支气管哮喘患者血清对内皮穿越模型中单核细胞分化为树突状细胞的作用

目的探讨支气管哮喘（简称哮喘）患者血清和正常血清对内皮穿越模型中单核细胞向树突状细胞（DC）分化和功能的作用及其机制。方法在江苏省哮喘联盟数据库中选择2008年5月至2009年5月轻一中度哮喘患者12例，募集匹配的健康志愿者12名，常规分离血清和外周血单个核细胞，免疫磁珠法获得单核细胞。选择健康产妇5名，胰酶消化法获得人脐静脉内皮细胞（第2代），培养融合至内皮细胞单层。在内皮细胞上方加入单核细胞及哮喘血清（哮喘组）或正常血清（对照组），构建内皮穿越模型。硝酸银染色法观察单核细胞来源的树突状细胞（MDDC）迁移行为。于48h收集MDDC，扫描电镜观察形态学特征，电泳迁移率实验检测核因子KB（NF-KB）活性，流式细胞术、ELISA和混合淋巴细胞反应分别检测其表型和功能。结果（1）在内皮穿越模型中，单核细胞2h后发生正向穿越，48h后发生逆向穿越并分化为DC。（2）与穿越前单核细胞[CD14（81±6）％、人白细胞抗原DR（HLA—DR）（24±5）％、CD80（2．8±2．0）％、CD86（14±4）％、CD83（0．9±0．8）％]比较，对照组MDDC的CD14[（20±5）％]显著下降（F=49．01，P〈0．05）、HLA-DR、CD80、CD86和CD83[（43±4）％、（17．9±3．5）％、（43±11）％和（6．7±1．8）％]均显著增高（均P〈0．05），但CD83仍较低，为未成熟DC。（3）与对照组比较，哮喘组MDDC的HLA—DR和CD。[（55±6）％和（59±12）％]相仿（F值分别为15．29和35．97，均P〉0．05）、CD80和CD83[（49．7±10．2）％和（30．2±6．8）％]显著增高（F值分别为34．Ol和20．68，均P〈0．05），为成熟DC。并且，哮喘组MDDC呈典型的树枝样突起，其NF—KB活性、白细胞介素-12pTO水平和T细胞增殖作用[（100±11）％、（568±43）ng／L和（2033±198）cpm]较对照组[（12±3）％、（220±35）ng／L和（952±64）cpm]显著增高（均P〈0．05）。结论哮喘血清可诱导内皮穿越模型中单核细胞向DC异常分化成熟，并与NF—KB过度激活有关。该模型为剖析哮喘免疫学发病机制和筛选新型抗哮喘药物建立了新的体外实验平台。

内皮细胞穿越模型中系统性红斑狼疮患者树突状细胞分化及功能状态的初步研究

目的利用已经成功构建的内皮细胞穿越模型研究系统性红斑狼疮(systemiclupusery-thematosus,SLE)患者的单核细胞起源的树突状细胞的分化和功能状态(膜表面分子和刺激功能及细胞因子分泌等)。方法构建内皮细胞穿越模型;分别诱导正常人单核细胞和SLE患者单核细胞在模型中分化为树突状细胞(dendriticcells,DCs);电子显微镜观察其形态特征;流式细胞术检测其表型[人类白细胞抗原(HLA)-DR、CD80、CD86],混合淋巴细胞反应检测DCs刺激异源T细胞活化的能力,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测DCs分泌的干扰素(IFN)-!。结果正常人和SLE患者单核细胞在内皮细胞穿越模型中能分化成树突状细胞形态。正常人单核细胞来源的DCs(normalMonocyte-derivedDCs,NMDCs)和SLE患者单核细胞来源的DCs(SLEMonocyte-derivedDCs,SMDCs)都高表达HLA-DR;SMDCs的协同刺激分子CD80和CD86的表达水平明显高于NMDCs;刺激异源T淋巴细胞增殖的能力,SMDCs和NMDCs差异无统计学意义;SMDCs分泌IFN-!的水平明显低于NMDCs。结论SLE患者单核细胞异常分化为树突状细胞,这种异常涉及树突状细胞协同刺激分子CD80和CD86的表达升高以及细胞因子IFN-!分泌降低。