灵孢多糖对过氧化氢致SH-SY5Y细胞凋亡及线粒体功能障碍的调控

背景:目前研究证实,灵孢多糖可促进神经退行性相关疾病的神经再生。神经退行性疾病的发生与线粒体功能失调密切相关,但灵孢多糖对神经退行性疾病的细胞凋亡及线粒体功能的调控作用尚不明确。目的:探索灵孢多糖对过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞凋亡及线粒体功能障碍的调控作用及机制。方法:SH-SY5Y细胞分为3组:对照组,过氧化氢组,灵孢多糖组。对照组细胞正常培养,过氧化氢组细胞用300μmol/L过氧化氢处理24 h,灵孢多糖组先用300μg/μL灵孢多糖干预一两个小时,然后加入300μmol/L过氧化氢干预24 h,干预结束后用JC-1试剂盒检测线粒体膜电位,TUNEL染色试剂盒检测细胞凋亡情况,丙二醛试剂盒和超氧化物歧化酶试剂盒检测丙二醛和超氧化物歧化酶活性,免疫荧光染色法和Western blot法检测凋亡、线粒体动力学相关蛋白的表达。结果与结论:①与对照组相比,过氧化氢组线粒体膜电位和超氧化歧化酶活性显著降低,细胞凋亡率、丙二醇水平显著增高,差异均有显著性意义(P<0.05);与过氧化氢组相比,灵孢多糖组线粒体膜电位和超氧化歧化酶活性显著增高,细胞凋亡率、丙二醛水平显著下降,差异均有显著性意义(P<0.05);②与对照组相比,过氧化氢组促凋亡蛋白Bax和Caspase-3的表达显著增加,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达显著下降,差异均有显著性意义(P<0.05);与过氧化氢组相比,灵孢多糖组促凋亡蛋白Bax、Caspase-3的表达显著降低,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达显著增加,差异均有显著性意义(P<0.05);③与对照组相比,过氧化氢组线粒体分裂蛋白Fis1与线粒体动力学蛋白p-Drp1的表达均显著增高,线粒体融合蛋白OPA1、Mfn1、Mfn2的表达均显著降低,差异均有显著性意义(P<0.05);与过氧化氢组相比,灵孢多糖组线粒体分裂蛋白Fis1与线粒体动力学蛋白p-Drp1的表达显著降低,线粒体融合蛋白OPA1、Mfn1、Mfn2的表达显著增高,差异均有显著性意义(P<0.05);④以上结果证实,灵孢多糖可通过改善线粒体功能障碍以减轻过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞氧化应激损伤和细胞凋亡。

达格列净减轻氧化低密度脂蛋白诱导的内皮细胞焦亡和功能障碍

背景:达格列净是钠-葡萄糖共转运蛋白2的抑制剂,可以通过调节糖代谢和抑制炎症改善内皮细胞功能,从而延缓动脉粥样硬化的进展。目的:观察达格列净对氧化低密度脂蛋白诱导的内皮细胞焦亡和内皮功能障碍的影响。方法:将人脐静脉内皮细胞分为3组:对照组不进行任何干预,模型组加入氧化低密度脂蛋白处理24 h,达格列净组在加入氧化低密度脂蛋白的基础上给予达格列净干预24 h,CCK-8检测内皮细胞增殖活性,ELISA检测细胞培养上清液中细胞间黏附分子1、血管细胞黏附分子1和单核细胞趋化蛋白1水平;硝酸还原酶法检测细胞一氧化氮水平;Hoechst 33342/PI荧光双染和乳酸脱氢酶释放实验检测内皮细胞焦亡情况和焦亡特征;Western blot检测内皮细胞焦亡因子NLRP3、caspase-1、GSDMD、白细胞介素18和白细胞介素1β蛋白表达。结果与结论:①氧化低密度脂蛋白可以导致内皮细胞焦亡和功能障碍;②与对照组相比,模型组细胞活性和一氧化氮水平下降(P<0.05),而乳酸脱氢酶、细胞间黏附分子1、血管细胞黏附分子1以及单核细胞趋化蛋白1显著增多(P<0.05);与模型组相比,达格列净组细胞活性和一氧化氮水平明显增加(P<0.05),而乳酸脱氢酶、细胞间黏附分子1、血管细胞黏附分子1以及单核细胞趋化蛋白1显著下降(P<0.05);③与模型组相比,达格列净组细胞焦亡率以及焦亡因子NLRP3、caspase-1、GSDMD、白细胞介素18和白细胞介素1β蛋白表达明显减少(P<0.05);④以上结果表明,达格列净可以抑制氧化低密度脂蛋白诱导的内皮细胞焦亡并改善内皮细胞功能障碍。

