大气细颗粒物PM_(2.5)对人微血管内皮细胞坏死性凋亡的影响

[目的]观察大气细颗粒物PM_(2.5)对体外培养血管内皮细胞坏死性凋亡的影响。[方法]以人微血管内皮细胞株(HMEC-1)为研究对象,应用系列浓度PM_(2.5)处理24 h后,CCK-8检测HMEC-1细胞活力,试剂盒法检测培养上清液乳酸脱氢酶(LDH)的活性,Western blot法检测坏死性凋亡相关蛋白RIPK3和MLKL的表达及磷酸化水平,Transwell法检测HMEC-1细胞通透性改变。采用坏死性凋亡抑制剂(Ne-crostatin-1)处理后,观察PM_(2.5)对HMEC-1坏死性凋亡、细胞损伤和通透性的影响。[结果]PM_(2.5)可呈剂量依赖性抑制HMEC-1的增殖,并增加培养上清液中LDH活性、RIPK3和MLKL的蛋白表达以及其磷酸化水平。Transwell检测结果表明PM_(2.5)可增加单层血管内皮细胞通透性,而坏死性凋亡抑制剂Necrostatin-1预处理可显著性抑制PM_(2.5)应激下血管内皮细胞RIPK3和MLKL的蛋白表达及磷酸化水平,降低上清液LDH活性和单层血管内皮细胞通透性。[结论]PM_(2.5)可诱导HMEC-1坏死性凋亡,损伤血管内皮完整性。

整合素和钙通道在人与小鼠钩端螺旋体主要宿主细胞上分布的差异

目的:了解人和小鼠钩端螺旋体(简称钩体)主要宿主细胞上整合素与钙通道表达情况及其差异。方法:采用免疫荧光和Western blot法,检测人单核细胞株THP-1、小鼠单核!巨噬样细胞株J774A.1、人脐静脉内皮细胞株HUVEC、小鼠血管内皮细胞株EOMA、人肝细胞株L-02、小鼠肝细胞株Hepa1-6、人肾小管上皮细胞株HEK-293、小鼠肾小球系膜上皮细胞株SV40-MES13、小鼠肾成纤维细胞株NIH/3T3、人及小鼠血小板的β1、β2、β3类整合素分子以及Cav3.1、Cav3.2、Cav3.3、Cav2.3电压门控型钙通道蛋白和P2X1、P2X2、P2X3、P2X4、P2X5、P2X6、P2X7受体门控型钙通道蛋白的分布差异。结果:整合素β1分子表达于J774A.1、THP-1、HUVEC、EOMA、L-02、Hepa1-6、HEK-239细胞以及人和小鼠血小板膜表面,β2分子表达于J774A.1、THP-1、HUVEC、EOMA和NIH-3T3细胞膜表面,β3分子表达于J774A.1、THP-1、HUVEC、EOMA、Hepa1-6、HEK-239、NIH-3T3细胞以及人和小鼠血小板膜表面。ATP依赖性受体门控型钙通道蛋白P2X1表达于人和小鼠血小板膜表面,P2X5表达于J774A.1、THP-1、L-02、Hepa1-6、HEK-239和HUVEC细胞膜表面,但未检测出上述细胞或血小板表达其它钙通道蛋白。结论:不同种类整合素分子和钙通道蛋白在钩体主要宿主细胞上表达明显不同,这可能与钩体对不同组织细胞致病性差异有关。

重组人血管内皮抑素联合化疗对晚期乳腺癌循环血管内皮细胞和血管内皮细胞生长因子的影响

目的 分析晚期乳腺癌患者治疗前后外周血中血管内皮细胞生长因子（VEGF）及循环血管内皮细胞（CECs）的变化,探讨VEGF及CECs在乳腺癌治疗疗效评估中的应用价值.方法 采用重组人血管内皮抑素（恩度）联合多西紫杉醇（治疗组）及多西紫杉醇（对照组）治疗晚期乳腺癌64例,ELISA（酶联免疫吸附实验）检测治疗前后外周血VEGF的水平,流式细胞仪检测外周血CECs水平.结果 63例可评价疗效及不良反应.治疗组临床受益率（CBR）高于对照组（P＜0.05）;治疗组总生存时间（OS）延长（P＜0.05）.治疗组患者治疗后血清VEGF和CECs水平较治疗前显著下降（P=0.01;P=0.049）.不良反应方面,治疗组心电图异常发生率较对照组高,但差异无统计学意义（18.2％ vs 6.7％,P＞0.05）,其他相似.结论 恩度与化疗联合治疗晚期乳腺癌优于单纯化疗,VEGF和CECs的水平可评估晚期乳腺癌抗血管生成治疗疗效.

