮合酶mRNA在内皮层表达显著降低,三种β受体阻断剂对内皮型一氧化氮合酶mRNA表达均无显著影响。结论与普萘洛尔和阿替洛尔相比,卡维地洛能独特地增强内皮源性内皮型一氧化氮合酶活性。

雷米普利对野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺组织中一氧化氮和内皮型一氧化氮合酶活性的影响

目的探讨雷米普利对野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺组织中一氧化氮(NO)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性的影响。方法雄性SD大鼠60只,随机分为正常对照组、野百合碱组、雷米普利组(n=20)。野百合碱组和雷米普利组一次性颈部注射野百合碱60mg/kg后,雷米普利组用雷米普利灌胃4周,野百合碱组生理盐水灌胃4周;对照组颈部注射生理盐水后再用生理盐水灌胃4周。4周后测定大鼠的右室收缩压(RVSP)和右心室肥厚指数(RVHI),运用图像分析软件测定肺小动脉管壁厚度(WT)占动脉外径(ED)的百分比(WT%)及管壁面积(WA)占血管总面积的百分比(WA%);检测肺组织中NO浓度。Western blotting分析肺组织中eNOS、P-Ser1177-eNOS的表达和蛋白激酶B(Akt)的磷酸化水平。结果与正常对照组相比,野百合碱组RVSP、RVHI、WT%、WA%明显升高(P<0.05),肺组织中NO浓度、eNOS、P-Ser1177-eNOS和Akt磷酸化水平显著降低(P<0.05);雷米普利干预后RVSP、RVHI、WT%、WA%明显降低(P<0.05),肺组织中NO浓度、eNOS、P-Ser1177-eNOS和Akt磷酸化水平明显升高(P<0.05)。结论雷米普利可抑制野百合碱诱导的肺动脉高压及肺血管重构,机制可能与其能使eNOS活性和NO生成增加有关。

甲基亚砷酸对内皮型一氧化氮合酶活性的影响

目的研究甲基亚砷酸(MMAⅢ)对内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性的影响,并初步探讨MMAⅢ抑制eNOS活性的作用机制。方法从体外培养的牛大动脉血管内皮细胞中制备eNOS提取液,单独暴露于MMAⅢ(暴露剂量分别为1、2.5、5、10、15μmol/L)或其他砷化合物(亚砷酸钠、砷酸钠、甲基砷酸或二甲基砷酸,暴露剂量均为10μmol/L);或者联合暴露于MMAⅢ(10μmol/L)和二硫苏糖醇(DTT,100μmol/L)。37℃暴露5min后测定L-[3H]精氨酸产生的L-[3H]瓜氨酸量来反映eNOS活性。结果eNOS活性随着MMAⅢ暴露剂量增加而逐渐降低,MMAⅢ的2.5、5、10、15μmol/L剂量组的eNOS活性分别是对照组的44.4%、23.4%、11.7%和6.6%,均显著低于对照组(p<0.01);MMAⅢ对eNOS活性的50%抑制剂量(IC50)为2.1μmol/L;其他砷化合物10μmol/L暴露对eNOS活性均无明显影响(p>0.05);DTT(100μmol/L)能够部分恢复MMAⅢ暴露引起的eNOS活性降低。结论MMAⅢ对eNOS活性具有显著抑制作用;MMAⅢ抑制eNOS活性很可能与MMAⅢ和eNOS分子的二巯基结构的相互作用有关。

高浓度葡萄糖对人脐静脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶活性及其蛋白表达的影响

不同浓度葡萄糖及高浓度葡萄糖(高糖)加胰岛素孵育人脐静脉内皮细胞(HUVECs)不同时间后,高浓度葡萄糖呈浓度和时间依赖性明显抑制内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性,生理浓度的胰岛素可部分地逆转高糖对eNOS活性及其表达的抑制作用。