盘状结构域受体1通过调控NF-κB/NLRP3信号通路介导的细胞焦亡对高糖诱导血管内皮功能障碍的影响

目的 探究盘状结构域受体1 (discoidin domain receptor 1,DDR1)对高糖诱导血管内皮细胞功能障碍的作用机制。方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HU VECs),首先分为对照组(Control)、高糖诱导组(high glucose,HG),采用33 mmol·L^(-1) D-glucose处理48 h构建HUVECs功能障碍。碘化丙啶染色(PI)检测细胞焦亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)测定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、IL-1β、IL-18水平;Western blot检测DDR1、NF-κB/NLRP3信号通路蛋白及细胞焦亡相关蛋白表达;随后,实验分为C ontrol组、HG组、HG+DDR1 NC组、HG+DDR1 siRNA组。转染DDR1 siRNA 24 h后观察HG对HUVECs增殖和迁移能力的影响;ELISA检测内皮型一氧化氮合成酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)、血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)、细胞间黏附分子-1 (intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)及LDH、IL-1β、IL-18水平;PI检测细胞焦亡情况;Western blot检测DDR1、NF-κB/NLRP3信号通路蛋白及细胞焦亡相关蛋白表达。结果 与Control组相比,HG组细胞eNOS含量降低,VCAM-1、ICAM-1含量升高,细胞活力及迁移能力降低,DDR1、p-NF-κB、NLRP3及细胞焦亡相关蛋白表达均明显升高,且LDH、IL-1β、IL-18水平及细胞焦亡率均增加(P<0.05)。与HG组相比,DDR1siRNA能够促进eNOS分泌,降低VCAM-1、ICAM-1、LDH、IL-1β、IL-18水平,增加细胞活力和迁移能力,降低p-NF-κB、NLRP3及细胞焦亡相关蛋白表达,抑制高糖诱导的HU VECs焦亡(P<0.05)。结论基因沉默DDR1能够改善高糖诱导的血管内皮细胞功能障碍,其机制与抑制NF-κB/NLRP3信号通路介导的细胞焦亡相关。

内皮细胞凋亡与勃起功能障碍的研究进展

勃起功能障碍(ED)是泌尿男科最常见的疾病之一,严重影响患者的生活质量,引起ED的因素包括衰老、糖尿病、高血压、高脂血症以及不良生活方式等,其确切机制尚未完全明确。目前随着对ED研究的不断深入,其中阴茎海绵体内皮细胞凋亡与ED的关系倍受关注,内皮细胞凋亡增加可引起NOS活性降低导致NO合成受阻,从而影响阴茎勃起,不同病因引起的ED其内皮细胞凋亡的机制不同。本文就阴茎海绵体内皮细胞凋亡在ED中的作用作一综述,对ED与内皮细胞凋亡机制的深入了解将为新药研制及其他治疗措施提供新的思路。

线粒体功能障碍在青光眼视网膜神经节细胞凋亡中的作用

目的探讨青光眼视神经损伤中线粒体功能改变及其在视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡中的作用。方法在标准大气压环境(100 kPa;1 kPa=7.5 mmHg)下,利用压力装置额外予以70 mmHg的气体压力培养RGC-5细胞,按照不同培养时间将RGC-5细胞分为12 h组、24 h组、48 h组。并将标准大气压下培养的RGC-5细胞设为空白组。通过Annexin V/PI染色检测细胞凋亡,JC-1染色及DCFH-DA荧光探针染色分别检测RGC-5细胞线粒体膜电位(MMP)及细胞内活性氧(ROS)水平。Western blot检测细胞内B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)蛋白、BCL-2相关X蛋白(BAX)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3)及胞质内细胞色素C(Cyt C)蛋白的表达变化。结果与空白组相比,12 h组、24 h组、48 h组细胞内MMP均显著下降(均为P<0.05)。与空白组相比,24 h组、48 h组细胞凋亡率、ROS水平均显著增加(均为P<0.05),12 h组细胞凋亡率、ROS水平差异均无统计学意义(均为P>0.05)。与空白组相比,24 h组、48 h组细胞内cleaved Caspase-3及BAX蛋白相对表达量均显著增加,差异均有统计学意义(均为P<0.05),12 h组细胞内cleaved Caspase-3、BAX蛋白相对表达量差异均无统计学意义(均为P>0.05)。与空白组相比,12 h组、24 h组、48 h组细胞内BCL-2蛋白相对表达量均显著下降,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与空白组相比,48 h组胞质内Cyt C蛋白相表达量显著增加(P<0.05),12 h组、24 h组胞质内Cyt C蛋白相对表达量差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论RGC-5细胞在70 mmHg压力下培养后,表现出细胞凋亡增加及线粒体功能障碍。压力损伤早期线粒体损伤机制可能与外源性细胞凋亡途径密切相关。

