长链非编码RNA(LncRNA)母系表达基因3(MEG3)对糖尿病视网膜病变大鼠模型视网膜血管内皮细胞凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)母系表达基因3(MEG3)对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠模型视网膜血管内皮细胞凋亡的影响。方法取SPF级雄性SD大鼠以及体外培养的人视网膜微血管内皮细胞(HRMEC),均随机分为对照组、模型组、LncRNA MEG3过表达组、miR-145-5p agomir组、共转染(LncRNA MEG3过表达质粒+miR-145-5p agomir)组、共转染阴性对照(LncRNA MEG3空载质粒+miR-145-5p agomir阴性对照质粒)组,采用腹腔注射链脲佐菌素建立DR大鼠模型,25 mmol·L^(-1)葡萄糖诱导DR细胞模型。对照组大鼠腹腔注射柠檬酸缓冲液,对照组细胞以正常培养基培养,将大鼠与细胞均分组进行处理,以LncRNA MEG3质粒、miR-145-5p agomir转染处理后,通过伊文思蓝(EB)检测大鼠视网膜血管通透性;TUNEL染色检测大鼠视网膜血管内皮细胞凋亡率;EdU染色与Hoechst 33258染色分别检测细胞增殖、凋亡情况;依照试剂盒测量大鼠房水中及HRMEC炎症因子白细胞介素(IL)-6、IL-1β含量;实时荧光定量PCR实验检测HRMEC及大鼠视网膜组织miR-145-5p表达;蛋白免疫印迹法检测HRMEC及大鼠视网膜组织凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax)表达;双荧光素酶实验验证HRMEC中LncRNA MEG3对miR-145-5p的靶向调节作用。结果LncRNA MEG3过表达组大鼠玻璃体中EB含量、视网膜血管内皮细胞凋亡率及房水中IL-6、IL-1β含量均低于模型组、共转染组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);miR-145-5p agomir组大鼠玻璃体中EB含量、视网膜血管内皮细胞凋亡率及房水中IL-6、IL-1β含量均高于模型组、共转染组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。LncRNA MEG3过表达组HRMEC增殖率均高于模型组、共转染组,差异均有统计学意义(均为P<0.05),HRMEC凋亡率及IL-6、IL-1β含量均低于模型组、共转染组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);miR-145-5p agomir组HRMEC增殖率均低于模型组、共转染组,差异均有统计学意义(均为P<0.05),HRMEC凋亡率及IL-6、IL-1β含量均高于模型组、共转染组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。LncRNA MEG3过表达组HRMEC、大鼠视网膜组织miR-145-5p及Bax表达均低于模型组、共转染组,Bcl-2表达均高于模型组、共转染组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);miR-145-5p agomir组HRMEC、大鼠视网膜组织miR-145-5p及Bax表达均高于模型组、共转染组,Bcl-2表达均低于模型组、共转染组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。转染野生型miR-145-5p报告质粒+LncRNA MEG3过表达质粒组细胞相对荧光素酶活性(0.33±0.05)低于转染野生型miR-145-5p报告质粒+LncRNA MEG3空载质粒组(1.02±0.21),差异有统计学意义(P<0.05)。结论LncRNA MEG3可通过靶向下调miR-145-5p表达,抑制炎症反应,减轻DR大鼠视网膜血管内皮细胞凋亡,促使HRMEC DR细胞模型存活,改善DR大鼠视网膜血管屏障功能。

高糖对人脐静脉内皮细胞凋亡及bcl-x、bax和eNOS表达的影响

目的:探讨高糖对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响,及其与bcl-x、bax和eNOS表达的相关性。方法:将培养成功的HUVEC以不同浓度的葡萄糖孵育72h,提取细胞总RNA。采用半定量逆转录聚合酶链反应(SQ-RT-PCR)法检测内皮细胞bcl-x、bax以及eNOS表达。用吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)荧光染色法进行内皮细胞凋亡定性。结果:高浓度葡萄糖(33.3mmol)可诱导HUVEC凋亡增加(P<0.01),eNOS及bcl-x表达减弱。HUVEC凋亡与eNOS表达呈负相关。结论:糖尿病状态下高血糖诱导内皮细胞凋亡,可能与bcl-x及eNOS表达减弱有关。