β受体激动增加人脐静脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶活性的细胞内机制

背景:β-肾上腺素能受体激动可增加内皮型一氧化氮合酶活性的细胞信号转导通路,对于揭示β-肾上腺素能系统调控血管张力的生理学机制有重要价值,既往实验显示异丙肾上腺素激活内皮型一氧化氮合酶与内皮型一氧化氮合酶蛋白磷酸化有关。目的:探讨β-肾上腺素能受体激动增加人脐静脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶活性信号转导通路中可能涉及的蛋白激酶。设计:对比观察。单位:郑州大学第一附属医院老年病科。材料:实验于2006-09/2007-06在河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室完成。实验材料为郑州大学第一附属医院妇产科住院的健康顺产或剖宫产患者自愿捐献的新生儿无血肿、夹痕的脐带。所有患者对实验均知情同意,实验方案经医院伦理委员会批准。主要试剂:β-肾上腺素能受体激动剂异丙肾上腺素、磷脂酰肌醇3激酶抑制剂(Wortmannin)、蛋白激酶A抑制剂(H-89)、3H-L-arginine(美国SIGMA公司)。方法:设置空白对照组、H-89组、Wortmannin组及H-89+Wortmannin组,每组因素下再分异丙肾上腺素及空白对照两个干预因素组,每小组三复管。观察H-89和Wortmannin分别与人脐静脉内皮细胞孵育10min,再与异丙肾上腺素孵育30min后内皮型一氧化氮合酶活性变化。同位素二步色谱法测定3H-L-citrulline的产量反映内皮型一氧化氮合酶活性。人脐静脉内皮细胞上3H-L-citrulline的产量相对空白对照组以百分比形式表达。主要观察指标:各组内皮型一氧化氮合酶活性变化。结果:①内皮型一氧化氮合酶基础活性为每微克蛋白(3085.62±272.72)mBq,与空白对照组比较,异丙肾上腺素可明显增加内皮型一氧化氮合酶活性(30.72±3.91)%(P<0.001),单纯H-89及Wortmannin不改变内皮型一氧化氮合酶基础活性(0.44±1.00)%,(0.36±1.47)%(P>0.05)。②预先加入H-89及Wortmannin后再加入异丙肾上腺素,可见异丙肾上腺素增加内皮型一氧化氮合酶活性的作用受到明显抑制(4.73±2.19)%,(17.35±3.72)%(P<0.001)。③联合阻断蛋白激酶A和磷脂酰肌醇3激酶对异丙肾上腺素增加内皮型一氧化氮合酶活性的抑制作用(4.92±0.99)%,与单纯阻断蛋白激酶A的作用类似,无累加效应(P>0.05)。结论:β-肾上腺素能受体激动剂异丙肾上腺素能激活内皮型一氧化氮合酶活性的信号通路,在此过程中蛋白激酶A及磷脂酰肌醇3激酶均有参与。

内皮型一氧化氮合酶活性的调节与心血管疾病的研究进展

内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,e NOS)是合成一氧化氮(nitiric oxide,NO)起主要作用的酶,e NOS和NO在调节血管壁结构和功能中有重要作用,参与心血管疾病的病理生理过程。e NOS活性的改变除了常见的磷酸化途径外,还涉及乙酰化、谷胱甘肽化、蛋白质间的相互作用等机制,笔者将简要阐述e NOS的基本结构和功能、e NOS活性的调节途径及其在心血管疾病中的研究进展。

葡萄糖浓度波动对人外周血内皮祖细胞增殖、凋亡及内皮型一氧化氮合酶活性的影响

目的研究葡萄糖浓度波动对人外周血内皮祖细胞(EPCs)增殖、凋亡及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性的影响。方法采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,经含血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子和10%胎牛血清的M199培养基培养7d,贴壁细胞鉴定为EPCs。细胞同化后给予葡萄糖浓度5.5mmol/L(正常对照组)、30mmol/L(糖浓度固定组)和20或40mmol/L(平均浓度为30mmol/L,波动间期为3h,糖浓度波动组)。干预6、12、24、48、96h后,采用WST-1细胞增殖检测试剂盒处理细胞,酶标仪检测细胞增殖;以AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒处理细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡;以一氧化氮合酶检测试剂盒处理细胞,荧光酶标仪检测eNOS活性。结果当平均浓度相同时,与糖浓度固定组相比,糖浓度波动组抑制EPCs增殖及eNOS活性的作用显著增强(P值均<0.05),凋亡率显著增高(P<0.05);糖浓度固定组与糖浓度波动组的增殖率、凋亡率、eNOS活性的差值与干预时间呈正相关(r值分别=0.937、0.927、和0.951,P值均<0.05)。结论葡萄糖浓度波动作为独立因素促进EPCs的凋亡、抑制EPCs的增殖并降低eNOS的活性。EPCs对葡萄糖浓度波动的适应性差。