参麦注射液对非ST抬高型急性心肌梗死内皮功能障碍及细胞凋亡因子的干预作用

目的:探讨参麦注射液对非ST抬高型急性心肌梗死内皮功能障碍及细胞凋亡因子的干预作用。方法:选择急性非ST段抬高型心肌梗死保守治疗患者,采用随机法分两组,各30例。均给予常规标准化药物治疗,治疗组再予参麦注射液,对照组予等量生理盐水,疗程相同;检测并比较两组患者各时间段血氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)、血管性血友病因子(vWF)、血浆可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)变化。结果:1与治疗前相比,两组患者用药3天、用药1周时,ox-LDL水平均显著下降,治疗组用药1周时ox-LDL水平下降更为明显(P<0.05);2与治疗前相比,两组患者用药1天、用药3天、用药1周时,vWF均显著下降,治疗组用药1周时vWF下降更为明显(P<0.05);3与治疗前相比,治疗组用药3天及1周时,sICAM-1水平显著下降,对照组仅在用药1周时水平下降显著,治疗组用药1周时vWF下降更为明显(P<0.05)。结论:在常规标准化药物治疗基础上联合运用参麦注射针剂治疗,有助于改善急性非ST抬高型心肌梗死患者血管内皮损伤与凋亡。

CTCFL/RPS3A通过抑制内质网应激减少神经元细胞凋亡缓解阿尔兹海默症大鼠认知功能障碍实验研究

目的:探究RPS3A在阿尔兹海默症(AD)中的作用及其分子机制。方法:通过将Aβ注射到大鼠双侧海马区,构建AD模型。采用RPS3A的腺病毒载体(Ad-RPS3A)注射AD大鼠,饲养14 d后通过水迷宫测试评估大鼠的学习与记忆能力,通过Y迷宫测试评估大鼠的空间探索能力。此外,采用RPS3A的过表达载体(RPS3A)、shRNA(sh-RPS3A)、CTCFL的过表达载体(CTCFL)、shRNA(sh-CTCFL)分别转染神经元HT22细胞48 h,然后采用30μmol/L的Aβ处理细胞24 h。使用JASPAR预测CTCFL在RPS3A启动子的结合,并通过Ch-IP分析和荧光素酶报告基因分析进行验证。RT-qPCR检测过表达和沉默效率;Western blot检测RPS3A和CTCFL蛋白,以及内质网应激相关蛋白和凋亡相关蛋白表达水平;CCK-8和流式细胞术分别检测细胞活力和细胞凋亡率。结果:与假手术组相比,AD模型组大鼠海马组织中RPS3A的mRNA和蛋白水平显著下调。Aβ诱导的HT22细胞中RPS3A蛋白表达显著下调;过表达RPS3A促进HT22细胞增殖,抑制Aβ诱导的细胞凋亡,降低Cleaved caspase-3和Bax蛋白表达,促进Bcl-2蛋白表达,抑制内质网应激相关蛋白CRP78、CHOP、ATF6和XBP1表达,降低IRE1和PERK磷酸化水平。机制研究显示CTCFL通过与RPS3A启动子区结合,促进RPS3A转录激活。过表达CTCFL促进RPS3A蛋白表达;而沉默CTCFL作用相反。体内结果显示,过表达RPS3A降低AD大鼠抵达平台的时间、到达平台距离以及第一次进入SW区的时间,增加大鼠自发交替率和进入新异臂次数的比值,改善Aβ诱导的AD大鼠的学习与记忆能力障碍和空间探索能力障碍。结论:CTCFL介导的RPS3A通过内质网应激诱导神经元细胞凋亡,促进阿尔兹海默病小鼠的认知功能障碍。

降糖舒心方联合达格列净对慢性心衰合并2型糖尿病患者血管内皮功能与心肌细胞凋亡的影响

2型糖尿病对慢性心衰的发生、发展有促进作用,能够显著增加慢性心衰发病率和病死率,两者易呈共病状态[1]。因此,降糖药物的选择,不仅要发挥理想的控糖效应,亦能协同治疗心功能不全、降低并发症,进一步改善患者远期预后[2-3]。达格列净作为钠-葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT-2)抑制剂,不依赖胰岛β细胞即可发挥作用,还具有抑制交感和醛固酮系统激活、降低肾小球囊内压等多维机制[4]。近年来,中医理论针对糖尿病以及心血管疾病的研究提出了“消渴胸痹”等病名,认为瘀血与痰浊是该病重要的两种病理因素,治疗以益气养阴、补气活血、祛痰化瘀为主[5]。血管内皮作为多功能的内分泌、旁分泌及自分泌器官,不仅具有调节细胞黏附、平滑肌迁移的作用,同时还有抗炎症和氧化应激等效应[6]。长期临床实践证实,虽然2型糖尿病的发生、慢性心衰的发展受多重因素的共同作用,但是内皮功能失调可促进内分泌疾病与心血管事件的发生,其可能是两者最终的共同通路[7-8]。基于此,本课题组拟采用降糖舒心方联合达格列净对慢性心衰合并2型糖尿病患者进行治疗,并探讨其具体作用,以期为临床治疗此类患者提供参考。

