一氧化氮和内皮型一氧化氮合成酶与血管迷走性晕厥发病的关系

目的探讨一氧化氮和内皮型一氧化氮合成酶与儿童血管迷走性晕厥发病的关系。方法血管迷走性晕厥患儿14例(A组),其他原因引起晕厥患儿10例(B组),健康志愿者20例(C组)。于倾斜试验(HUT)前和倾斜不同时间测定A组与B组患儿的血浆一氧化氮(NO)水平,同时对3组儿童进行内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)基因G894T多态性检测。结果①A组患儿出现阳性反应时血浆NO水平较平卧时显著升高(76.7±9.6vs 90.0±11.4μmol/L,P<0.05);②A组患儿在症状好转后血浆NO水平较试验前显著降低(82.7±9.2 vs61.5±6.9μmol/L,P<0.01);③B组患儿倾斜时血浆NO水平较平卧时差异无显著性;④A,B两组患儿的血压、心率变化与NO水平无显著相关性;⑤A组患儿eNOS基因G894T突变型基因频率显著高于B组与C组(42.9%vs10%,P<0.05)。结论倾斜体位时血浆NO水平异常升高可能参与了血浆血管迷走性晕厥的发病机制,而其升高水平可能与eNOS基因G894T多态性表达有关。[中国当代儿科杂志,2008,10(4):478-480]

基因治疗原发性高血压的新途径:内皮型一氧化氮合成酶CDNA腺病毒载体在人胎肾293细胞的表达

研究内皮型一氧化氮合成酶（endothelialnitric oxide synthase,eNOS)CDNA 腺病毒载体 PadRSVeNOSCDNA 导入在人胎肾 293细胞 ( )中的表达。方法:大量制备及纯化质粒 eNOSCDNA ,将纯化eNOSCDNA 载体通过脂质体转染 293细胞48h 后,应用化学比色法测定293细胞提取物NOS 活性。结果:被转染 293细胞 NOS活性显著提高于未转染293细胞 NOS 活性犤( 0.62±0.03),(0.093±0.01)kU /L,P <0.001犦。结论:PA dRSVeNOSCDNA 导入人胎肾 293细胞是一种能使 NOS 活性显著升高的方法,为基因治疗原发性高血压及肾脏血管性疾病研究提供一条新的途径。

蛋白激酶C-ε在丙泊酚诱导内皮源性一氧化氮合成酶激活中的作用

目的在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)模型中观察丙泊酚对内皮源性一氧化氮合成酶(eNOS)的激活效应,探讨蛋白激酶C-ε(PKC-ε)对药物引起eNOS激活的调节作用。方法以体外培养的人HUVECs 3～5代作为实验对象。用丙泊酚(0、1、5、10、50、100μmol/L)分别处理细胞1和24 h,分析药物激活eNOS的量效关系;用丙泊酚5μmol/L和50μmol/L分别处理细胞0 min、5 min、1 h、6 h和24 h,分析药物激活eNOS的时效关系。细胞随机分为:①正常对照组;②PKC-ε假底物+丙泊酚5μmol/L组;③PKC-ε假底物+丙泊酚50μmol/L组;④单独PKC-ε假底物组;⑤单独丙泊酚50μmol/L组;⑥10%长链脂肪乳组。各组分别处理细胞1和24 h。Western blotting分析PKC-ε、eNOS、P-Ser1177-eNOS蛋白的表达。结果丙泊酚呈剂量、时间依赖性上调P-Ser1177-eNOS蛋白的表达。处理细胞24 h时,与单独丙泊酚50μmol/L组相比,PKC-ε假底物+丙泊酚50μmol/L组P-Ser1177-eNOS蛋白的表达显著降低(P<0.05)。结论丙泊酚呈剂量、时间依赖性诱导eNOS的激活,PKC-ε参与介导药物对eNOS的激活效应。