17β-雌二醇诱导内皮型一氧化氮合酶活性增高及其与细胞内钙的关系

目的 研究 17β -雌二醇 (E2 )对新生小牛主动脉血管内皮细胞 (BAECs)中内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)活性的长期基因效应 ,并进一步探讨胞内钙信号途径在其中的作用。方法 采用培养的BAECs,同位素法测定eNOS的活性 ;Westernblot检测eNOS蛋白表达 ;荧光分光光度计法检测E2 对细胞内钙的影响。结果 (1)E2 (0 .0 0 1,0 0 1,0 .1,1μmol/L)作用于BAECs 4 8h ,使eNOS活性分别增加 130 %± 2 7% ,178%± 19% ,14 2 %± 2 0 % ,14 4 %± 2 7%。E2 激活eNOS活性的作用被雌激素受体拮抗剂Tamoxifen(0 .1μmol/L)所阻断 ;(2 ) 0 .0 1μmol/LE2 作用于BAECs 1h对eNOS蛋白表达无明显影响 ,而作用 2 4h和 4 8h分别使eNOS蛋白表达增加了 2 76 %± 36 %和374 %± 2 0 % ;Tamoxifen明显抑制E2 处理 4 8h后诱导的eNOS蛋白表达 ,抑制率为 6 6 5 %± 7 4 % ;(3) 0 .0 1μmol/LE2 作用BAECs 4 8h ,分别使静息 [Ca2 + ]i增加了 70 .3± 2 1.5nmol/L ,使 10mmol/LATP诱导的BAECs[Ca2 + ]i峰值增加了 2 4 0 .2± 6 8 2nmol/L ,ATP诱导的 [Ca2 + ]i增加值 (峰值与静息值之差 )增加了 170 .5± 4 8.9nmol/L。结论 雌激素可通过长期基因效应而激活eNOS ,至少部分通过核ER介导 。

通心络对急性冠脉综合征患者血小板内皮型一氧化氮合酶活性的影响

目的观察在急性冠脉综合征(ACS)患者中采用通心络胶囊治疗法对其血小板内皮型一氧化氮合酶(e NOS)活性的影响。方法将我院诊治的100例急性冠脉综合征患者,随机分成观察组与对照组,每组均50例,对照组患者给予常规治疗,观察组患者在常规治疗的基础上加服通心络胶囊,对两组患者治疗前后的血小板e NOS活性、临床疗效及不良反应等进行对比。结果与治疗前相比,两组患者治疗后的血小板e NOS活性均显著增加,且观察组治疗后的血小板e NOS活性显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗总有效率为86.00%,与对照组患者的66.00%相比,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者的心血管不良事件发生率为2.00%,显著低于对照组患者的16.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在常规西药治疗的基础上联合服用通心络胶囊治疗急性冠脉综合征患者,可明显增加血小板e NOS活性、抑制血小板聚集,进而起到提高药疗效果,且安全性高。

艾塞那肽对内皮型一氧化氮合酶活性和表达的影响

为观察艾塞那肽对内皮型一氧化氮合酶（endothelialnitricoxidesynthase，eNOS）活性和表达的影响，在正常或高糖条件下以艾塞那肽孵育人脐静脉内皮细胞（humanumbilicalendothelialcells，HUVECs），检测HU-VECs的NO释放量、eNOS活性、eNOS1177位丝氨酸磷酸化水平和总蛋白水平及mRNA水平。结果表明正常葡萄糖条件下，艾塞那肽使HUVECs释放NO增加，提高细胞内eNOS活性及1177位丝氨酸磷酸化水平，提高eNOS总蛋白水平；高糖条件下，艾塞那肽仍具有上述作用，且可提高eNOSmRNA水平。结论：艾塞那肽可上调HUVECs中eNOS的活性和表达，使NO释放增加，可能是其发挥降压及血管内皮保护作用的机制之一。