miR-145-5p在原发性高血压患者血清中的表达及其对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的探究miR-145-5p在原发性高血压(EH)患者血清中的表达及对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和凋亡的影响。方法以2019年1月至2022年3月于山西医科大学汾阳学院就诊的160例EH患者及160例同期体检正常者为研究对象,RT-qPCR检测EH患者及同期体检正常者血清中的miR-145-5p表达水平。体外培养HUVEC,将之分为对照组、miR-145-5p mimic组、mimic-NC组、miR-145-5p inhibitor及inhibitor-NC组,CCK-8法检测各组HUVEC增殖情况;AnnexinV-FITC/PI双染法检测各组HUVEC凋亡情况;Western blot检测各组HUVEC增殖、凋亡相关蛋白[增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B细胞淋巴瘤/白血病基因-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)]表达情况。结果miR-145-5p在EH患者血清中的表达水平明显低于体检正常者(P<0.05);与对照组、mimic-NC组比较,miR-145-5p mimic组HUVEC细胞增殖率及PCNA、Cyclin D1蛋白表达均增加,早期凋亡率、晚期凋亡率及Bax、Caspase-3蛋白表达均减少(P<0.05);与对照组、inhibitor-NC组比较,miR-145-5p inhibitor组HUVEC细胞增殖率及PCNA、Cyclin D1蛋白表达均减少(P<0.05),早期凋亡率、晚期凋亡率及Bax、Caspase-3蛋白表达均增加(P<0.05)。结论miR-145-5p在EH患者血清中呈低表达,过表达miR-145-5p可促进HUVEC增殖并抑制其凋亡。

神经调节蛋白4对2型糖尿病小鼠主动脉内皮细胞凋亡的影响

目的探讨神经调节蛋白4(Nrg4)对2型糖尿病小鼠主动脉内皮细胞凋亡的影响。方法将C57小鼠分为对照(Vehicle)组、糖尿病(DM)组和Nrg4干预糖尿病小鼠(Nrg4)组。Nrg4组腹腔注射Nrg4重组蛋白(100μg/kg,3次/周),Vehicle组与DM组小鼠注射等量生理盐水,干预周期均为8周。实验结束后,TUNEL荧光染色检测主动脉内皮细胞凋亡,Western blot检测主动脉内皮组织凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及Cleaved-caspase 3的表达。结果与Vehicle组相比,DM组主动脉内皮细胞凋亡率明显升高[(33.0±5.4)%vs.(20.5±3.0)%;P<0.05],促凋亡蛋白Bax与凋亡执行蛋白Cleaved-caspase 3表达明显增多,抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著减少(P<0.05);而Nrg4干预明显抑制糖尿病小鼠主动脉内皮细胞凋亡[(19.2±3.8)%vs.(33.0±5.4)%;P<0.05],降低Bax与Cleaved-caspase 3的表达并促进Bcl-2表达(P<0.05)。结论Nrg4干预能缓解2型糖尿病小鼠主动脉内皮细胞凋亡。

晚期糖基化终末产物受体在波动性高糖致人冠状动脉内皮细胞凋亡中的作用

目的研究持续性高糖(CHG)和波动性高糖(IHG)环境下,人冠状动脉内皮细胞(HCAECs)的细胞凋亡情况,并探索HCAECs细胞凋亡是否由晚期糖基化终末产物受体(RAGE)介导发生。方法取对数生长期的HCAECs分为4组:①正常血糖组(CNG组,5 mmol/L葡萄糖);②持续性高糖组(CHG组,20 mmol/L葡萄糖);③波动性高糖组(IHG组,5 mmol/L和20 mmol/L葡萄糖每8 h波动1次);④波动性甘露醇对照组(IM组,5 mmol/L和20 mmol/L甘露醇每8小时波动1次,保持与波动性高糖相同的波动性渗透压环境)。不同条件处理后的HCAECs,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞活力,流式细胞术检测HCAECs细胞凋亡情况,Westernblot检测Caspase-3、RAGE的蛋白表达水平变化,qRT-PCR检测RAGE的转录水平变化情况。用靶向RAGE的shRNA慢病毒敲低HCAECs中RAGE的表达量,观察IHG中Caspase-3的活化表达情况。结果与CNG组相比,CHG组和IHG组细胞活力均降低(P<0.05),但IHG组细胞活力更低(P=0.035);IHG组细胞凋亡率增加(P=0.028),Caspase-3活化状态(P=0.037)和RAGE表达量显著增加(P<0.05)。用靶向RAGE的shRNA慢病毒敲低RAGE表达水平,发现波动性高糖导致的细胞凋亡情况得到明显改善(P<0.05)。结论波动性高糖可通过增强RAGE表达,促进细胞凋亡,引起HCAECs损伤。