大鼠实验性乙醇胃粘膜损伤中一氧化氮合成酶和内皮素合量的变化及意义

目的 :探讨一氧化氮和内皮素在急性乙醇胃粘膜损伤中的作用及其相互关系。方法 :采用大鼠乙醇胃粘膜损伤模型 ,测定其胃粘膜内一氧化氮合成酶 (NOS)和内皮素 (ET)含量并观察其胃粘膜病理变化。结果 :随着乙醇作用时间延长和胃粘膜损伤的加重 ,胃粘膜内ET含量显著上升 (P <0 .0 5 ) ,而NOS的含量显著下降 (P <0 .0 5 ) ,两者呈负相关。结论 :胃粘膜内ET释放增加和NOS活性下降参与了急性乙醇胃粘膜损伤的病理生理过程。

胎龄≤34周的汉族早产儿脐带血内皮型一氧化氮合成酶基因多态性及其与早产儿主要并发症的关系研究

目的探讨新乡市汉族早产儿脐带血内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)基因的多态性,并研究这种多态性与早产儿主要并发症的关系。方法选择2014年2月—2016年12月于新乡市中心医院出生的≤34周的早产儿231例为研究对象,母亲分娩时取脐带血,测定eNOS基因3个位点rs2070744、rs1799983和rs61722009的基因型和等位基因。记录早产儿的临床资料,分析eNOS基因多态性与早产儿主要并发症的关系。结果 rs2070744 C、rs1799983 T和rs61722009 a的等位基因频率分别是0.145、0.188和0.159。与Ensembl数据库中已知研究比较,差异无统计学意义(χ~2=0.875,P=0.646;χ~2=3.541,P=0.173)。单因素分析结果示rs2070744 TC+CC基因型和rs1799983GT+TT基因型与支气管肺发育不良有关(crude OR=0.370、0.484,P=0.003、0.030)。多因素Logistic回归分析结果示rs2070744 TC+CC基因型是支气管肺发育不良的独立危险因素(OR=1.875,P=0.020);rs61722009 aa+ab基因型和rs1799983 GT+TT基因型同时存在是早产儿视网膜病变Ⅲ~Ⅴ期的独立危险因素(OR=2.961,P=0.041)。结论 eNOS基因多态性与早产儿主要并发症的发生有关,脐带血测定早产儿eNOS基因多态性有助于评估患儿预后。

复方苦豆子对肾性高血压复合高脂血症大鼠血浆内皮素和一氧化氮合成酶的影响

目的研究复方苦豆子(CK)对肾性高血压复合高脂血症大鼠血压、体质量、肝脏脂质、血浆内皮素(ET)、总一氧化氮合成酶(T-NOS)及结构型一氧化氮合成酶(cNOS)的影响。方法建立二肾一夹(2K1C)肾性高血压复合高脂血症大鼠模型。随机分为5组,模型组;CK高、中、低剂量组;阳性对照组;每组12只。每天灌胃脂肪乳的同时,给予不同的干预措施,连续8周。另取10只为假手术组。给药前及给药1、2、4、8周观察大鼠体质量变化;给药8周测大鼠尾动脉收缩压及心率;检测大鼠ET、T-NOS和cNOS;肝脏脂质(TC、TG)。结果用药2周后,模型组大鼠体质量呈下降趋势,状态较差;各给药组大鼠体质量与模型组比较有所升高,用药4周后升高明显(P<0.05),状态良好;给药8周后,中、高剂量与模型组相比血压明显下降、明显降低血浆ET、肝匀浆中的TC和TG含量、升高T-NOS和cNOS含量(P<0.01)。结论 CK可降低高血压复合高脂血症模型大鼠的血压,调节肝脏脂质,并推测其降压调脂作用机制与内皮系统的调节有关。