人参皂甙Rg_1抗OxLDL诱导内皮细胞凋亡及分子机制

目的 探讨人参皂甙Rg1抑制氧化低密度脂蛋白 (oxidizedlow densitylipoprotein ,OxLDL)诱导血管内皮细胞凋亡的作用及其相关分子机制。方法以体外培养的牛主动脉内皮细胞为模型 ,分别加入OxLDL2 0 0 μg/ml (OxLDL组 )和OxLDL 2 0 0 μg/ml+Rg140 μg/ml (Rg1组 ) ,对照组不加任何诱导物 ,培养 2 4小时后观察细胞形态变化 ,DNA电泳、TUNEL染色检测细胞有无凋亡及凋亡的程度 ,Westernblot分析各组内皮细胞型一氧化氮合酶 (endothelialNitricOxideSynthase,eNOS)的表达水平。结果①对照组和OxLDL组血管内皮细胞凋亡比例分别为 8%和 4 1 35 % ;②Rg1组血管内皮细胞凋亡比例为 13 2 9% ;③OxLDL抑制牛主动脉内皮细胞的eNOS表达水平 ,此抑制作用具有剂量依赖性。人参皂甙Rg1可使被OxLDL抑制的eNOS表达水平回升。结论①OxLDL能诱导血管内皮细胞凋亡 ;②人参皂甙Rg1能抑制OxLDL诱导的血管内皮细胞凋亡 ;③此作用可能与上调内皮细胞的eNOS水平。

金粉蕨素抑制氧化应激诱导的血管内皮细胞凋亡

研究金粉蕨素对氧化应激诱导的血管内皮细胞凋亡的影响及可能机制。用过氧化氢损伤人脐静脉内皮细胞株ECV304,制备内皮细胞凋亡模型。应用四甲基偶氮唑盐还原法观察细胞活性;流式细胞术和Tunel法检测细胞凋亡率;用Western blot检测细胞天冬氨酸凋亡蛋白酶3活性。结果发现,金粉蕨素(0.3、1和3 μmol/L)呈浓度依赖性地增加内皮细胞活性,显著降低细胞凋亡率(15.5％±1.2％、12,6％±0.9％、8.2％±0.8％比22.7％±3.9％,P<0.05);同时金粉蕨素(3 μmol/L)抑制过氧化氢诱导天冬氨酸凋亡蚤白酶3的活化,与阳性对照药金雀异黄酮作用强度相似。结果提示,金粉蕨素拮抗氧化应激诱导的血管内皮细胞凋亡可能与抑制天冬氨酸凋亡蛋白酶3活化有关。

参芪复方对GK大鼠大血管病变内皮细胞凋亡影响的实验研究

目的观察参芪复方对GK大鼠大血管病变血管内皮细胞凋亡的影响。方法设GK组、模型组、阿托伐他汀组、参芪复方组及Wistar正常对照组,各组大鼠灌胃及喂饲相应药物或饲料35d。原位末端标记Tunel法观察内皮细胞平均荧光强度,进行内皮细胞凋亡程度评价,免疫组组织化学染色(SP法)测定caspase-3阳性物质积分光密度情况。结果阿托伐他汀组、参芪复方组内皮细胞平均荧光强度、内皮细胞凋亡程度、caspase-3积分光密度均低于模型组(P<0.05或P<0.01),阿托伐他汀组、参芪复方组间比较无差异。结论抑制主动脉血管内皮细胞凋亡及caspase-3表达可能是参芪复方防治糖尿病大血管早期病变的机制之一。

