内皮细胞乙酰胆碱靶标不同于M受体的药理学特征

目的 研究内皮细胞乙酰胆碱靶标与M受体药理学特征的差异。方法 采用离体血管环实验方法,观察抗M_3受体的单克隆抗体和M受体激动剂毛果芸香碱对乙酰胆碱引起的内皮依赖性舒张血管作用的影响。结果 毛果芸香碱能够剂量依赖性拮抗乙酰胆碱诱导的内皮依赖性血管舒张作用,其拮抗性质为非竞争性拮抗;抗M_3受体的单克隆抗体不影响乙酰胆碱诱发的内皮依赖性舒张血管作用,但能拮抗乙酰胆碱诱发的离休肠肌收缩作用。结论 内皮细胞乙酰胆碱靶标的药理学特征不同于经典M受体。

阻断血管内皮细胞乙酰胆碱靶标功能对血管内皮细胞结构和功能的影响

目的 :研究阻断血管内皮细胞乙酰胆碱靶标(ETA)功能对血管内皮细胞结构和功能的影响。方法 :以山莨菪碱为工具药 ,喂食兔 3mon后急性处死 ,剖腹取主动脉 ,HE及ET +VG染色光镜观察主动脉的组织学改变 ,电镜观察血管内皮细胞的超微结构改变。同时取胸主动脉、肺动脉、颈动脉、肾动脉和股动脉 ,进行离体血管功能实验。结果 :生理状态下 ,长期给予兔山莨菪碱 ,血管内皮细胞结构受损 ,光镜下可见内皮细胞垂直附着在内弹力板上 ,电镜下可见内皮细胞呈网眼状损伤 ,有些内皮细胞即将脱落 ,线粒体肿胀。离体血管环实验研究发现ETA介导的内皮依赖性血管舒张反应显著减弱。结论 :生理状态下 ,反复阻断ETA ,可使内皮细胞结构和功能受损 。

激活血管内皮细胞乙酰胆碱作用靶标的抗血栓作用及其分子机制

目的 在角叉菜胶诱发的小鼠尾动脉血栓模型上 ,研究激活血管内皮细胞乙酰胆碱作用靶标对血栓形成的影响并探讨其可能的分子机制。方法 比较既可激活血管内皮乙酰胆碱作用靶标 ,又可激活M受体的槟榔碱和仅可激活M受体的毛果芸香碱对成栓率和血栓长度影响的差异 ,分析激活内皮乙酰胆碱作用靶标对血栓的影响 ;通过测定血小板最大聚集率 ;凝血酶原时间 (PT)、活化部分凝血活酶时间(KPTT)和凝血酶时间 (TT) ;血浆中组织型纤溶酶原激活物(t PA)的含量和纤溶酶原激活物抑制剂 (PAI 1)的活性 ;血浆血栓素A2 (TXA2 )和前列环素 (PGI2 )含量 ,分析其可能的分子机制。结果 槟榔碱在 0 1～ 4 0mg·kg-1(ip)可剂量依赖性地对抗血栓形成 ,而在相同条件下 ,大剂量 (4mg·kg-1)的毛果芸香碱仍无抗血栓作用 ;槟榔碱对TT ,PT和KPTT和血小板最大聚集率 (MAR)均无影响 ;使血浆中t PA的含量升高 ,PAI 1的活性降低 ;使血栓形成过程中升高的TXA2 降低 ,并呈明显的量效关系 ,使血栓形成过程中降低的PGI2 升高。结论 激活血管内皮细胞乙酰胆碱靶标可对抗血栓形成 ,其可能的分子机制不通过直接影响凝血系统和血小板的聚集 ,而通过促进内皮细胞释放t PA和抑制内皮细胞合成并释放的PAI 1的活性 ,间接激活纤溶系统 ,发挥抗血栓?