内皮型一氧化氮合成酶基因rs3918188位点多态性与汉族原发性高血压的相关性

目的 探究内皮型一氧化氮合成酶基因rs3918188位点多态性与汉族原发性高血压的相关性。方法 研究对象为2013年1月至2017年4月泰州市人民医院收治的262例原发性高血压患者(高血压组)及同期的260例健康体检者(对照组),均采用TaqMan探针法检测一氧化氮合成酶基因rs3918188位点多态性,对比分析不同基因型及等位基因频率的分布情况。结果 两组受检者的eNOS基因rs3918188位点基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律,两组间GG、AG、AA基因型及A、G等位基因频率分布对比无显著差异(P>0.05)。结论 eNOS基因rs3918188位点多态性可能与汉族原发性高血压无明显相关性。

内皮型一氧化氮合成酶基因Glu298Asp多态性与糖尿病肾脏病的关系

目的探讨内皮型一氧化氮合成酶（eNOS）基因Glu298Asp多态性与糖尿病肾脏病（DIcD）的关系。方法采用聚合酶链反应（PCR）后限制性内切酶消化技术，对在我院就诊的326例中国汉族2型糖尿病（T2DM）患者和215名健康体检者进行Glu298Asp基因型分析。根据尿白蛋白排泄率（UAER）水平将T2DM患者分为3组：UAER正常组（DM组）102例，微量白蛋白尿组（MAU组）81例，临床肾病组（DKD组）143例。选择同时期本院健康体检者215名为对照组。用多因素Logistic回归分析法判定DKD的独立危险因素。结果DKD组与对照组Glu298Asp基因型频率分布存在显著性差异（GG72．72％、GT26．57％、TT0．70％比GG83．41％、GT16．10％、TT0．49％，P=0．019），而DM组和MAU组则与对照组无差异（P〉0．05）。Logistic回归分析显示，年龄、平均动脉压、GT基因型是DKD发生的独立危险因素。结论eNOS Glu298Asp基因与中国汉族T2DM患者DKD具有相关性。

先天性心脏病肺动脉高压患者肺组织内皮型一氧化氮合成酶的表达及肺血管重建

目的 探讨内皮型一氧化氮合成酶 (eNOS)在肺动脉高压的发生、发展及肺血管重建中的作用。方法 经心动超声及多普勒检查 ,确定为单纯室间隔缺损患者 10例为对照组 ;室间隔缺损合并肺动脉高压患者共 3 0例 ,为实验组。体外循环建立前取右肺中叶少许肺组织 ,福尔马林固定 ,石蜡包埋 ,SP法免疫组织化学染色 ,并进行灰度扫描。以管壁厚度占血管外径的百分比 (WT % )、管壁面积占血管总面积的百分比 (WA % )反映肺血管壁的增厚程度。方差分析进行组间差异比较。结果 先心病患者随肺动脉压力的增高 ,肺组织eNOS表达呈下降趋势 ,而肺小血管形态发生明显改变 ,WT %、WA %明显增高 (P <0 .0 1)。eNOS的表达与肺高压程度、肺血管形态学改变之间存在负相关性 (P <0 .0 1)。结论 先心病肺高压的eNOS含量低下 ,造成内源性一氧化氮(NO)生成减少 ,在肺动脉高压的发生。

Caveolin-1与内皮型一氧化氮合成酶在门静脉高压症性血管病变中的表达

目的检测肝硬化门静脉高压症病人的脾血管中小凹蛋白caveolin-1、内皮型一氧化氮合成酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的mRNA及蛋白表达水平的变化,探讨caveolin-1的表达对eNOS的影响。方法逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测27例肝硬化门静脉高压症病人脾静脉组织和20例脾外伤病人正常脾静脉血管中caveolin-1和eNOS的mRNA;Western Blot检测caveolin-1和eNOS的蛋白表达水平变化。结果肝硬化门静脉高压症组脾静脉Caveolin-1 mRNA与对照组脾静脉组织表达分别为(0.73±0.18)、(0.38±0.12),两组比较差异有显著性(p<0.05);肝硬化门静脉高压症组脾静脉eNOS mRNA为(0.23±0.11),显著低于对照组内脾静脉组织eNOS mRNA的表达(0.47±0.15)(p<0.05)。Western Blot检测caveolin-1在肝硬化门静脉高压症组脾静脉中较正常脾静脉中表达明显增强;eNOS在肝硬化门静脉高压症组脾静脉中呈低水平表达,较正常脾静脉中表达明显减少。结论肝硬化门静脉高压症组脾静脉中caveolin-1的过量表达及eNOS表达降低,导致NO合成减少,脾静脉血管阻力持续增加,及caveolin-1致静脉血管病理改变作用,共同作用致脾静脉出现对门静脉高压失代偿改变。