基于相关细胞凋亡途径探讨补肾健脾方调控大鼠卵巢储备功能减退的机制研究

目的观察补肾健脾方对环磷酰胺诱导的卵巢储备功能减退大鼠模型卵巢功能的影响,并基于肿瘤坏死因子诱导相关细胞凋亡途径探讨补肾健脾方调控大鼠卵巢储备功能减退的机制研究。方法60只动情周期正常的健康雌性SD大鼠,随机分成正常组10只和造模组50只,造模组采用环磷酰胺75 mg/kg单次腹腔注射造模。造模成功的大鼠再随机分为模型组、西药组[戊酸雌二醇0.103 mg/(kg·d)+黄体酮胶囊2.575 mg/(kg·d)]、补肾健脾方低剂量组[3.21 g/(kg·d)]、补肾健脾方中剂量组[6.43 g/(kg·d)]、补肾健脾方高剂量组[12.85 g/(kg·d)],每组10只。正常组及模型组均予等体积蒸馏水灌胃,每组干预1次/d,干预14 d。检测各组大鼠动情周期、体质量、卵巢脏器指数、子宫脏器指数;ELISA法检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)含量;免疫荧光法检测大鼠卵巢颗粒细胞内B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)蛋白表达情况;HE染色检测卵巢组织病理情况;Western blot法检测卵巢磷酸化蛋白激酶B(posphorylated-proteinkinase B,p-AKT)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mammalian target of rapamycin,p-mTOR)、自噬蛋白苄氯素-1(Beclin-1)表达情况。结果与正常组比较,模型组大鼠动情周期紊乱,可见卵巢结构紊乱、各级卵泡数量不同程度的减少、未见成熟卵泡,卵巢间质中见到明显炎细胞浸润;大鼠体质量、卵巢脏器指数和子宫脏器指数无明显变化;血清TNF-α、IFN-γ水平升高(P<0.05,P<0.01);卵巢颗粒细胞Bcl-2、Bax、Beclin-1蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01),p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平降低(P<0.01)。与模型组比较,西药组及补肾健脾方低、中剂量组血清TNF-α、IFN-γ水平降低(P<0.05,P<0.01);补肾健脾方中剂量组Bax蛋白表达水平降低(P<0.05);补肾健脾方高剂量组Bcl-2蛋白阳性表达升高(P<0.05);西药组、补肾健脾方低剂量组Beclin-1蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01),p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平升高(P<0.01)。与西药组比较,补肾健脾方高剂量组TNF-α水平升高(P<0.01);补肾健脾方低、高剂量组IFN-γ水平降低(P<0.05);补肾健脾方低剂量组Bax蛋白表达水平升高(P<0.05),补肾健脾方中剂量组Bcl-2蛋白水平表达升高(P<0.05);补肾健脾方中、高剂量组Beclin-1蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01),p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平降低(P<0.01)。结论补肾健脾方可改善卵巢病理变化、提高卵巢储备功能,其机制可能通过抑制肿瘤坏死因子TNF-α、IFN-γ表达,增强Bcl-2蛋白表达水平,降低Bax蛋白表达水平,激活mTOR通路抑制大鼠卵巢颗粒细胞的自噬与凋亡,从而改善环磷酰胺造模所致的大鼠卵巢储备功能减退的影响。

卷曲螺旋结构域蛋白2通过促进线粒体自噬抑制帕金森病SH-SY5Y细胞凋亡

背景:卷曲螺旋结构域蛋白2(coiled-coil-helix-coiled-coil-helix domain-containing 2,CHCHD2)能否调控PINK1/Parkin介导的线粒体自噬在帕金森病中发挥神经保护作用尚未可知。目的:探讨CHCHD2在6-羟基多巴胺诱导的帕金森病细胞模型中对PINK1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬发挥的作用及机制。方法:利用重组质粒转染技术过表达或敲低CHCHD2,用6-羟基多巴胺构建SH-SY5Y细胞帕金森病模型后分对照组、模型组、过表达阴性对照+6-羟基多巴胺组、敲低阴性对照+6-羟基多巴胺组、过表达CHCHD2+6-羟基多巴胺组和敲低CHCHD2+6-羟基多巴胺组。Western blot及RT-qPCR检测CHCHD2的表达;Western blot检测LC3Ⅰ/Ⅱ、p62、MFN1、COXⅣ、DRP1、PINK1、Parkin、TIM23、Bax、Bcl-2及cleavedcaspase3蛋白表达;CCK-8、JC-1和活性氧试剂盒检测细胞活性、线粒体膜电位和活性氧水平,单丹磺酰尸胺染色观察细胞自噬情况,透射电镜观察自噬溶酶体。结果与结论:①与对照组相比,模型组细胞活性、线粒体膜电位及CHCHD2、PINK1、Parkin蛋白表达降低,活性氧水平、凋亡水平及LC3Ⅰ/Ⅱ、p62蛋白表达升高(P<0.05),并观察到自噬溶酶体的存在;②与模型组相比,过表达CHCHD2能降低细胞活性氧水平,升高线粒体膜电位及PINK1、Parkin和MFN1蛋白表达水平,并观察到线粒体自噬溶酶体增多,而敲低CHCHD2后有与上述相反的作用,并伴有COXⅣ、TIM23和p-DRP1蛋白表达的升高(P<0.05);③与模型组相比,过表达CHCHD2能减少细胞凋亡,上调Bcl-2并下调Bax及cleavedcaspase3蛋白的表达,而敲低CHCHD2后有与上述相反的作用(P<0.05);④结果提示,CHCHD2在6-羟基多巴胺诱导的帕金森病细胞模型中可以通过促进PINK1/Parkin介导的线粒体自噬改善线粒体功能从而减轻细胞凋亡发挥神经保护作用。