高糖诱导人内皮细胞凋亡及其JNK、AKT信号途径的作用机制

目的探讨高糖诱导人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells,HUVECs)凋亡的JNK及AKT信号途径作用机制。方法HUVECs细胞分别在生理浓度葡萄糖(5mmol/L) (NG)、高葡萄糖(30mmol/L) (HG)、高糖加JNK特异性阻断剂SP6 00 12 5 (10 μmol/L) (HG +I)条件下培养72h。Hoechst332 5 8染色,荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学改变;annexinV FITC试剂盒染色,流式细胞仪进行细胞凋亡定量;Westernblot方法测定细胞p JNK、p- c- JUN、p AKT水平。结果高葡萄糖培养72h ,内皮细胞凋亡率为13 .31% ,显著高于对照组5 . 6 9% (P <0 . 0 1)。高糖条件下内皮细胞p JNK、p c JUN水平较对照组显著增加(P <0 . 0 5 ) ,而p AKT显著降低(P <0 . 0 1)。SP6 0 0 12 5应用后,与高糖组比较p JNK无显著变化、p c JUN含量降低(P <0 .0 5 ) ,而p AKT升高(P <0 . 0 1) ,高糖诱导的内皮细胞凋亡被抑制(8. 38% ,P <0 . 0 1)。结论高糖可诱导内皮细胞凋亡,其机制可能是激活JNK及其下游c- JUN ,而抑制AKT的活化,而JNK活化程度对AKT信号通路可能存在调节作用。

内质网应激途径介导同型半胱氨酸致血管内皮细胞凋亡的研究进展

在人体中，血管内皮细胞具有调节物质代谢、防止血栓形成和维持血流通畅等非常重要的生理功能。内质网（En—doplasmicreticulum，ER）可以调节细胞内蛋白质的正确折叠，是维持钙稳态及凋亡发生等功能的重要亚细胞器。

血管内皮生长因子对过氧化氢诱导的内皮细胞凋亡的影响及其机制

目的研究血管内皮生长因子对过氧化氢诱导的血管内皮细胞凋亡的影响,同时检测凋亡相关基因Bcl-2 mRNA与Fas mRNA表达的变化。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,随机分成对照组、过氧化氢组和过氧化氢+血管内皮生长因子组,12 h后,采用原位末端标记法和流式细胞仪分别观察各组细胞的凋亡数和凋亡率,通过逆转录聚合酶链反应观察各组细胞中凋亡相关基因Bcl-2 mRNA与Fas mRNA表达的变化。结果过氧化氢组凋亡细胞数(27.83±2.14)明显高于对照组(2.50±1.05)(P<0.01)和过氧化氢+血管内皮生长因子组(13.00±2.10)(P<0.01)。过氧化氢组细胞凋亡率(14.17%±0.45%)明显高于对照组(1.55%±0.87%)(P<0.01)和过氧化氢+血管内皮生长因子组(5.69%±0.38%)(P<0.01)。与过氧化氢组比较,过氧化氢+血管内皮生长因子组Fas mRNA表达明显减少(40.67%±2.16%比94.50%±3.45%,P<0.01),而Bcl-2 mRNA表达明显增加(60.33%±1.75%比23.17%±1.17%,P<0.01)。结论血管内皮生长因子能拮抗过氧化氢诱导的内皮细胞凋亡,其抗凋亡的机制可能与上调Bcl-2 mRNA表达与下调Fas mRNA表达有关。

复方硒多糖胶囊对内皮细胞凋亡的影响

目的 用 2 ,2′ -盐酸脒基丙烷 [2 ,2′ -azobis- (2 -amidinopropane)hydrochloride ,AAPH]诱导血管内皮细胞凋亡 ,观察复方硒多糖胶囊是否具有抗凋亡的作用。方法 MTT测定并分析细胞损伤状况 ,倒置相差显微镜观察细胞形态 ,DNA提取及琼脂糖凝胶电泳观察凋亡特征性梯带 ,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 经 10 μmol·L-1复方硒多糖溶液预处理后 ,由AAPH诱导的内皮细胞凋亡受到明显抑制。结论 复方硒多糖胶囊可抑制氧化所致的内皮细胞凋亡 ,具有抗动脉粥样硬化的作用。

木贼对动脉粥样硬化早期大鼠内皮细胞凋亡及Bax、Bcl-2表达的影响

目的 观察木贼对大鼠动脉粥样硬化早期血管内皮细胞凋亡及 bax、bcl- 2表达的影响。方法 高脂饲料复制 SD大鼠高脂血症和早期动脉粥样硬化模型 ,同时给以不同剂量木贼水煎剂灌胃 ,实验 1 0 w后 ,流式细胞术定量检测各组主动脉内皮细胞凋亡率及 bax、bcl- 2基因蛋白表达。结果 模型组内皮细胞凋亡率及两个基因表达明显高于正常组 (P<0 .0 1 ) ;木贼组内皮细胞凋亡率与 bax表达量显著低于模型组 (P<0 .0 1 ) ,bcl- 2比较虽无统计学意义 ,但用药后 bax/bcl- 2比值差异具有显著性。结论 木贼可从基因水平调控早期动脉粥样硬化主动脉内皮细胞凋亡 ,干预动脉粥样硬化始动环节及其发生。