大、小动脉内皮细胞乙酰胆碱作用靶标药理学特性的比较

目的 :比较大、小动脉内皮细胞乙酰胆碱作用靶标药理学特性的差异。方法 :采用大鼠尾动脉螺旋状血管条和主动脉离体血管环两种组织 ,对比观察乙酰胆碱 (ACh)诱发大、小动脉内皮依赖性舒张反应特征的差异 ,从而进一步研究小动脉内皮细胞乙酰胆碱作用靶标的药理学特性。结果 :氯化钾 (6 0mmol/L)预致血管收缩的尾动脉和主动脉对不同浓度ACh (10 -8～ 10 -4mol/L)产生内皮依赖性舒张反应 ,且呈剂量依赖性。L Nω 硝基精氨酸甲酯 (L NAME :10 -4mol/L)或美蓝 (MB :10 -5mol/L)与吲哚美辛 (Indo :10 -4mol/L)联用仅可部分地阻断ACh诱发尾动脉内皮依赖性舒张反应 ;而L NAME或MB可完全阻断ACh诱发主动脉内皮依赖性舒张反应。结论 :ACh激活大、小动脉上内皮细胞乙酰胆碱作用靶标诱发内皮依赖性舒张反应的药理学性质不同 ,在小动脉上 ,除了NO和PGI2介导外 ,还有一种非NO和非PGI2 的舒血管因子参与 ;在大动脉上 。

内皮细胞乙酰胆碱作用靶标对胞内钙信号的调节

目的 :研究激活血管内皮细胞乙酰胆碱作用靶标 (ETA)对不同类型血管内皮细胞 [Ca2 + ]i 水平的影响 ;以 [Ca2 + ]i 水平作为鉴定ETA功能的指标之一 ,观察其在传代过程中的改变 ,为研究ETA的分子结构及其信号转导途径提供实验依据。方法 :采用激光共聚焦技术 ,以荧光指示剂Fluo 3为探针 ,观察乙酰胆碱 (ACh)和氨甲酰胆碱 (carbachol ,Car)对内皮细胞 [Ca2 + ]i 水平的影响。结果 :ACh和Car在10 -5～ 10 -2 mol·L-1可使 3～ 10代牛主动脉内皮细胞标本的 [Ca2 + ]i 水平显著升高 ,ACh在 10 -8～10 -2 mol·L-1可使 8代人冠脉内皮细胞标本的[Ca2 + ]i 水平显著升高。结论 :内皮细胞在 10代培养过程中外源性激动剂ACh和Car均可诱导胞内[Ca2 + ]i 水平升高 ,ETA的功能与 [Ca2 + ]i 水平升高有关。

血管内皮细胞乙酰胆碱作用靶标相关新基因的电子克隆

血管内皮细胞乙酰胆碱作用靶标(ETA)作为特异性血管内皮细胞药物作用新靶点具有良好的抗动脉粥样硬化应用前景。通过培养前后血管内皮细胞表达差异基因的筛选,有可能分离获得ETA或其相关基因。在利用抑制削减杂交技术获得14个牛未知基因片段基础上,采用电子克隆途径,使6个未知基因片段得以延伸,并在GenBank的非冗余基因库中找到了对应或同源基因,其中3个延伸出了全长阅读框,另外3个延伸出部分长度;对于延伸出全长阅读框的基因,设计特异性引物进行PCR扩增,验证了电子延伸的可信性,同时也克隆了整个阅读框架区。

血管内皮细胞乙酰胆碱激活蛋白

内皮细胞乙酰胆碱激活蛋白 (EPA)介导的内皮依赖性血管舒张反应 ,广泛存在于哺乳动物的大小动脉血管。在心血管常见病与多发病中 ,EPA功能发生明显变化。EPA虽然具有经典M受体的某些特征 ,又与M受体不同 ,EPA不被毛果芸香碱激活 ,nmol·L-1阿托品不能取代EPA上乙酰胆碱的结合位点。EPA的内源性配体。