益气复脉注射液对非ST抬高型急性心肌梗死内皮功能障碍及细胞凋亡因子影响的研究

目的:初步验证益气复脉注射液对非ST抬高型急性心肌梗死内皮功能障碍及细胞凋亡因子的影响。方法:采用随机临床对照方法,将198例符合标准的患者按数字表法随机分为对照组99例,治疗组99例。对照组为标准药物治疗,治疗组为在对照组基础上联合益气复脉注射液,共7 d。对比两组临床疗效,及采用酶联免疫吸附试验检测患者血清血氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)、血浆可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、血管性血友病因子(vWF)水平。结果:与对照组比较,治疗组总有效率为90.9%优于对照组总有效率79.8%(P<0.05)。同时治疗组在第7天时血清ox-LDL、sICAM-1、vWF表达明显降低ox-LDL(356.73±51.39)μg/L、(428.56±55.52)μg/L;sICAM-1(136.24±21.57)ng/L、(173.47±25.36)ng/L。vWF(112.76±15.59)%、(136.46±15.38)%(均P<0.05)。结论:益气复脉注射液可抑制非ST抬高型急性心肌梗死患者血管内皮损伤与细胞凋亡因子,进而改善患者临床症状。

高糖环境下XIST对人视网膜血管内皮细胞凋亡的影响

目的:探讨高糖环境下长链非编码RNA X-非活性特异转录本(XIST)对人视网膜血管内皮细胞凋亡的影响及可能机制。方法:以人视网膜血管内皮细胞为研究对象,设对照组和高糖组,分析高糖对人视网膜血管内皮细胞XIST表达的影响;设对照组、高糖组、高糖+XIST组、高糖+阴性对照组,分析过表达XIST对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞增殖和凋亡的影响;设对照组、高糖组、高糖+XIST组、高糖+XIST+pcDNA3.1-Wnt1组、高糖+XIST+pcDNA3.1-CON组,分析XIST通过Wnt1/β-catenin通路对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞增殖和凋亡的影响。结果:(1)高糖组XIST相对表达量较对照组低(P<0.05)。(2)与对照组比,高糖组细胞增殖活力低,而凋亡率、Wnt1和β-catenin水平高(P<0.05);与高糖+阴性对照组比,高糖+XIST组增殖活力高,而凋亡率、Wnt1和β-catenin水平低(P<0.05)。(3)与对照组比,高糖组细胞增殖活力低,而凋亡率高(P<0.05);与高糖组比,高糖+XIST组增殖活力高,而凋亡率低(P<0.05);与高糖+XIST+pcDNA3.1-CON组比,高糖+XIST+pcDNA3.1-Wnt1组增殖活力低,而凋亡率高(P<0.05)。结论:XIST通过负调控Wnt1/β-catenin通路抑制高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞凋亡。

