氧化苦参碱对高糖诱导乳鼠原代心肌成纤维细胞转分化的作用及机制

目的探讨氧化苦参碱(OMT)对高糖(HG)诱导乳鼠原代心肌成纤维细胞(CFBs)增殖和转分化的作用及机制。方法Sprague-Dawley(SD)乳鼠20只,取乳鼠心脏的心尖部分分离与培养原代CFBs,取对数生长期CFBs细胞分为空白(Control)组、40 mmol/L甘露醇(Mannitol)组、不同浓度(30、35、40、45及50 mmol/L)HG组及不同浓度(25、50、100、200、400 mg/L)OMT组,采用噻唑蓝比色法(MTT)法检测细胞的增殖情况并确定后续实验OMT的保护浓度;按前述OMT的保护浓度结果,取对数生长期CFBs细胞分为空白(Control)组、40 mmol/L甘露醇(Mannitol)组、40 mmol/L HG(HG)组、40 mmol/L HG+50 mg/L OMT(OMT低剂量)组、40 mmol/L HG+100 mg/L OMT(OMT中剂量)组及40 mmol/LHG+200 mg/L OMT(OMT高剂量)组,采用天狼星红和苏木素-伊红(HE)染色法观察各组细胞的胶原纤维表达及形态变化,采用羟脯氨酸(Hyp)试剂盒检测法和免疫荧光染色法检测各组细胞Hyp及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,采用流式细胞术检测各组细胞的周期分布比例,采用Western blot检测CFBs中α-SMA、结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)、血管内皮生长因子A(VEGFA)及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白的表达。结果与HG组相比,50、100及200 mg/L OMT组CFBs细胞活力下降(P<0.05);与HG组相比,50、100及200 mg/L OMT组CFBs细胞形态发生变化,细胞数量变少;与HG组相比,50、100及200 mg/L OMT组CFBs内Hyp含量减少,细胞在S期分布比例降低(P<0.05);与Control组相比,HG组CFBs细胞数量增多,α-SMA表达增多;与HG组相比,50、100及200 mg/L OMT组CFBs细胞数量减少,α-SMA表达减少;与HG组相比,50、100及200 mg/L OMT组HIF-1α、VEGFA、α-SMA、CTGF、CollagenⅠ、CollagenⅢ及FN表达下调(P<0.05)。结论OMT可抑制乳鼠CFBs增殖并诱导细胞转分化,其机制可能与调节HIF-1α信号相关。

基于巨噬细胞-肌成纤维细胞转分化的肾间质纤维化病理机制及药物干预作用

在肾间质纤维化过程中,骨髓中募集的巨噬细胞可在损伤的肾脏中直接转化为肌成纤维细胞。巨噬细胞-肌成纤维细胞转分化(MMT)是肾间质纤维化的重要病理机制之一。在MMT过程中,巨噬细胞的活化受转化生长因子-β1、Janus激酶3/信号转导及转录活化因子6、Wnt等信号通路调控,阻断这些信号通路可抑制MMT,改善肾间质纤维化。在临床及体内外实验中,针对防治肾纤维化的药物干预研究较活跃,其中某些药物的干预作用可能与巨噬细胞及MMT相关。因此,深入研究肾脏MMT的病理机制及药物干预作用可以为相关疾病的治疗提供新思路。

巨噬细胞向肌成纤维细胞转化促进LPS诱导的急性肺损伤模型小鼠肺纤维化

目的探讨巨噬细胞向肌成纤维细胞转化(MMT)在脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤小鼠肺纤维化过程中的作用。方法将21只小鼠分为7组:对照组、不同时间点LPS诱导小鼠早期肺纤维化(LPS-PF)模型组和不同时间点氯磷酸二钠脂质体(CL-LIP)干预组(n=3)。用HE、Masson染色评估各组肺纤维化程度;用免疫荧光检测MMT过程中CD68和α-平滑肌动蛋白(α-SMA)共标记阳性细胞数量。骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)分为对照(Ctrl)组和转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激组(n=3);用RT-qPCR检测各组α-SMA、纤连蛋白(FN)、人I型胶原蛋白(Col1)表达水平。用Western blot检测各组间α-SMA以及Smad同源物3(Smad3)、磷酸化的Smad3(p-Smad3)蛋白表达量。结果LPS-PF模型小鼠肺组织第7天Ashcroft评分较对照(Ctrl)组显著增高(P<0.01);但在CL-LIP组中肺纤维化程度较LPS-PF组明显减轻(P<0.05)。肺组织免疫荧光染色发现,CL-LIP组CD68α-SMA共标记阳性细胞数较LPS-PF组对应时间点明显减少(P<0.01)。体外实验中,TGF-β1刺激组48 h、96 h后α-SMA、FN、Col1较对应时间点表达量明显增加(P<0.01)。检测体内、体外实验中Smad3、p-Smad3的蛋白表达量,发现LPS-PF组(第7天、第10天)和TGF-β1刺激组(48 h和96 h)均较各自对照(Ctrl)组明显增加(P<0.01)。结论MMT具有促进LPS诱导模型小鼠肺纤维化的作用,其转化过程可能经Smad3调节。