牛主动脉内皮细胞乙酰胆碱激活蛋白介导的胞内钙离子变化

目的 研究主动脉内皮细胞乙酰胆碱激活蛋白(EPA)介导胞内钙离子变化的特征 ,并探讨培养牛主动脉内皮细胞EPA功能的变化。方法 以Fluo 3,Frua 2为荧光探针 ,采用共聚焦和荧光光度法测定内皮细胞 [Ca2 + ]i。结果 Ach能够引起体外培养 6代以内内皮细胞 [Ca2 + ]i 的增加 ;Ach激发的内皮细胞 [Ca2 + ]i 信号表现为瞬时性单次或连续 2次的钙振荡 ,具有异时性和快速耐受的特点。未观察到烟碱和其它M受体激动剂引起的 [Ca2 + ]i 变化。Ach对胞内 [Ca2 + ]i 浓度的作用以原代细胞增加最为明显 ,但随培养时间的延长 ,此效应逐渐减弱 ,至 13代后无效应。结论 血管内皮细胞乙酰胆碱激活蛋白激活能介导胞内钙离子的增高 ,经培养后EPA功能丧失。

血管内皮细胞非神经性乙酰胆碱系统的研究进展

血管内皮细胞作为人体主要的代谢库,存在ACh ,并伴有ChAT的表达,有机阳离子载体(OCTs)参与血管内皮细胞ACh的转运和释放,血管内皮细胞AChE活性的广泛表达可以使非神经性ACh的活性仅仅局限于它的合成和释放区域,成为一种细胞因子。mAChR和nAChR同非神经性ACh一样,广泛存在于血管内皮细胞中,ACh通过其受体发挥重要的病理生理功能。nAChR参与血管内皮细胞多种生物活性物质的分泌和释放,其中α7受体在血管新生中发挥重要作用。非神经性ACh诱发内皮依赖的血管舒张反应,一种不同于神经性mAChR的血管内皮细胞非神经性M受体在其中发挥重要作用,并且在动脉粥样硬化和血栓的发生发展过程中起着重要的作用。

低氧时猪肺动脉内皮细胞分泌ET－1和EDNO的变化及乙酰胆碱的影响

低氧时猪肺动脉内皮细胞分泌ＥＴ１和ＥＤＮＯ的变化及乙酰胆碱的影响南新中１洪欣刘忠文谢印芝孙兴斌尹昭云（军事医学科学院卫生学环境医学研究所，天津３０００５０；１现单位：二炮防疫队）血管内皮细胞分泌的内皮素１（ＥＴ１）和一氧化氮（ＥＤＮＯ）对于在生...

介导乙酰胆碱诱发内皮依赖性血管舒张反应受体的特性

目的 针对血管内皮细胞上是否存在M受体的疑点 ,从基因水平和信号转导机理上探讨介导乙酰胆碱 (ACh)诱发内皮依赖性血管舒张反应受体的特性。方法 以新鲜分离和传代培养的牛主动脉内皮细胞为实验材料 ,比较两种内皮细胞M1～M5受体mRNA的分布状况、ACh诱发细胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 + ]i)、环腺苷酸 (cAMP)含量变化。①设计高选择性、特异性寡核苷酸探针 ,采用点杂交方法对内皮细胞M1～M5受体mRNA进行分析 ,并通过反转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、DNA序列测定及同源性分析确证点杂交的实验结果 ;②以Fluo 3和Fura 2为荧光探针 ,用共聚焦和荧光光度仪测定内皮细胞 [Ca2 + ]i 变化 ;③内皮细胞cAMP含量采用12 5I放射免疫分析方法测定。结果 在新鲜分离的牛主动脉内皮细胞存在M1～M4 受体mRNA ,内皮细胞经传代培养后仅检测到M4 受体mRNA ;1和 10μmol·L- 1ACh能够引起原代培养内皮细胞 [Ca2 + ]i增加 ,最大增加量为 12和 19nmol·L- 1;ACh激活原代培养内皮细胞的钙离子信号 ,表现为单次或连续2次的钙振荡 ,具有异时性和快速耐受的特点 ;此外 ,随ACh浓度增加 ,原代培养内皮细胞cAMP含量均呈微弱增加趋势 ;ACh不引起传代培养内皮细胞[Ca2 + ]i 浓度的改变 ,但能浓度依赖地降低cAMP含量。结论 新鲜分?