舒心胶囊对缺氧诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及相关基因表达的影响

观察舒心胶囊对缺氧诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及相关基因表达的影响。体外培养人脐静脉内皮细胞 ,建立缺氧模型 ,以透射电子显微镜技术、流式细胞术 (膜联蛋白v/碘化丙啶 )双染色鉴定细胞凋亡 ;流式细胞术检测Fas、bcl 2及p5 3蛋白表达。缺氧培养 12h后 ,电镜显示细胞呈典型凋亡形态 ,双染色流式细胞仪检测凋亡细胞比例 (13.0 3%± 0 .96 % )显著高于正常组 (4 .4 7%± 0 .6 4 % ) (P <0 .0 1) ,而加入 5g/L舒心胶囊原液缺氧培养 12h后 ,凋亡细胞显著减少 (5 .0 3%± 0 .5 4 % ) (P <0 .0 1)。Fas蛋白表达在缺氧损伤过程中未见改变 ,舒心胶囊可使bcl 2蛋白表达升高 ,p5 3蛋白表达降低。舒心胶囊能够抑制缺氧诱导人脐静脉内皮细胞凋亡 ,可能与其升高bcl 2表达、降低p5 3表达有关。

X盒结合蛋白1在高迁移率族蛋白B1诱导内皮细胞凋亡中的作用

目的探讨活化的X盒结合蛋白1(XBP1)在高迁移率族蛋白B1(HMGB1)诱导人脐静脉血管内皮细胞凋亡中的作用及机制。方法体外培养人脐静脉血管内皮细胞,将其分为正常对照组、HMGB1刺激组和慢病毒干扰+HMGB1刺激组(即XBP1基因被沉默后加入HMGB1)。采用RT-PCR检测剪切型XBP1(s XBP1)的基因表达水平,Western blot检测Caspase-3的蛋白表达水平,细胞荧光染色检测内皮细胞凋亡。结果与正常对照组比较,HMGB1刺激组s XBP1的基因表达水平增加,Caspase-3的蛋白表达水平明显升高,细胞凋亡率明显增加(P均<0.05);与正常对照组比较,慢病毒干扰+HMGB1刺激组s XBP1的基因表达水平无明显改变,Caspase-3的蛋白表达水平、细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。与HMGB1刺激组比较,慢病毒干扰+HMGB1刺激组s XBP1的基因表达水平降低,Caspase-3的蛋白表达水平降低,细胞凋亡率降低(P均<0.05)。结论 XBP1对HMGB1诱导内皮细胞凋亡至关重要。

糖尿病大鼠冠状动脉内皮细胞凋亡的研究

目的 探讨糖尿病大鼠冠状动脉内皮细胞(下称内皮细胞)凋亡的机制,以及凋亡与Fas基因、bcl-2基因表达之间的关系。 方法 实验大鼠分为未治疗组、胰岛素治疗组和正常对照组,每组8只,分别于第0周和第16周时处死检测一般指标,并观察内皮细胞的凋亡百分数(TUNEL法)、bcl-2基因、Fas基因的表达(免疫组化法)、内皮细胞超微结构的改变(电镜)。 结果 (1)16 周时,未治疗组比治疗组、正常对照组大鼠体重减轻,差异有统计学意义(P<0.05);血糖及糖化血红蛋白(HbA1c)显著高于后两组(P<0.05),内皮细胞凋亡数目明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。未治疗组Fas基因表达增加,而 bcl-2 基因表达降低,差异有统计学意义(P<0.01)。未治疗组可观察到较明显的内皮细胞凋亡的形态学改变。 结论 高血糖是实验大鼠内皮细胞凋亡强烈相关因素,凋亡的发生与Fas基因表达上调、bcl-2基因表达降低相关。

