组织工程心脏瓣叶体外实验研究——内皮细胞分离及鉴定

目的 探讨组织工程心脏瓣叶种子细胞———内皮细胞的体外分离、培养及鉴定。方法 杂种猪 4头 ,取整段主动脉。使用 0 .2 5 %Ⅱ型胶原酶消化分离血管内皮细胞。使用M199培养、扩增内皮细胞。使用倒置显微镜、免疫组化方法及透射电子显微镜对内皮细胞进行鉴定。结果 倒置显微镜结果显示 :原代细胞及经传代培养后的细胞 ,呈现典型的内皮细胞特征 ,呈铺路石样改变。免疫组化检测示内皮细胞Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应。透射电镜显示 :细胞间存在上皮细胞特有紧密连接 ,未发现内皮细胞Webel Palade小体结构。内皮细胞经 3～ 4次传代 ,细胞数量可增殖达到 6× 10 6。结论 使用胶原酶消化法可有效分离内皮细胞 ,种子细胞经体外培养扩增达到一定数量 。