药物新靶标非神经性乙酰胆碱系统的分布特征与功能

非神经性乙酰胆碱系统 (non neuronalacetyl cholinesystem ,NNAs)广泛存在于各种非神经支配的组织或器官中。非神经性ACh ,以自分泌或旁分泌方式 ,通过相应的受体参与细胞基本功能的调节 ,如基因表达、增生、分化、细胞骨架的组成、细胞间接触、细胞运动、迁移、液体的分泌与重吸收以及细胞的营养等功能 ,也对细胞因子的释放和系统急性炎症等方面具有重要调节作用。非神经性胆碱系统具有的广泛的生物学功能提示 ,非神经胆碱系统功能异常在一些疾病如炎症、动脉粥样硬化、局部及系统感染以及肿瘤等中具有重要的作用。因此 ,NNAs已成为药物研究的新靶标。

氨甲酰胆碱和毛果芸香碱对血管内皮细胞M受体基因表达的调节作用

目的：比较氨甲酰胆碱和毛果芸香碱对血管内皮细胞M受体基因表达调节作用的异同点。方法：氨甲酰胆碱和毛果芸香碱分别孵育培养的牛主动脉内皮细胞10h后，提取细胞总RNA，RT-PCR方法测定M受体5个亚型mRNA的表达。结果：M_1～M_5受体mRNA在牛主动脉内皮细胞上均有表达，氨甲酰胆碱和毛果芸香碱孵育后表达量均增加，但二者之间无差异。结论：氨甲酰胆碱和毛果芸香碱对M受体5个亚型的基因表达均发生了相同的影响，两者对M受体可能的作用尚不能解释其对血管张力的影响。

内皮细胞与血管形成

最近的研究表明 ,虽然病原性血管因子很多 ,但在释放或受体水平 ,抑制专一性血管形成因子这一策略 ,可能成为安全、有效地治疗由血管形成介导的疾病的方法基础。生理性血管形成对血管的再生、成长和修复是至关重要的 ;而病理性血管形成则维系着血管疾病、肿瘤和致炎性疾病的发展进程。血管形成因子的种类有多种 ,都间接或直接作用于内皮细胞 ,这就说明内皮细胞对血管形成的影响尤为重要 ,这一作用靶点为一些与病理性血管形成有关的人类疾病提供了新的治疗策略。目前 。

在体评价犬和猪冠状动脉内皮细胞的功能

【目的】在体观察缺血再灌注对犬冠状动脉内皮细胞功能的影响以及猪冠状动脉对血管活性药物的反应性。【方法】动脉麻醉后开胸、心包吊床,之后分离冠状动脉左前降支。犬作第一对角支插管,猪作冠状动脉左回旋支插管。犬冠状动脉左前降支缺血30min后再灌注60min,猪不作缺血再灌注。分别向冠状动脉内注射乙酰胆碱和硝酸甘油,以注药后平均冠状动脉血流量变化的百分率来评价冠状动脉内皮细胞依赖性和非依赖性的舒张功能。【结果】注乙酰胆碱后,基线状态下犬平均冠状动脉血流量从(17±4)mL/min升至(41±12)mL/min(P<0.05);但缺血再灌注后舒血管反应幅度降低,其中再灌注15min时间点平均冠状动脉血流量增幅水平明显低于基线增幅水平(142%±54%vs87%±57%,P<0.05)。注乙酰胆碱后,基线状态下猪平均冠状动脉血流量在(11±3)s内从(21±11)mL/min迅速降至(12±8)mL/min,在(42±10)s内又回升至(23±13)mL/min。硝酸甘油使基线状态下犬平均冠状动脉血流量从(18±5)mL/min升至(40±22)mL/min(P<0.05),猪的冠状动脉也呈类似反应。【结论】乙酰胆碱引起犬冠状动脉呈舒血管反应,缺血再灌注使犬冠状动脉内皮细胞功能明显受损。猪冠状动脉对乙酰胆碱呈先收缩后舒张的“双向反应”。硝酸甘油则引起犬或猪的冠状动脉均呈舒张反?