内皮型一氧化氮合酶在运动预适应改善心肌缺血-再灌注损伤中的作用

背景:运动是防治各种心血管疾病并保护心脏免受缺血-再灌注损伤的有效策略,其作用机制有待深入研究。目的:观察有氧运动预适应对心肌缺血-再灌注损伤的影响,并探讨内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)激活(包括偶联和磷酸化)在其间的作用。方法:取80只成年Wistar大鼠,采用随机数字表法分为安静组(n=40)和运动组(n=40),运动组进行8周有氧运动,安静组在鼠笼内安静饲养。8周后进行3项实验:①实验1:末次训练后,检测大鼠心功能、心脏NO代谢物含量及心脏eNOS、磷酸化eNOS-S1177、eNOS二聚体、eNOS单体的蛋白表达量;②实验2:将大鼠分为安静对照组、运动对照组、安静+eNOS抑制剂组、运动+eNOS抑制剂组,均进行体外心肌缺血-再灌注损伤实验,安静+eNOS抑制剂组、运动+eNOS抑制剂组再灌注前10 min持续灌注eNOS抑制剂,再灌注3 h后检测心功能与心肌梗死面积;③实验3:将大鼠分为安静对照组、运动对照组、安静+eNOS偶联剂组和运动+eNOS偶联剂组,均进行体外心肌缺血-再灌注损伤实验,安静+eNOS偶联剂组和运动+eNOS偶联剂组再灌注前10 min持续灌注eNOS偶联剂,再灌注3 h后检测心肌梗死面积、心脏NO代谢物含量及心脏eNOS、磷酸化eNOS-S1177、eNOS二聚体、eNOS单体和3-硝基酪氨酸的蛋白表达量(其中,磷酸化eNOS-S1177/eNOS比值反映eNOS磷酸化/去磷酸化水平,eNOS二聚体/单体比值反映eNOS偶联/解偶联水平)。结果与结论:①实验1:与安静组比较,运动组大鼠心输出量、左心室射血分数升高(P<0.05),亚硝酸盐和S-亚硝基硫醇含量升高(P<0.05),磷酸化eNOS-S1177、eNOS蛋白表达和磷酸化eNOS-S1177/eNOS比值上调(P<0.05),eNOS二聚体蛋白表达和eNOS二聚体/单体比值升高(P<0.05);②实验2:与安静对照组比较,运动对照组左心室发展压升高(P<0.05),心肌梗死面积下降(P<0.05);与运动对照组比较,运动+eNOS抑制剂组左心室发展压降低(P<0.05),心肌梗死面积增加(P<0.05);③实验3:与安静对照组比较,运动对照组左心室发展压升高(P<0.05),心肌梗死面积下降(P<0.05),磷酸化eNOS-S1177/eNOS比值下降(P<0.05),eNOS二聚体/单体比值下降(P<0.05),S-亚硝基硫醇含量增加(P<0.05),3-硝基酪氨酸蛋白表达量下调(P<0.05);与运动对照组比较,运动+eNOS偶联剂组左心室发展压降低(P<0.05),心肌梗死面积增加(P<0.05),磷酸化eNOS-S1177/eNOS比值升高(P<0.05),eNOS二聚体/单体比值升高(P<0.05),3-硝基酪氨酸蛋白表达升高(P<0.05);④结果表明:有氧运动预适应可诱导心脏保护效应,其机制与心脏缺血-再灌注期间eNOS解偶联以及去磷酸化进而抑制NO过度产生并降低硝基-氧化应激有关。