托法替布通过JAK/STAT3通路抑制肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化

目的:研究泛Janus激酶(Janus kinase,JAK)抑制剂托法替布(tofacitinib)对转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)诱导的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的作用及机制,为临床治疗结缔组织病相关的间质性肺疾病提供理论依据。方法:(1)体外培养人胚胎肺成纤维细胞(human fetal lung fibroblast 1,HFL-1),设立6个组,分别为DMSO空白对照组、TGF-β1诱导组、TGF-β1联合不同浓度托法替布(0.5、1.0、2.0、5.0μmol/L)药物干预实验组。采用CCK-8法检测细胞活力,划痕愈合实验检测细胞迁移能力。(2)采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-PCR)、蛋白免疫印迹实验(Western blotting)检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ,COL1)基因及蛋白的表达水平。应用RT-PCR和酶联免疫吸附试验检测各组白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的基因和细胞培养上清液中的蛋白水平。(3)在不同组的细胞培养基中加入DMSO载体对照,以1.0μmol/L和5.0μmol/L的托法替布预培养30 min,然后加入TGF-β1处理1 h、6 h和24 h。以Western blotting检测Smad2/3、信号传导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)的蛋白磷酸化水平。结果:(1)托法替布抑制TGF-β1诱导的HFL-1细胞活力及迁移能力。(2)与空白对照组相比,TGF-β1诱导组HFL-1的α-SMA、COL1A1和FN1基因表达显著上调(P<0.05)。5.0μmol/L托法替布干预组的α-SMA基因表达与TGF-β1诱导组相比显著下调(P<0.05)。0.5~5.0μmol/L托法替布各干预组与TGF-β1诱导组相比均可抑制FN1基因表达(P<0.05)。各干预组与TGF-β1诱导组相比,COL1A1基因的表达无明显变化。(3)Western blotting结果提示,TGF-β1诱导组细胞α-SMA、FN1蛋白水平较对照组显著增加(P<0.05),COL1A1表达未见明显差异。托法替布不同浓度干预组与TGF-β1诱导组相比,α-SMA蛋白表达均有下降,其中2.0μmol/L和5.0μmol/L干预组与诱导组间的差异有统计学意义(P<0.05)。托法替布不同浓度干预组的FN1蛋白水平均有下降,但与TGF-β1诱导组相比差异无统计学意义。各干预组的COL1A1蛋白表达与TGF-β1诱导组相比差异无统计学意义。(4)TGF-β1诱导48 h,HFL-1细胞中IL-6基因及培养上清液中IL-6的表达水平较对照组显著升高,各浓度托法替布干预组与TGF-β1诱导组相比均有所降低。TGF-β1诱导1 h、6 h和24 h,STAT3蛋白磷酸化水平增加,托法替布预刺激抑制了6 h时Smad2/3的磷酸化水平,在1 h、6 h和24 h时均抑制了STAT3的磷酸化水平。结论:托法替布能抑制TGF-β1诱导的HFL-1细胞向肌成纤维细胞方向转化,其机制可能是通过抑制Smad2/3经典通路以及抑制TGF-β1所诱导的STAT3磷酸化,从而对肺纤维化疾病进展发挥保护作用。