川崎病患儿内脂素和血管内皮细胞钙黏蛋白的含量变化

目的 观察川崎病（KD）急性期患儿血清内脂素（visfatin）和血管内皮细胞钙黏蛋白（VE-cadherin）水平变化,探讨其与川崎病的相关性及临床意义.方法 90例川崎病患儿（KD组）与30例健康体检儿童（对照组）,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清内脂素和VE-cadherin含量,并结合临床表现进行分析.结果 川崎病组血清中VE-cadherin[（5.03±1.06）mg/L]含量明显高于对照组[（2.86±1.02）mg/L],内脂素[（32.35±4.82）μg/L]含量明显高于对照组[（16.83±4.36）μg/L],两组之比较差异均有统计学意义（t=15.23,12.47,P＜0.01）.川崎病组中冠状动脉损伤患儿血清VE-cadherin[（6.14±1.23）mg/L]含量明显高于冠状动脉正常患儿[（4.02±1.01）mg/L],内脂素[（36.61±5.22）μg/L]含量明显高于冠状动脉正常患儿[（28.16±4.67）μg/L],两组之间比较差异均有统计学意义（t=8.38,7.16,P＜0.01）;川崎病组血清内脂素和VE-cadherin含量呈正相关（r=0.65,P＜0.05）.结论 内脂素和VE-cadherin在川崎病急性期尤其伴冠状动脉病变时明显升高,可作为判断川崎病冠状动脉损伤的参考指标.

不同大小剪切力对血管内皮细胞IL-8及ET-1表达的影响

目的探讨不同大小剪切力对血管内皮细胞白介素-8(IL-8)及内皮素-1(ET-1)表达的影响。方法采用脐静脉内皮细胞株(ECV-304)作为研究细胞,使用自制的剪切力调控装置调节出5 dyne/cm^2和10 dyne/cm^2的剪切力,其中5 dyne/cm^2的剪切力作为低剪切力组,10 dyne/cm^2的剪切力作为高剪切力组,另选用未施加剪切力的ECV-304作为对照组。分析三组在五个时间点(30、60、120、300、420 min)的IL-8和ET-1水平,并采用Pearson相关分析方法分析IL-8和ET-1水平的相关性。结果三组的IL-8水平一直呈上升趋势。在30、60、120 min三个时间点,三组的IL-8水平整体比较差异无统计学意义(P>0.05)。在300、420 min两个时间点,低剪切力组的IL-8水平高于对照组和高剪切力组,高剪切力组的IL-8水平高于对照组(P<0.05)。对照组和低剪切力组的ET-1水平一直呈上升趋势,高剪切力组的JET-1水平在前120 min持续上升,但在此后开始持续下降。在30、60、120 min三个时间点,三组的ET-1水平整体比较差异具有统计学意义(P<0.05),高剪切力组在30、60、120 min三个时间点的ET-1水平均高于对照组,在30、60 min两个时间点的ET-1水平高于低剪切力组(P<0.05);低剪切力组在60、120 min两个时间点的ET-1水平高于对照组(P<0.05);在300、420 min两个时间点,三组的ET-1水平整体比较差异无统计学意义(P>0.05)。Pearson相关分析显示,IL-8与ET-1的表达存在正相关关系(r=0.384,P=0.031)。结论剪切力可对血管内皮细胞IL-8、ET-1的表达造成影响,其中5 dyne/cm^2的剪切力能够更高效地增加IL-8水平,10 dyne/cm^2的剪切力能够更明显地增加ET-1水平,但可能会对血管内皮细胞造成损伤。