2型糖尿病患者血清内皮型一氧化氮合酶、网膜素1水平预测糖尿病肾脏疾病发生的价值研究

目的 分析2型糖尿病患者血清内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,e NOS)、网膜素1(Omentin-1)水平对糖尿病肾脏疾病(diabetic kidney disease,DKD)发生的预测价值。方法 选取2020年5月至2023年2月石家庄市第二医院收治的2型DKD患者124例作为DKD组、单纯2型糖尿病患者125例作为对照组。收集所有患者的临床指标;酶联免疫吸附法检测患者血清eNOS、Omentin-1水平;Pearson法分析DKD患者血清eNOS、Omentin-1和临床指标的相关性;多因素Logistic回归模型分析影响2型糖尿病患者发生DKD的危险因素;受试者工作特征曲线分析2型糖尿病患者血清eNOS、Omentin-1水平对DKD发生的预测价值。结果 与对照组比较,DKD组患者血清总胆固醇[(4.75±0.91)mmol/L比(4.48±0.96)mmol/L]、糖化血红蛋白[(9.32±1.25)%比(8.56±1.23)%]、24 h尿蛋白定量[(2.78±0.31)g比(0.15±0.02)g]、尿微量白蛋白(urinary microalbumin,mAlb)[(273.12±20.41)mg/L比(23.08±3.35)mg/L]、血肌酐(serum creatinine,Scr)[(209.53±22.59)μmol/L比(73.52±9.21)μmol/L]水平显著升高,估算肾小球滤过率(estimatedglomerularfiltrationrate, eGFR)[(72.52±13.51)mL·min^(-1)·(1.73m^(2))^(-1)比(107.34±10.27)m L·min^(-1)·(1.73 m^(2))^(-1)]、血清e NOS[(24.48±3.37)U/L比(33.82±4.52)U/L]、Omentin-1[(28.75±4.42)μg/L比(43.63±6.78)μg/L]水平显著降低(P<0.05);DKD患者血清eNOS与Omentin-1水平呈正相关(r=0.674,P<0.05);血清eNOS、Omentin-1与24 h尿蛋白定量、m Alb、Scr呈负相关(r=-0.456、-0.551、-0.503、-0.527、-0.497、-0.495, P<0.05),与eGFR呈正相关(r=0.523、 0.602,P<0.05);24 h尿蛋白定量、mAlb、Scr是影响2型糖尿病患者发生DKD的危险因素(P<0.05),eGFR、e NOS、Omentin-1是影响2型糖尿病患者发生DKD的保护因素(P<0.05);血清eNOS、Omentin-1两者联合预测2型糖尿病患者发生DKD的曲线下面积(area under curve,AUC)为0.942,分别高于血清e NOS(AUC=0.882)、Omentin-1(AUC=0.862)各自单独预测2型糖尿病患者发生DKD的AUC(P<0.05)。结论 DKD患者血清eNOS与Omentin-1水平均呈低表达,二者联合检测对2型糖尿病患者发生DKD有一定预测价值。

槲芪方加减对肝癌化疗栓塞术后大鼠一氧化氮合酶、血管内皮生长因子、乏氧及免疫功能的影响

目的:研究槲芪方加减对肝癌化疗栓塞术后大鼠一氧化氮合酶(iNOS)、血管内皮生长因子(VEGF)、乏氧及免疫功能的影响。方法:50只大鼠中随机抽取12只作为健康组进行对照,37只大鼠建立肝癌模型。建模过程中意外死亡1只大鼠,剩余36只大鼠建模成功,随机分为模型组、肝动脉化疗栓塞术组以及联合组,每组12只。肝动脉化疗栓塞术组给予肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗;联合组在肝动脉化疗栓塞术组基础上给予模型大鼠27 ml/kg槲芪方灌胃,2次/d,共24周。运用全自动生化分析仪检测各组大鼠肝功能指标水平,流式细胞仪检测各组大鼠免疫功能指标水平,苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠肝组织病理变化,原位末端标记法(TUNEL)检测各组大鼠肝癌细胞凋亡,免疫印迹检测各组大鼠VEGF、iNOS、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白表达。结果:与健康组比较,模型组丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)水平均升高(P<0.05),与模型组比较,肝动脉化疗栓塞术组ALT、AST、ALP水平均降低(P<0.05),肝动脉化疗栓塞术组ALT、AST、ALP水平均高于联合组(P<0.05)。与健康组比较,模型组CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)降低,CD8^(+)升高(P<0.05),模型组与联合组比较差异无统计学意义(P>0.05),与模型组及联合组比较,肝动脉化疗栓塞术组CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)降低,CD8^(+)升高(P<0.05)。与健康组比较,模型组细胞凋亡率升高(P<0.05),与模型组比较,肝动脉化疗栓塞术组细胞凋亡率降低(P<0.05),肝动脉化疗栓塞术组细胞凋亡率低于联合组(P<0.05)。与健康组比较,模型组VEGF、iNOS、HIF-1α表达均升高(P<0.05),与模型组比较,肝动脉化疗栓塞术组VEGF、iNOS、HIF-1α表达均升高(P<0.05),与肝动脉化疗栓塞术组比较,联合组VEGF、iNOS、HIF-1α表达均降低(P<0.05)。结论:槲芪方加减可提高肝癌TACE术后大鼠的免疫功能,通过抑制肝癌大鼠乏氧微环境中HIF-1α、iNOS及VEGF水平,改善乏氧微环境,促进肿瘤细胞凋亡。