酸性成纤维细胞生长因子调控Ang1/Tie2信号通路抑制炎症促进血管内皮细胞功能恢复

目的:探讨酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)功能的影响,以及Ang1/Tie2通路在其中的作用。方法:培养HUVEC细胞,不同浓度脂多糖(LPS)和aFGF刺激HUVEC,CCK-8实验确定刺激浓度,并观察生长活性;细胞划痕实验检测aFGF对HUVEC迁移能力的影响;Westernblot实验检测增殖蛋白PCNA,凋亡蛋白Cleavedcaspase3、Bax,抗凋亡蛋白Bcl2,炎症相关蛋白NLRP3、IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-4和IL-10,血管生成相关蛋白CD31和通路相关蛋白Ang1、Tie2的表达水平;免疫荧光实验检测PCNA、Cleavedcaspase3、IL-6、IL-10以及CD31的荧光强度。分离小鼠主动脉,离体培养后进行免疫荧光实验,观察PCNA、Cleavedcaspase3、IL-6、IL-10以及CD31蛋白的荧光强度。结果:CCK-8实验显示LPS抑制HUVEC生长活性,5μg/mL为最适刺激浓度(P<0.01);aFGF促进HUVEC生长活性,其中100ng/mL为最适刺激浓度(P<0.01)。细胞划痕实验提示aFGF促进细胞迁移。Westernblot和免疫荧光实验结果显示,aFGF促进增殖蛋白和血管功能蛋白表达,抑制凋亡蛋白和炎症蛋白表达,上调Ang1/Tie2通路蛋白(P<0.05)。离体血管免疫荧光实验显示aFGF上调PCNA、IL-10以及CD31的荧光强度,下调Cleavedcaspase3和IL-6的荧光强度(P<0.05)。结论:aFGF增强HUVEC生长活性和迁移能力,促进其增殖,抑制其凋亡,并通过调控Ang1/Tie2通路抑制炎症反应,促进血管功能修复。

皮肤纤维化疾病中肌成纤维细胞来源的研究进展

典型的皮肤纤维化疾病包括增生性瘢痕、瘢痕疙瘩、硬皮病等。该类疾病以肌成纤维细胞过度激活和细胞外基质沉积为特征,可导致永久性瘢痕和器官功能损伤,严重影响患者身心健康。肌成纤维细胞在皮肤纤维化疾病中起到了核心作用。目前研究表明,成纤维细胞、内皮细胞、周细胞、巨噬细胞等细胞可在经历促纤维化的介质等多因素的诱导、皮肤纤维化相关信号通路的激活、形态学和生化特征的改变、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)等肌成纤维细胞标记物的表达等过程后,转化为肌成纤维细胞。靶向这些细胞转化的过程有望成为调控皮肤纤维化疾病进展的新治疗策略。本文重点围绕皮肤纤维化疾病中肌成纤维细胞来源的相关进展作一综述。

iRoot BP Plus应用于年轻恒牙血运重建术对患者牙根发育及龈沟液血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、白细胞介素-8、白细胞介素-1β水平的影响

目的:探讨iRoot BP Plus应用于年轻恒牙血运重建术对牙根发育及龈沟液血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平的影响。方法:选取88例年轻恒牙血运重建术患儿作为研究对象,按照随机数字表法将其分为对照组(44例,44颗牙)和试验组(44例,44颗牙)。对照组使用无机三氧化物聚合物(MTA)作为填充材料,试验组选择iRoot BP Plus作为填充材料,两组术后均随访1年。比较两组随访1年后的疗效、牙根发育情况,术前、随访1年后的牙根长度、根管壁厚度、咬合功能、咀嚼功能、疼痛程度、牙周指数,术前、术后1周的龈沟液VEGF、bFGF、IL-8、IL-1β水平及随访期间的不良反应发生情况。结果:随访1年后,试验组总有效率及牙根发育Ⅰ型患儿占比分别为95.45%、47.73%,高于对照组的79.55%、25.00%(均P<0.05)。与术前比较,随访1年后,两组牙根长度、根管壁厚度增加,试验组高于对照组(均P<0.05);两组咬合功能、咀嚼功能、视觉模拟评分法(VAS)、牙周袋深度(PD)、牙龈指数(GI)、龈沟出血指数(SBI)、菌斑指数(PLI)评分降低,试验组低于对照组(均P<0.05)。与术前比较,术后1周,两组龈沟液VEGF、bFGF水平升高,试验组高于对照组(均P<0.05);两组龈沟液IL-8、IL-1β水平降低,试验组低于对照组(均P<0.05)。随访期间,试验组不良反应总发生率为4.55%,低于对照组的22.73%(P<0.05)。结论:与MTA比较,iRoot BP Plus应用于年轻恒牙血运重建术中可调节患儿龈沟液VEGF、bFGF、IL-8、IL-1β水平,减轻炎症,促进牙根生长发育,并可减轻患儿疼痛程度,改善咬合功能、咀嚼功能及牙周状况,进而有利于提高疗效,且具有较好的安全性。