甲基强的松龙对大鼠颅脑损伤后一氧化氮合成酶活性和内皮素的影响

目的观察甲基强的松龙对大鼠颅脑损伤后血脑组织中NOS和内皮素含量的影响,并探讨其作用机制.方法将45只SD大鼠随机分为3组,采用骨窗形成后硬膜外打击法造成鼠脑挫裂伤模型,正常组5只,麻醉后,只行开颅手术,不作头颅打击;治疗组大鼠致伤后即刻腹腔内注射30mg/kg甲基强的松龙,对照组则即刻腹腔内注射30mg/kg生理盐水.对照组和治疗组大鼠分别在伤后1h、6h、12h、24h时间点断头取脑,对大鼠脑外伤后脑组织中NOS和内皮素含量进行检测.结果①大鼠脑皮质中的NOS活性在伤后1h后较对照组升高显著(p<0.01),6h开始下降,12～24h降至基础水平.甲基强的松龙治疗组在伤后1h、6hNOS活性较损伤组明显降低(p<0.01,p<0.05).②大鼠脑皮质中的内皮素在伤后1～24h后较对照组升高显著(p<0.01).甲基强的松龙治疗组在伤后1～24h内皮素较损伤组明显降低(p<0.05).结论颅脑损伤后,受损脑组织中NOS和内皮素升高,甲基强的松龙可通过抑制损伤后NOS和内皮素,起到保护创伤神经元的作用.

内皮型一氧化氮合成酶基因多态性与原发性高血压的相关性

高血压是最常见的慢性病,也是心脑血管病最主要的危险因素,目前其发病率呈上升趋势[1,2].原发性高血压（essential hypertension,EH）是受遗传因素与环境因素共同影响的慢性疾病.近年来研究表明,遗传因素在原发性高血压的发生、发展中起着更重要的作用.内皮型一氧化氮合酶（endothelium nitrogen monoxide synthase,eNOS）是高血压的易感因素,它的基因编码所产生的一氧化氮（nitrc oxide,NO）具有调节血管张力、血管重塑、维持血管内皮的完整性等作用.随着血管生物学与临床医学领域联合研究的不断深入,在心血管疾病中研究调查调控高血压基因已成为热点.国内外研究表明,eNOS基因在原发性高血压中发挥重要作用.本文对eNOS基因G894T、T786C和27bpVNTR的多态性影响EH的机制及与EH相关性最新研究进展作一综述.

回转模拟失重对静脉内皮细胞血管生成能力的影响及内皮型一氧化氮合成酶的作用

目的 观察回转器模拟失重对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC-C)血管生成能力的影响,并分析探讨可能涉及的关键信号分子内皮型一氧化氮合成酶(endothelial nitricoxide synthetase,eNOS)的作用。方法体外培养HUVEC-C,随机分为回转模拟失重组、1 G静止对照组及回转+抑制剂组,选用内皮型一氧化氮合成酶的特异性抑制剂L-NAME(N-nitro-L-arginine methyl es-ter hydrochloride)。Matrigel胶小管形成实验观察不同处理组HUVEC-C血管生成能力的变化情况。RT-PCR和Western blot分别检测模拟失重前、后HUVEC-C中eNOS mRNA和蛋白的表达变化。结果24 h模拟失重使HUVEC-C的血管生成能力较对照组明显增强(P<0.01),且这种增强效应可以被L-NAME所抑制。模拟失重24 h后,HUVEC-C中eNOS mRNA和蛋白的表达均显著高于对照组(P<0.05)。结论回转模拟失重可以诱导HUVEC-C血管生成能力增强,其发生机制与eNOS表达上调有关。