血管内皮细胞与平滑肌细胞间的信息传递

血管内皮细胞和血管平滑肌细胞之间存在着肌内皮间缝隙连接,进行电和化学的信息传递,以协调血管的舒缩活动。电信号可以从内皮细胞到平滑肌细胞进行传递,相反,也可以从平滑肌细胞到内皮细胞进行传递。内皮源性超极化因子、乙酰胆碱、缓激肽、第二信使等物质亦可引起内皮细胞或/和平滑肌细胞细胞膜的超极化或去极化,参与血管内皮细胞与平滑肌细胞间的信息传递。

1,2,5,6-4H-1-烷基-3-取代吡啶类新衍生物对血管内皮细胞功能的调节作用及其构效关系

目的 :以槟榔碱为结构母核 ,设计合成 1,2 ,5 ,6 4H 1 烷基 3 取代吡啶类新衍生物 ,分析其对血管内皮细胞功能的影响。方法 :采用离体大鼠主动脉环和离体豚鼠回肠收缩实验 ,分别观察新结构化合物对血管和回肠平滑肌张力的影响 ;并进一步观察一氧化氮合酶抑制剂L NAME、环氧酶抑制剂吲哚美辛、M受体亚型非选择性激动剂毛果芸香碱和M受体亚型非选择性拮抗剂阿托品对新结构化合物诱发的血管舒张反应的影响。结果 :从 10 0个新化合物中发现 4个有舒血管反应 ,但不激活M受体的化合物 ,分别是HH91、HH95、HH98、HH10 3。新化合物HH10 3诱发的内皮依赖性舒血管反应可被L NAME所拮抗 ,但不被吲哚美辛、阿托品和毛果芸香碱拮抗。结论 :新化合物可诱发内皮依赖性舒张反应并具有特定构效关系 ;HH10 3通过促进内皮细胞释放NO发挥其效应 ;但其作用特征又与乙酰胆碱不同。

一种评价猪冠状动脉内皮细胞完整性的新方法

血管内皮细胞通过释放内皮细胞源性收缩和舒张因子调节血管平滑肌细胞的舒缩活动,经典上在离体血管实验中常采用乙酰胆碱作为检验血管内皮细胞完整性的工具药。最近我们在离体猪冠状动脉环上观察到不论内皮是否完整,乙酰胆碱均呈剂量依赖性收缩反应,但三磷酸腺苷则可诱发内皮依赖性松弛反应,在此基础上我们建立了以三磷酸腺苷为工具药评价猪冠状动脉内皮细胞完整性的新方法。

非神经性乙酰胆碱系统的结构和功能特征

非神经性乙酰胆碱系统包括乙酰胆碱、胆碱乙酰转移酶、胆碱酯酶、毒蕈碱乙酰胆碱能受体和烟碱胆碱能受体,广泛地存在于角质化细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、胶质细胞、上皮细胞、淋巴细胞、生殖器官等非神经性细胞和组织,参与这些细胞和组织的功能调节,并与一些疾病的病理生理变化相关。本文归纳了非神经性乙酰胆碱系统的概况,并具体介绍了内皮细胞、胶质细胞、上皮细胞和淋巴细胞的非神经性乙酰胆碱系统的结构和功能特征。非神经性乙酰胆碱系统不但与神经性乙酰胆碱系统不尽相同,而且不同组织的非神经性乙酰胆碱系统也不完全一样。

细胞微粒在自身免疫性疾病发病中的作用:一种新的潜在治疗靶标

细胞微粒（Microparticles,MPs）是一类在某些生理或病理状况下,从血管内皮细胞或循环血细胞出芽脱落的富含磷脂的直径约为0.1-1.0μm的颗粒,具有生物活性可参与多种免疫性疾病（Immune diseases）的发病[1]。微粒被认为是多功能的亚细胞结构,通过释放生物活性分子和表面抗原与靶细胞的受体相互作用,