低分子肝素对脓毒症大鼠腹主动脉内皮细胞蛋白C受体和蛋白酶活化受体1表达的影响

目的观察低分子肝素（LMWH）对脓毒症大鼠腹主动脉内皮细胞（VEC）蛋白C受体（EPCR）和蛋白酶活化受体1（PARl）表达的影响。方法采用组织贴块法培养24只Wister大鼠腹主动脉VEC，1：3传代至第4代，分为对照组（n=6）、脓毒症组（LPS1μg／ml，n=6）、LMWH组（LPS1μg/ml＋LMWH5μg/ml，n=6）。分别在第1、3、5天采用流式细胞术（FCM）检测VEC表面的EPCR和PARl的表达。结果脓毒症组EPCR和PARl的表达各时间点均较对照组有明显下降（P〈0．05或P〈0．01），以第5天最为明显（26．53±7．21VS39．26±2．62，q=6．45，P〈0．01：53．214±15．10VS86．54±11．34，q=6．94，P〈0．01）。LMWH组EPCR和PARl的表达各时间点均高于脓毒症组（P〈0．05）；与对照组比较，EPCR在第1天仍有明显降低（40．86±1．63VS45．41.1±2．82，q=3．51，P〈0．05），但第3、5天接近对照组水平（41．20±3．32VS42．83±2．66，P〉0．05；39．23±3．33VS39．26±2．62，P〉0．05），PARl各时问点与对照组比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论LMWH能有效改善脓毒症内皮细胞EPCR和PARl表达抑制的状态。

血内皮祖细胞与一氧化氮在慢性阻塞性肺疾病并发肺动脉高压患者中的变化及意义

目的 观察慢性阻塞性肺疾病（COPD）并发肺动脉高压（PAH）病人外周血内皮祖细胞（EPCs）数量和功能及一氧化氮的变化,并探讨其在COPD并PAH发病中的作用.方法 选择本院住院的COPD病人60例,其中COPD并PAH（COPD＋PAH组）病人30例,COPD非PAH病人30例（COPD组）;正常对照20例（非COPD组）.用密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被培养板,培养7d后对贴壁细胞进行细胞化学分析.通过集落形成试验、改良的Boyden小室和黏附能力测定实验计数EPC的数量、测定EPC的迁移和黏附能力.用硝酸还原酶法比色检测入选患者血浆一氧化氮（NO）水平.结果 和正常对照组[（24.9±4.1）克隆形成数]及COPD组[（21.9±3.9）克隆形成数]相比,COPD＋PAH组[（14.2±3.5）克隆形成数]外周血EPC数量明显减少,黏附和迁移能力显著降低（F≥9.15,q≥3.49,P〈0.05）,且EPC数量及黏附、迁移能力与肺动脉压力呈负相关（r=-0.79、-0.85、-0.89,P〈0.01）.COPD＋PAH组患者NO水平[（43.6±4.8）ng/ml]明显低于对照组[（67.17±4.9）ng/ml]（P〈0.01）,NO浓度与循环EPCs数量及迁移能力呈正相关（r=0.77、0.71,P〈0.01）,与循环EPCs黏附能力无关.结论 COPD病人PAH的发生可能与循环EPCs数量减少、迁移和黏附能力降低有关,这种变化可能与血浆NO水平减少有关.

促甲状腺激素对人微血管内皮细胞一氧化氮合酶的影响及其机制研究

目的探讨在人微血管内皮细胞(HMEC-1)体外培养过程中,促甲状腺激素(TSH)对内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响及其机制。方法分别以不同浓度TSH(0、10、100 mIU/ml)干预HMEC-1,应用qPCR法检测eNOS mRNA的表达水平,Western blotting法检测eNOS、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化细胞外信号调节激酶(P-ERK)、细胞外信号调节激酶(ERK)蛋白的水平。结果 (1)TSH可抑制HMEC-1中eNOS的表达,且呈剂量依赖性(P<0.05);(2)TSH可促进AKT、ERK的磷酸化(P<0.05)。结论促甲状腺激素可能通过激活AKT、ERK信号通路抑制人微血管内皮细胞一氧化氮合酶的表达。