运动训练对高血压大鼠认知功能及脑内血管内皮一氧化氮合成酶的影响

目的:研究运动训练对高血压大鼠认知功能及脑内血管内皮一氧化氮合成酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的影响。方法:将30只3月龄自发性高血压易卒中(stroke-prone spontaneously hypertensive, SHRSP)大鼠随机分为对照组(SHRSP-Con)和训练组(SHRSP-PE),采用相同周龄的Wistar Kyoto(WKY)大鼠15只作为正常血压对照组(WKY-Con)。SHRSP-PE组给予持续4个月的跑笼训练;SHRSP-Con组和WKY-Con组不予任何针对性训练。各组大鼠在3及7月龄分别测血压、认知功能,观察皮质及海马的eNOS、β-secretase(BACE1)、β-amyloid(Aβ)的表达。结果:3月龄SHRSP大鼠的血压明显高于WKY大鼠,差异有显著性意义(P<0.05),各组大鼠认知功能无明显差异。7月龄SHRSP-Con组与WKY组比较,血压明显升高,认知功能减退,脑内eNOS表达减少、BACE1表达增加及Aβ沉积增加,差异有显著性意义(P<0.05)。与SHRSP-Con组相比,4个月的运动训练可以明显降低血压、改善认知功能且可以增加eNOS表达,减少BACE1和Aβ的表达,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:运动训练能够改善慢性高血压大鼠的认知功能,其机制可能与其促进脑内eNOS表达,进而减少BACE1表达和Aβ沉积有关。

内皮素和一氧化氮合成酶在家兔动脉粥样硬化斑块中的表达

用免疫组织化学和原位杂交等方法观察了内皮素和一氧化氮合成酶在家兔动脉粥样硬化斑块中的合成和表达。结果是，在动脉粥样硬化斑块内增生的平滑肌细胞和巨噬细胞中，内皮素合成较正常者增多，而一氧化氨合成酶的合成却明显减少；内皮素ｍＲＮＡ转录显著增加，而一氧化氮合成酶ｍＲＮＡ转录明显减少或消失。提示在动脉血管平滑肌细胞中，二者的平衡失调可能参与了动脉粥样硬化的发生和发展过程。

一氧化氮、一氧化氮合成酶在免疫性血管炎致动脉粥样硬化中的作用

目的探讨一氧化氮(NO)、一氧化氮合成酶(NOS)在免疫性血管炎致动脉粥样硬化(AS)中的作用。方法4周龄雄性大耳兔24只分为3组。A组:基础饲料喂养对照组8只;B组:胆固醇喂饲组8只;C组:10%牛血清清蛋白注射并喂饲胆固醇饲料8只。实验满4周,A、B、C3组分别取心脏做主动脉组织病理学检查,主动脉血管弹力纤维染色及NOS组织化学染色,测血清NO和血浆血管内皮素(ET)含量。结果B组出现轻度AS,内弹力膜不完整;C组出现严重AS,内弹力膜断裂。3组NOS均呈阳性着色反应,C组阳性着色区域较A、B组明显扩大。C组与B组比较,其脂质斑块面积(PA)增大、小动脉粥样硬化发生率(IA)增高、NOS平均光密度(A)增高,血浆ET含量升高,血清NO含量降低,均有显著差异(P<0.01)。结论免疫性血管炎为AS发病的危险因素,NO/ET平衡失调,NOS活性异常可能参与免疫性血管炎致AS形成的病理过程。