缺氧复氧诱导脐静脉内皮细胞凋亡的机制

目的探讨缺氧复氧诱导人脐静脉内皮细胞凋亡发生的机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,随机分为5组缺氧0h(对照组)、3h、6h、12h、24h复氧组。向培养瓶内通入95%N2和5%CO2按不同时间孵育,随后通入5%CO2和95%空气复氧2h,建立内皮细胞缺氧复氧模型。采用台盼蓝染色、TUNEL技术对凋亡和死亡细胞进行定量分析,DNA电泳观察内皮细胞凋亡的形态学。Westernblot检测细胞凋亡调节蛋白Bcl2和Bax表达强度,同时检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)中磷酸化ERK1/2的表达。采用凝胶成像分析系统灰度扫描检测蛋白质表达相对量。结果缺氧复氧后内皮细胞凋亡明显,而且内皮细胞凋亡数随缺氧时间延长而增多(P<005)。Westernblot表明缺氧复氧增强内皮细胞Bax的表达,对Bcl2的表达量和磷酸化ERK1/2没有明显影响,使Bcl2/Bax比值减小。结论缺氧复氧可以诱导内皮细胞凋亡,证实缺氧复氧上调促凋亡蛋白Bax的表达,对抑制凋亡蛋白Bcl2的表达无显著影响。首次证实缺氧复氧诱导内皮细胞凋亡是取决于Bcl2/Bax比值,而不是通过MAPK磷酸化途径。

靶向诱导内皮细胞凋亡抑制肿瘤血管新生的研究进展

血管新生是肿瘤发生发展中一个重要的病理特征,抗血管新生已经成为肿瘤治疗研究的一大热点。目前抗血管新生的策略主要是应用血管新生刺激因子拮抗剂或血管新生抑制因子,以恢复肿瘤中被打破的血管新生平衡。相比于血管新生刺激因子拮抗剂,内源性血管新生抑制因子展现了更好的治疗前景,但是其分子机制还有待进一步阐明。内源性血管新生抑制因子包括两类,一类是前体蛋白的水解片段,如人纤溶酶原K5(plasminogen kringle 5,K5)、血管抑素(angiostatin/kringle 1-4)、内皮抑素(endostatin)等;另一类是细胞分泌性的蛋白质,如色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)、激肽释放酶结合蛋白(kallikrein-binding protein,KBP/kallistatin)、抗凝血酶(antithrombin)等。本文以K5、PEDF、KBP为例,分别介绍其生物学功能、抗肿瘤血管新生机制及应用前景等方面的研究进展,希望这些研究能够为未来抗肿瘤血管新生治疗提供借鉴。

谷氧还蛋白1对高糖诱导的血管内皮细胞凋亡保护作用的研究

目的观察谷氧还蛋白1(glutaredoxin1,Grx1)在高糖诱导的血管内皮细胞凋亡中的保护作用。方法在高糖环境中培养人脐静脉内皮细胞,制备人脐静脉内皮细胞损伤模型,细胞分为正常对照组、损伤组、Grx1预保护组。倒置显微镜下观察细胞形态、(MTT比色法)检测细胞活力以初步观察Grx1对细胞损伤的保护作用;利用Hoechst33258染色法荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化;采用Annexin V-FITC/PI双染法,流式细胞仪检测Grx1对内皮细胞凋亡的影响。结果光镜观察结果显示,Grx1预保护组与损伤组比较细胞状态明显改善;MTT法显示高糖环境下,Grx1可减轻高糖引起的细胞活性降低;Ho-echst33258染色实验显示,Grx1可明显改善高糖所致的内皮细胞变形、皱缩等损伤表现。流式细胞术检测显示当Grx1存在时,细胞凋亡率明显下降。结论Grx1对高糖诱导的血管内皮细胞凋亡具有明显的保护作用。

内皮微颗粒与内皮细胞凋亡

微颗粒（microparticle,MP）是各种类型的细胞激活或损伤时,从细胞膜上脱落的微小膜性囊泡,直径为0.1～1μm,表面表达各种磷脂和粘附分子,少量存在于健康个体血浆中。根据微颗粒的细胞来源,分为血小板来源的MP、白细胞来源的MP、红细胞来源的MP和内皮细胞来源的MP（endothelial—derived microparticles，EMP），