缺血后处理对心肌缺血再灌注大鼠心功能、心肌细胞凋亡和心肌组织线粒体凋亡相关分子表达的影响

目的分析缺血后处理(ischemic postconditioning,IP)对心肌缺血再灌注(ischemia-reperfusion,IR)大鼠心功能、心肌细胞凋亡和心肌组织线粒体凋亡相关分子表达的影响。方法将40只8周龄雄性SD大鼠分笼喂养,每笼5只,适应性饲养7 d,随机分为空白对照组(对照组)、假手术组(S组)、心肌IR造模组(IR组)、心肌IP造模+IP处理组(IP组),每组各10只。术后4 h使用生物机能实验系统记录大鼠心功能[左心室收缩压(left ventricular systolic pressure,LVSP)、心室舒张末压(left ventricular enddiastolic pressure,LVEDP)、左心室压变化速率最大值(±dp/dtmax)]。采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数,采用RT-PCR法检测心肌细胞凋亡相关蛋白BCL-2、BAX及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cysteinylaspartate-specific proteinase 3,Caspase-3)、法尼酯衍生物X受体(farnesyl X receptor,FXR)、小异二聚体配体(small heterodimer partner,SHP)相对表达量。蛋白质印迹法检测心肌细胞线粒体凋亡通路标志物细胞色素C(cytochrome C,Cyt-C)的释放量。结果IP组及IR组LVEDP、心肌细胞凋亡指数、心肌组织BAX、CASPASE-3、FXR、SHP相对表达量及心肌细胞胞浆Cyt-C蛋白灰度值均高于S组、对照组(P<0.05),IR组LVEDP、心肌细胞凋亡指数、BAX、CASPASE-3、FXR、SHP相对表达量及Cyt-C蛋白灰度值高于IP组(P<0.05);IP组及IR组LVSP、±dp/dtmax、心肌组织BCL-2相对表达量均低于S组、对照组(P<0.05),IR组LVSP、±dp/dtmax、心肌组织BCL-2相对表达量均低于IP组(P<0.05)。结论IP处理可减轻大鼠心肌IR损伤,改善心功能,可能与调控BCL-2/BAX、FXR/SHP等凋亡相关信号蛋白的表达有关。

基于Fas/FasL信号通路探索舒芬太尼对急性心肌梗死大鼠心功能和心肌细胞凋亡的影响

目的基于脂肪酸合成酶(Fas)/脂肪酸合成酶配体(FasL)信号通路探索舒芬太尼对急性心肌梗死(AMI)大鼠心功能和心肌细胞凋亡的影响。方法选择健康雄性SD大鼠108只,适应性饲养7天,随机分为对照组、模型组、舒芬太尼低剂量组、舒芬太尼高剂量组、舒芬太尼高剂量+Fas阴性对照组、舒芬太尼高剂量+Fas慢病毒组,每组18只。模型组、舒芬太尼低剂量组、舒芬太尼高剂量组、舒芬太尼高剂量+Fas阴性对照组、舒芬太尼高剂量+Fas慢病毒组通过冠状动脉左前降支结扎法制作AMI模型;对照组除不结扎冠状动脉左前降支外,其余步骤与AMI模型相同。舒芬太尼低剂量组和舒芬太尼高剂量组分别于AMI模型制作成功后腹腔注射0.1、1µg/kg舒芬太尼。舒芬太尼高剂量+Fas阴性对照组和舒芬太尼高剂量+Fas慢病毒组分别于AMI模型制作成功后腹腔注射1µg/kg舒芬太尼,尾静脉注射200 nmol/kg NC shRNA慢病毒或Fas shRNA慢病毒。对照组和模型组腹腔注射等量生理盐水。术后72 h,采集大鼠尾静脉血,采用ELISA法检测血清肌钙蛋白T;采用超声心动图检测左心室射血分数(LVEF)、左心室缩短分数(LVFS)、左心室舒张末期内径(LVEDd)和左心室收缩末期内径(LVESd)。待大鼠心功能检测完成后,腹主动脉取血,采用ELISA法检测血清TNF-α、IL-6。所有大鼠断头处死,留取心脏,随机取6只大鼠的心脏组织,TTC染色,计算心肌梗死面积;随机取6只大鼠的心脏组织,HE染色,观察心肌组织病理形态变化,采用TUNEL法检测细胞凋亡情况;取剩余6只大鼠的心脏组织,采用Western blotting法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3及Fas/FasL信号通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,模型组血清肌钙蛋白T水平升高,LVEDd、LVESd升高,LVEF、LVFS降低,血清TNF-α、IL-6水平升高,心肌梗死面积增大,细胞凋亡率及Bax、Caspase-3、Fas、FasL蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达下降(P均<0.05);与对照组比较,模型组心肌细胞形态模糊、纹理消失、排列紊乱、心肌间小血管扩张、细胞数量减少,可见大量炎性细胞浸润。与模型组比较,舒芬太尼低剂量组和舒芬太尼高剂量组血清肌钙蛋白T水平降低,LVEDd、LVESd降低,LVEF、LVFS升高,血清TNF-α、IL-6水平降低,心肌梗死面积减小,细胞凋亡率及Bax、Caspase-3、Fas、FasL蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(P均<0.05);与模型组比较,舒芬太尼低剂量组和舒芬太尼高剂量组心肌细胞形态、纹理、排列、血管扩张、细胞数量及炎性细胞浸润显著改善。以舒芬太尼高剂量组上述效果改善较为明显。与舒芬太尼高剂量+Fas阴性对照组比较,舒芬太尼高剂量+Fas慢病毒组血清肌钙蛋白T水平升高,LVEDd、LVESd升高,LVEF、LVFS降低,血清TNF-α、IL-6水平升高,心肌梗死面积增大,细胞凋亡率及Bax、Caspase-3、Fas、FasL蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(P均<0.05);与舒芬太尼高剂量+Fas阴性对照组比较,舒芬太尼高剂量+Fas慢病毒组心肌细胞形态模糊、纹理消失、排列紊乱、心肌间小血管扩张、细胞数量减少,炎性细胞浸润明显。结论舒芬太尼可改善AMI大鼠心功能,抑制心肌细胞凋亡,并且1µg/kg舒芬太尼的作用效果要优于0.1µg/kg舒芬太尼;抑制Fas/FasL信号通路激活可能是舒芬太尼改善AMI大鼠心功能的作用机制之一。