TSB2通过减少脱偶联内皮型一氧化氮合酶氧自由基生成抑制动脉粥样硬化形成

[目的]观察TSB2抑制热休克蛋白90(HSP90)与内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的结合对动脉粥样硬化形成的影响。[方法]用TSB2处理人脐静脉内皮细胞,用免疫共沉淀法检测HSP90与eNOS的结合情况。利用C57BL/6小鼠和低密度脂蛋白受体敲除(LDLR^(-/-))小鼠,普通饮食(ND)或高脂饮食(HFD)喂养12周,同时腹腔注射PBS或TSB2,分为4组:C57BL/6+ND+PBS组、LDLR^(-/-)+ND+PBS组、LDLR^(-/-)+HFD+PBS组、LDLR^(-/-)+HFD+TSB2组。提取主动脉检测HSP90与eNOS的结合情况,检测主动脉和主动脉窦的粥样硬化斑块情况、一氧化氮(NO)和氧自由基(O_(2)^(·-))生成情况,同时使用左旋精氨酸的竞争性底物L-单甲基-精氨酸(L-NMMA)明确NO的生成和一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)明确O_(2)^(·-)的生成。[结果]与对照组相比,加入TSB2处理的人脐静脉内皮细胞后,HSP90与eNOS的结合水平减少41.06%(P<0.05)。与LDLR^(-/-)+HFD+PBS组相比,LDLR^(-/-)+HFD+TSB2组小鼠主动脉中HSP90与eNOS的结合水平减少40.95%(P<0.05),主动脉内皮细胞O_(2)^(·-)生成水平减少63.73%(P<0.05)(L-NAME明显抑制LDLR^(-/-)+HFD+PBS组O_(2)^(·-)的生成),但NO生成量未见明显变化(L-NMMA抑制所有组NO的生成),同时主动脉及主动脉窦的斑块形成水平分别减少59.39%和68.86%(P<0.05)。[结论]TSB2通过抑制主动脉血管内皮细胞HSP90与eNOS的结合,减少血管内皮细胞脱偶联eNOS的O_(2)^(·-)生成,最终抑制动脉粥样硬化形成。

内皮型一氧化氮合酶与心肌缺血再灌注损伤的关系研究进展

内皮型一氧化氮合酶(eNOS)参与心肌缺血再灌注损伤(MIRI)调控机制和信号通路,其不仅在内皮细胞中表达,也在心肌细胞、肥大细胞、肾上皮细胞、红细胞、白细胞和血小板中表达;eNOS既可以合成NO,扩张血管,也可以合成超氧化物,加剧氧化应激。在MIRI中抑制eNOS解偶联和增加其有益磷酸化,可保护血管内皮功能、抑制氧化应激、逆转凋亡和减轻炎症反应等;eNOS可通过磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶/eNOS、沉默信息调节剂1/eNOS、腺苷单磷酸活化蛋白激酶/eNOS/一氧化氮等信号通路在MIRI中发挥重要作用。