细胞信号转导抑制因子-1表达下调对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的大量研究表明,内皮细胞的凋亡参与了动脉粥样硬化的发生与发展。另外有研究表明,细胞信号转导抑制因子-1(SOCS1)的表达下调可促进某些细胞的凋亡。然而,SOCS1表达下调是否与内皮细胞的凋亡有关,目前未见相关报道。为此,本研究利用RNA干扰沉默SOCS1的表达,然后观察内皮细胞凋亡的变化,探讨SOCS1与动脉粥样硬化之间的关系。方法 (1)培养人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cel,HUVEC),利用RT-PCR和Western Blotting检测SOCS1在HUVEC中的表达。(2)设计并化学合成4对靶向SOCS1的siRNA:siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4。(3)将带有荧光标记的阴性对照siRNA配制成25、50、75、100 nmol/L的4组,利用脂质体转染细胞,并在荧光显微镜下观察转染效率,得出有最佳转染效率的浓度。(4)HUVEC根据不同的处理因素分成8组:siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4和阳性对照组、阴性对照组、转染试剂组、空白对照组。将均为有最佳转染效率浓度的各组siRNA转染细胞,48小时后收获细胞。利用RT-PCR和Western Blotting,筛选出1对对SOCS1沉默效率最高的siRNA。(5)将筛选出来的沉默效率最高的siRNA和阴性对照siRNA以有最佳转染效率的浓度转染细胞,转染24小时后分为4组:①阴性对照siRNA;②阴性对照siRNA+缺氧20小时/复氧4小时;③SOCS1 siRNA;④SOCS1 siRNA+缺氧20小时/复氧4小时。最后,利用Western Blot检测Caspase3和Bax的表达,利用流式细胞仪检测凋亡。结果 (1)siRNA在50 nmol/L时有较高的转染效率。(2)4对siRNA干扰后,SOCS1的表达水平与四个对照组相比明显下调(P<0.05),其中siRNA-3的沉默效率最高(P<0.05)。(3)对HUVEC进行RNA干扰和缺氧复氧处理后,SOCS1 siRNA+缺氧复氧组的Caspase3、Bax蛋白表达水平与其它3组相比明显升高(P<0.05),阴性对照siRNA+缺氧复氧组的Caspase3、Bax蛋白表达水平与阴性对照siRNA组相比明显升高(P<0.05),阴性对照siRNA+缺氧复氧组的Caspase3蛋白表达水平与SOCS1 siRNA组相比明显升高(P<0.05),而阴性对照siR-NA组与SOCS1 siRNA组之间的Caspase3蛋白表达水平差别无统计学意义(P>0.05),SOCS1 siRNA组的Bax蛋白表达水平与阴性对照siRNA组相比明显升高(P<0.05)。(4).对HUVEC进行RNA干扰和缺氧复氧处理后,SOCS1siRNA+缺氧复氧组的凋亡率与其它3组相比明显升高(P<0.05)。阴性对照siRNA+缺氧复氧组的凋亡率与阴性对照siRNA组、SOCS1 siRNA组相比明显升高(P<0.05)。而阴性对照siRNA组与SOCS1 siRNA组之间的凋亡水平差别无统计学意义(P>0.05)。结论 (1)RNA干扰能有效抑制SOCS1在内皮细胞中的表达。(2)沉默SOCS1表达可加剧缺氧复氧导致的内皮细胞凋亡。

细胞色素P450表氧化酶对内皮细胞凋亡及NF-κB表达的影响

目的研究细胞色素P450表氧化酶对肿瘤坏死因子诱导的内皮细胞凋亡及NF-κB活性的影响。方法在原代培养的牛主动脉内皮细胞中,分别转染细胞色素P450表氧化酶基因rAAV-2J2,rAAV-2C11,rAAV-F87V两周后,用肿瘤坏死因子(TNF-α)(10ng/ml)和放线菌素D(ActD) (5ng/ml)诱导凋亡,通过DNA ladder观察细胞凋亡,同时ELISA法测定NF-κB的活性。结果与对照组相比,转染细胞色素P450表氧化酶基因后能抑制内皮细胞的凋亡,同时诱导细胞凋亡后,转染CYP450各基因组NF-κB中P65的活性较对照组明显降低。结论细胞色素P450表氧化酶能明显的抑制肿瘤坏死因子诱导的内皮细胞凋亡,并通过抑制NF-κB的核转位发挥抗凋亡作用。