基于内皮细胞功能障碍探讨糖尿病微血管病变“微型癥瘕”病机理论的科学内涵

基于中医理论及当前科学研究发现,糖尿病微血管病变内皮细胞功能障碍与中医“微型癥瘕”病机理论存在着深刻的联系。糖尿病热伤气阴,病久入络后可致血脉气血阴阳亏虚,人体正气亏虚,瘕聚阶段无形可查;持续进展可致痰、热、郁、瘀痼结于络脉形成癥积而有形可征。国医大师吕仁和教授称之为“微型癥瘕”病机理论,其中正气亏虚是瘕聚发生的基础,痰热郁瘀是癥积形成的关键,这与微血管在内皮细胞功能异常的基础上进一步进展至结构改变,最终导致糖尿病微血管内皮细胞功能障碍的病理过程相一致。内皮细胞功能异常与结构改变可视为正气亏虚及痰热郁瘀的微观体现,共同诠释糖尿病微血管病变“微型癥瘕”病机理论的科学内涵。此认识可为中医药防治糖尿病微血管病变提供新的研究角度和方向,为临床和科研的开展提供充分的理论支撑。

中药调控大鼠卵巢颗粒细胞凋亡干预早发性卵巢功能不全的机制研究

目的探讨中药对早发性卵巢功能不全(POI)大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法动情周期规律的SD大鼠随机分为空白组、模型组、补佳乐组、中药(补肾养精颗粒)低、中、高剂量组。灌胃雷公藤多苷混悬液(50mg·kg^(-1))14d建立POI大鼠模型,并给予不同药物灌胃治疗。干预14d后HE染色观察卵巢组织病理变化;ELISA检测血清FSH、E_(2)、AMH水平;免疫组化检测卵巢组织Bax表达水平。提取大鼠原代卵巢颗粒细胞,HE染色及FSHR染色鉴定卵巢颗粒细胞,显微镜下观察不同时间点不同组卵巢颗粒细胞的生长状态;Western blot检测各组颗粒细胞Caspase-9、Caspase-3、Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果与空白组相比,模型组大鼠血清FSH水平升高,E_(2)、AMH水平下降(P均<0.01);各级卵泡数量减少,闭锁卵泡数增加;卵巢组织Bax表达水平上升(P<0.01)。干预后各治疗组闭锁卵泡数下降,血清FSH水平下调,E_(2)、AMH水平上调(P均<0.01),卵巢组织Bax表达水平下降(P<0.01)。经HE染色及FSHR染色鉴定机械法提取的大鼠原代卵巢颗粒细胞纯度较高,空白组颗粒细胞提取量最多,细胞贴壁生长,形态为长梭形或多角形;模型组颗粒细胞数量最少,细胞贴壁状态及细胞形态欠佳,易脱落;其余各组颗粒细胞数量较模型组有不同程度增加,细胞生长状态同空白组相似。与空白组相比,模型组颗粒细胞Caspase-9、Caspase-3、Bax的蛋白表达显著上升(P<0.01或P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平下降(P<0.05);各治疗组的Caspase-9、Caspase-3、Bax蛋白表达水平有不同程度的下调(P<0.01或P<0.05);Bcl-2蛋白表达上调(P<0.05)。结论中药可下调血清FSH水平,上调E2、AMH水平,下调卵巢颗粒细胞中Caspase-9、Caspase-3、Bax表达,上调Bcl-2表达,抑制卵巢颗粒细胞凋亡,减少卵泡闭锁,促进卵泡发育。

实验性糖尿病大鼠认知功能障碍与额叶皮质、海马细胞凋亡关系的研究

目的探讨糖尿病(DM)大鼠认知功能与额叶皮质和海马神经元凋亡的关系。方法电迷宫法测试28只DM大鼠(DM组)和30只正常大鼠(NC组)学习能力,并检测额叶皮质和海马发生凋亡的神经元数目和bcl-2、Bax基因表达。结果DM组大鼠学习能力明显下降,额叶皮质和海马细胞凋亡数高于NC组,bcl-2表达减少,而Bax表达增加。DM组大鼠达到学会标准所需训练次数与额叶皮质和海马细胞凋亡数呈正相关,而NC组大鼠两者无相关性。结论高血糖状态下额叶皮质与海马凋亡调节基因表达改变引起的细胞凋亡增加可能与糖尿病认知功能障碍有关。