参芎葡萄糖注射液对脊髓损伤后一氧化氮合成酶和血管内皮生长因子表达及运动功能恢复的影响

目的:研究参芎葡萄糖注射液对大鼠脊髓损伤(SCI)后诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达变化,探讨参芎葡萄糖注射液对急性脊髓损伤后运动功能恢复的影响和可能机制。方法:用改良Allen法制作大鼠T12脊髓损伤模型60只,随机分为对照组(30只)和药物组(30只)。术后第1、3、7、14、21天采用BBB评分和斜板试验对大鼠急性脊髓损伤后的运动功能进行评估,病理学检查观察脊髓损伤后病理改变,免疫组织化学方法和免疫印迹方法观察损伤脊髓iNOS、VEGF的表达变化,并进行比较分析。结果:术后各时相点BBB评分和斜板试验,除第1天外,第3、7、14、21天药物组明显高于对照组;药物组各时相点的病理改变明显较轻,药物组各时相点iNOS阳性表达均明显低于对照组,而VEGF的阳性表达均明显高于对照组,两组差异有显著性意义(P<0.05)。结论:脊髓损伤后应用参芎葡萄糖注射液可以抑制iNOS的表达,增强VEGF的表达,抑制脊髓损伤区iNOS的表达和上调脊髓损伤区VEGF的表达可能是参芎葡萄糖注射液减轻继发脊髓损伤,促进损伤脊髓功能恢复的机制之一。

内皮素对血管平滑肌细胞中一氧化氮合成酶基因表达的影响

应用反转录－聚合酶链式反应（ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴ－ＰＣＲ）方法，测定出一氧化氮合成酶（ＮｉｔｒｉｃＯｘｉｄｅＳｙｎｔｈａｓｅ，ＮＯＳ）ｍＲＮＡ不仅在心血管系统细胞中广泛存在，并且发现内皮素可以促进血管平滑肌细胞中ＮＯＳｍＲＮＡ的表达（＋３４．８％），增高血管平滑肌细胞中ＮＯＳ酶活性（＋７４％）。结果提示，由内皮素引起的血管平滑肌细胞中ＮＯＳ基因表达和ＮＯＳ活性的增加，可能是高血压中的一个重要的负反馈因素。

高糖对内皮型一氧化氮合成酶的表达及功能的影响

目的 :研究高糖对内皮型一氧化氮合成酶的基因和蛋白表达及其功能的影响。方法 :将分离的小牛主动脉内皮细胞在含有不同浓度右旋葡萄糖的DMEM中培养 2 4小时。内皮型一氧化氮合成酶的基因和蛋白表达分别以RT -PCR和WesternBlotting方法进行分析 ,其产物一氧化氮以高效液相层析法 (HPLC)测定。结果 :与低糖(5 6mM)相比高糖 (12 5mM ,2 5mM)可以刺激内皮型一氧化氮合成酶的基因和蛋白表达 ,并伴有一氧化氮的浓度降低。结论 :高糖可致内皮型一氧化氮合成酶的基因和蛋白表达增加 ,并可能导致其功能障碍。

冷应激溃疡大鼠下丘脑和肾上腺一氧化氮合成酶2与内皮素-1表达及针刺保护机制的研究

目的观察针刺足三里穴对急性胃溃疡的保护效应 ,并探讨其作用机理。方法将SD雄性大鼠随机分为正常对照组、单纯应激组、针刺预防应激组 ,应用胃粘膜溃疡指数的计算和RT PCR的方法研究针刺足三里对大鼠的冷应激性溃疡的保护和下丘脑及肾上腺一氧化氮合成酶 (NOS) 2和内皮素 (ET) 1的表达情况 ,经图像分析系统照相并进行半定量。结果针刺足三里穴可以明显减少冷应激造成的溃疡指数。下丘脑NOS2和ET 1均参与了冷应激溃疡病理过程 ,针刺足三里穴可以下调其表达。在应激过程中 ,肾上腺中并无NOS2和ET 1的病理性表达。结论针刺对冷应激溃疡具有保护作用 ,该种保护作用是通过对抑制下丘脑NOS2和ET 1的病理性表达来实现的 ,NOS2和ET 1在肾上腺中不参与应激过程。