血清髓过氧化物酶及内皮型一氧化氮合酶水平与慢性脑缺血的相关性研究

目的探讨血清髓过氧化物酶(MPO)、血清内皮型一氧化氮合酶(eNOS)水平与慢性脑缺血(CCH)的相关性。方法纳入2022年2~7月在我院门诊就诊的CCH患者50例(CCH组),同期健康体检者30例为对照组,比较两组血清MPO和eNOS的表达量以及其他临床特征,同时采用多因素Logistic回归分析CCH的危险因素。结果CCH组eNOS表达量低于对照组,总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、non-HDL-C及MPO表达量显著高于对照组(P<0.01)。Logistic回归分析显示,eNOS低表达与MPO高表达是CCH的发生独立危险因素(P<0.01)。结论血清MPO在CCH患者中明显升高,eNOS在CCH患者中明显下降。血清MPO、eNOS可能作为CCH的一个有效的生物标志物。

叶酸通过改善内皮型一氧化氮合酶解偶联抑制腹主动脉瘤发展研究

目的探讨叶酸(FA)治疗对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)联合延胡索酸-3-氨基丙腈(BAPN)诱导腹主动脉瘤(AAA)小鼠的预防作用及其可能机制。方法于2022年7—10月在武汉大学人民医院中心实验室进行实验。将30只C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为正常对照组、腹主动脉瘤组(AAA组)和FA干预组(AAA+FA组),每组10只。AAA组:小鼠皮下植入微量渗透泵持续泵入AngⅡ(1μg·kg^(-1)·min^(-1))28 d,同时饲喂含0.25%BAPN饲料28 d。AAA+FA组:同AAA组方法造模,并以FA(15 mg·kg^(-1)·d^(-1))灌胃28 d。正常对照组:实验全程用普通饲料喂养小鼠,自由进水。动脉瘤破裂死亡小鼠立即取材,第29天仍存活小鼠处死取材。取材后,测量小鼠腹主动脉直径,冰冻切片进行活性氧(ROS)染色,石蜡切片进行弹性纤维染色,Western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、二氢叶酸还原酶(DHFR)表达。结果AAA组发生腹主动脉瘤8只(其中1只于21 d死亡),AAA+FA组发生4只,AAA+FA组小鼠腹主动脉瘤发生率显著低于AAA组(40.0%vs.80.0%,χ^(2)/P=1.667/0.170),AAA+FA组腹主动脉直径明显小于AAA组[(1.44±0.19)mm vs.(2.08±0.50)mm,t/P=3.598/0.005]。AAA+FA组腹主动脉弹性纤维结构较AAA组完整,且无明显断裂纤维。AAA+FA组ROS含量及MMP-2、MMP-9表达明显低于AAA组(t/P=4.206/0.048、5.267/0.006),eNOS、DHFR表达高于AAA组(t/P=4.511/0.011、2.914/0.044)。结论FA可改善AngⅡ联合BAPN诱导的腹主动脉瘤,可能是通过上调DHFR的表达从而恢复eNOS偶联状态,减少ROS,并减轻以内侧弹性纤维分解、MMP-2、MMP-9升高为特征的血管重塑。

切应力通过Pim1/Akt调节人脐静脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶Ser633和Ser1177位点磷酸化

目的探讨不同模式的血流切应力对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)Pim1表达的影响,以及对内皮型一氧化氮合酶(eNOS)Ser1177和Ser633位点磷酸化的调控作用。方法体外原代培养的HUVECs,采用平行平板流动腔系统给HUVECs分别施加15 dyn/cm2层流切应力(LSS)和(0.5±4)dyn/cm2振荡切应力(OSS),Western blotting法检测Pim1、Akt和Akt Ser473磷酸化、eNOS、eNOS Ser1177和Ser633位点磷酸化蛋白表达。用特异性小干扰RNA(siRNA)技术分别敲低HUVECs中Pim1和Akt进行干预。结果与OSS刺激相比较,LSS显著上调HUVECs中Pim1蛋白表达水平(P<0.01),同时,Akt Ser473磷酸化、eNOS Ser633和Ser1177位点磷酸化蛋白表达增加(P<0.05或P<0.01);siPim1和Pim1特异性抑制剂SMI-4a干预后,LSS诱导的Pim1蛋白表达显著被抑制(P<0.05),同时Akt Ser473磷酸化、eNOS Ser633和Ser1177位点磷酸化蛋白表达均降低(P<0.05或P<0.01)。敲低Akt,LSS诱导的Akt Ser473磷酸化蛋白表达显著被抑制(P<0.05),同时也显著抑制LSS上调的eNOS Ser633和Ser1177磷酸化蛋白表达(P<0.05),而对LSS上调的Pim1表达无影响(P>0.05)。结论切应力可以通过Pim1/Akt信号通路调节HUVECs eNOS Ser633和Ser1177位点磷酸化。

