重组腺病毒rAdCDglyES体内抑瘤作用的研究

目的:探讨重组腺病毒rAdCDglyES对肺癌的体内抑、杀瘤作用。方法:建立近交纯系C57BL小鼠Lewis肺癌模型;于小鼠荷瘤部位注射定量的重组腺病毒rAdCDglyES并给予5-氟胞嘧啶。通过观测小鼠瘤体大小、重量,中位生存期,及组织病理学改变判定疗效。结果:对荷瘤小鼠连续10d的治疗观测后发现,实验组与对照组之间平均瘤重有显著性差异(P<0.05);对荷瘤小鼠的中位生存期比较发现实验组较对照组天数有显著性差异(P<0.05);对实验组和对照组肿瘤进行HE染色后病理检测,镜下所见,含ES基因的实验组小鼠瘤组织血管数明显少于对照组,仅为对照组的53.85%(14/26)。结论:rAdCDglyES/5-FC对C57BL小鼠的Lewis肺癌有明显的抑杀瘤作用。

骨肉瘤患者肿瘤伴随抑制现象的临床研究

目的探讨骨肉瘤患者的肿瘤伴随抑制现象(CTR)、预测肺转移的高危患者,并对其进行抗肿瘤血管生成因子的治疗提供依据。方法采用ELISA法检测骨肉瘤患者手术前后1周血清中内皮抑素(ES)、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的水平。术后每月摄胸部X线片和每3个月行胸部CT扫描,以了解是否有早期肺转移。比较出现肺转移组患者与未出现肺转移组患者手术前后ES、VEGF、bFGF和TGF-β1变化值的临床意义。结果在肺转移组8例与无肺转移组9例手术前后血清中ES变化值和VEGF升高值的差异有显著性(P均<0.05)。两组手术前后血清TGF-β1、bFGF变化值的差异无显著性(P均<0.05)。结论本组骨肉瘤患者可能存在肿瘤伴随抑制现象。血清VEGF、ES手术前后的变化值有望成为骨肉瘤患者术后早期筛查肺转移的预测因子及判断预后的指标之一。

改良内皮抑素对人脐静脉内皮细胞抑制作用的实验研究

目的:探讨改良内皮抑素(RGDRGD-ES)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的抑制作用,摸索RGDRGD-ES对HUVEC细胞抑制作用的相对最佳作用浓度和时间。方法:通过快速定点诱变PCR方法获得含有RGDRGD膜序的改良人内皮抑素基因,并构建其原核表达载体。表达、纯化改良内皮抑素(RGDRGD-ES),运用MTT法和流式细胞仪检测RGDRGD-ES对人脐静脉内皮细胞的抑制作用。结果:1.诱变了ES基因,获得了改良的RGDRGD-ES基因,并成功构建其原核表达载体。2.获得了RGDRGD-ES蛋白。3.改良的RGDRGD-ES能够有效抑制人脐静脉内皮细胞的生长(P<0.01);抑制率随着药物浓度(10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml)的增加和作用时间(24 h、48 h、72 h)的延长而逐渐增加,具有浓度和时间依赖性(P<0.01);而30μg/ml与40μg/ml、50μg/ml组间、72 h与96 h组间无明显差异(P>0.05)。4.细胞凋亡率(作用24 h)具有药物浓度(10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml)依赖性(P<0.01),30μg/ml与40μg/ml、50μg/ml组间凋亡率无明显差异(P>0.05)。结论:成功构建了改良RGDRGD-ES基因的原核表达载体,RGDRGD-ES蛋白在30μg/ml浓度作用72小时条件下能够有效抑制人脐静脉内皮细胞的生长,改良内皮抑素(RGDRGD-ES)对HUVEC的抑制作用较ES明显提高。

氯吡格雷对乙酸诱导大鼠胃溃疡愈合的影响及机制

目的明确氯吡格雷对实验性大鼠胃溃疡愈合的影响,并从微血管形成的角度探讨其延缓胃溃疡愈合的机制。方法以乙酸性大鼠胃溃疡模型为基础,将22只大鼠分为模型组(n=6)、氯吡格雷组(n=8)和生理盐水组(n=8),观察氯吡格雷对胃溃疡愈合的影响,及对溃疡底部微血管密度(microvessel density,MVD)、胃黏膜内皮抑素(endostatin,ES)及血管内皮生长因子A165(vascular endothelial growth factor A165,VEGF-A165)表达的影响。结果制模术后第10天,氯吡格雷组和生理盐水组溃疡面积分别为(11±3.07)mm2、(7±1.85)mm2,差异有统计学意义(P=0.023 0)。氯吡格雷组溃疡底部MVD显著低于生理盐水组(P=0.011 4)。氯吡格雷组胃黏膜VEGF-A165含量显著低于生理盐水组(P<0.01),ES含量显著高于生理盐水组(P<0.01)。溃疡底部MVD与胃黏膜VEGF-A165含量正相关(r=0.688 8、P=0.003 2),与胃黏膜ES含量负相关(r=-0.767 1、P=0.000 5)。结论氯吡格雷可显著延缓乙酸性大鼠胃溃疡愈合,推测可能是通过调节胃黏膜VEGF-A165及ES的表达以抑制溃疡底部的微血管形成,从而使损伤黏膜修复受阻。

结直肠癌转移模型裸鼠血管因子变化及健脾消癌方干预作用

目的：探讨结直肠癌裸鼠转移模型组织中血管内皮生长因子（VEGF）,内皮抑素（ES）,血管生成素（ANG）,血管抑素（AS）,基质金属蛋白酶-9（MMP-9）,组织金属蛋白酶抑制物（TIMP）变化及健脾消癌方干预的机制。方法：在BALB/C-nu裸鼠盲肠内注射HCT116细胞50μL,造裸鼠结直肠癌转移模型。将模型裸鼠分为模型组、健脾消癌方组（40 g·kg-1）,另设空白组。所有动物灌胃给予相应药物4周后,蛋白免疫印迹法（Western blot）测定裸鼠结肠、肝、肺及盲肠肿瘤组织中相关血管因子蛋白表达。结果：HCT116结直肠癌模型裸鼠的结肠、肝、肺与肿瘤组织的VEGF,MMP-9,TIMP明显升高（P〈0.05,P〈0.01）;ANG在结肠、肝与肿瘤组织也明显升高（P〈0.05,P〈0.01）;ES在结肠、肺与肿瘤组织显著降低,AS在肝、肺及肿瘤组织显著降低（P〈0.05）。健脾消癌方组的结肠MMP-9,肿瘤TIMP,肝组织ANG,MMP-9及肺组织VEGF明显降低,肺组织AS明显升高（P〈0.05）。结论：HCT116结直肠癌模型裸鼠VEGF,ANG,MMP-9在结肠、肝、肺及肿瘤组织中蛋白表达升高,ES,AS降低,TIMP升高;健脾消癌方能比较全面地改善机体抗肿瘤血管生成的能力。