棕榈酸降低内皮型一氧化氮合酶Ser633位点磷酸化水平对内皮细胞功能影响的分子机制

目的探讨棕榈酸(PA)降低内皮型一氧化氮合酶(eNOS)Ser633位点磷酸化水平对内皮细胞功能影响的分子机制。方法将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)随机分为Control组、PA处理组、FST预处理组、FST预处理+PA组、si-Control组、si-Control+PA组、si-PP2Ac组、si-PP4c组、si-PP2Ac+PA组、si-PP4c+PA组、Vector组、OE-PP4R2组、Vector+PA组、OE-PP4R2+PA组、NAC预处理组、APO预处理组、NAC预处理+PA组、APO预处理+PA组、si-gp91phox组及si-gp91phox+PA组,用Western blot检测eNOS总蛋白、eNOS Ser633磷酸化水平,蛋白磷酸酶2催化亚基(PP2Ac)、蛋白磷酸酶4催化亚基(PP4c)及其负性调节亚基(PP4R2)和NADPH氧化酶(Nox)催化亚基gp91phox蛋白表达水平;将HUVECs随机分为Control组、PA处理组、FST预处理组、FST预处理+PA组、Vector组、OE-PP4R2组、Vector+PA组及OE-PP4R2+PA组,用DAF-FM DA荧光探针检测细胞内NO含量;将HUVECs随机分为Control组、PA处理组、Vector组、OE-PP4R2组、Vector+PA组、OE-PP4R2+PA组,细胞划痕实验检测内皮细胞迁移能力;将HUVECs随机分为Control组、PA处理组、NAC预处理组及APO预处理组,DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS含量。结果PA诱导HUVECs内eNOS Ser633磷酸化水平降低呈时间依赖和浓度依赖方式(P<0.05),但对eNOS总蛋白表达水平无影响(P>0.05);PA下调PP4R2蛋白表达水平、上调gp91phox蛋白表达水平(P<0.05),但不影响PP4c蛋白表达水平(P>0.05);PP4抑制剂FST预处理可逆转PA诱导的eNOS Ser633磷酸化水平降低(P<0.05),恢复细胞内NO产量(P<0.05);敲低PP4c亚基可逆转PA诱导的eNOS Ser633磷酸化水平降低(P<0.05),而敲低PP2Ac亚基对eNOS Ser633磷酸化水平无影响(P>0.05);过表达PP4R2可使eNOS Ser633磷酸化水平升高(P<0.05),细胞内NO生成增加(P<0.05),内皮细胞的迁移能力增强(P<0.05);抗氧化剂NAC和APO预处理,细胞内ROS产量减少(P<0.05),PP4R2亚基蛋白表达增加(P<0.05),同时eNOS Ser633磷酸化水平增加(P<0.05);特异性siRNA敲低gp91phox亚基,可增加PP4R2亚基蛋白表达(P<0.05),提高eNOS Ser633磷酸化水平(P<0.05)。结论PA可通过Nox/ROS通路抑制PP4调节亚基PP4R2蛋白表达,激活PP4,进而降低eNOS Ser633磷酸化水平,细胞内NO产生减少,导致内皮功能障碍。

内皮型一氧化氮合酶在心血管疾病中的调节作用研究进展

一氧化氮(NO)是由一氧化氮合酶(NOS)生成和释放的非常重要的气体信号分子,在心血管疾病发生发展中发挥非常重要的调节作用,本文就内皮型一氧化氮合酶(eNOS)与心血管疾病之间的关系进行综述,旨在为探讨心血管疾病的发病机制及可能的防治药物的研发提供参考。