A型肉毒杆菌毒素抑制大鼠牙龈肌成纤维细胞作用的体外研究

研究A型肉毒杆菌毒素(BTXA)对大鼠牙龈肌成纤维细胞的抑制作用,探究控制扭转牙正畸术后复发可能的方法。方法 体外分离、培养大鼠牙龈成纤维细胞,观察TGF-β1+BTXA诱导干预下,牙龈成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的情况,同时分别设置阴性对照组,牙龈FB组;阳性对照组,TGF-β1诱导牙龈肌成纤维细胞组进行对照。TGF-β1和TGF-β1+BTXA两组分别诱导72小时后收样,然后检测Western-blot、RT-PCR、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的免疫组化等相关指标。结果 经过原代培养干预之后但是没有经过诱导处理的大鼠模型其牙龈成纤维细胞α-SMA表达为阴性,提示没有显著的成纤维细胞表达出现。使用TGF-βl进行诱导处理之后,α-SMA表达为阳性,且水平较高,提示成功诱导,同时也表明成纤维细胞会转化为肌成纤维细胞。而后又再次使用BTXA进行干预,α-SMA表达为阳性,但是与TGF-βl诱导组相比的表达量显著更低,提示BTXA干预能够对成纤维细胞会转化为肌成纤维细胞这一过程产生抑制作用。结论 BTXA对能够抑制牙龈当中的肌成纤维细胞功能蛋白α-SMA,减少其功能表达。提示可以采用BTXA抑制肌成纤维细胞的出现和持续表达,从而减少局部牙龈组织的张力,降低扭转牙复发的可能性,但是具体抑制机制还需进一步深入研究。

高糖通过转化生长因子β信号诱导肾小球内皮细胞向肌成纤维细胞转分化

目的探讨高糖（HG）能否通过转化生长因子β（TGF—β）途径诱导大鼠肾小球内皮细胞向肌成纤维细胞转分化（EndMT）。方法体外培养大鼠肾小球内皮细胞（GEnC），分为正常对照组（NG，5．5mmol／L）、高糖组（HG，15、30mmol／L）、TGF—B抑制剂组（HG＋LY36，30mmol／L葡萄糖＋10μmol／LLY364947）以及高渗对照组（M，5．5mmol／L葡萄糖＋25．5mmol／L甘露醇）和溶剂对照组（D，5．5mmol／L葡萄糖＋1ml／LDMSO）。采用Western印迹法检测各组细胞内皮细胞标志物claudin5和肌成纤维细胞标志物α-SMA表达变化；实时定量PCR法检测细胞TGF—β1和TGF—β2mRNA表达改变；免疫荧光法观察细胞形态学变化以及血管内皮细胞标志物VE—cadherin和肌成纤维细胞标志物α—SMA的表达。结果与NG组比较，HG组claudin5蛋白的表达量随葡萄糖浓度增加而降低（P〈0．05），α－SMA蛋白表达量随葡萄糖浓度增加而升高（P〈0．05），TGF-β1和TGF—β2mRNA表达均升高（P〈0．05）。与HG组比较，TGF－β抑制剂组claudin5蛋白表达量升高（P〈0．05），α—SMA蛋白表达降低（P〈0．05）。高渗对照组和溶剂对照组改变差异无统计学意义。激光共聚焦免疫荧光结果显示，高糖处理可引起细胞形态由卵圆形向梭形改变，VE－cadherin表达减少，α－SMA表达增加；TGF－β抑制剂组细胞形态无明显改变。与HG组比较，TGF－β抑制剂组VE—cadherin表达增加，α—SMA表达降低（P〈0．05）。结论高糖诱导大鼠肾小球内皮细胞TGF－β表达增加及内皮细胞－肌成纤维细胞转分化。抑制TGF—β可抑制高糖引起的转分化，提示TGF—β参与了高糖引起的肾小球内皮细胞转分化过程。

靶向成纤维细胞生长因子受体1信号改善类风湿关节炎的骨破坏

背景:尽管科研人员已注意到成纤维细胞生长因子受体1在类风湿关节炎骨破坏中展现出巨大潜力,但尚未有学者对成纤维细胞生长因子受体1在类风湿关节炎骨破坏中的研究进展作全面综述。目的:通过查阅国内外相关文献,综合分析成纤维细胞生长因子受体1在类风湿关节炎骨破坏中的机制。方法:以“成纤维细胞生长因子受体1,类风湿关节炎,骨破坏,骨细胞,成骨细胞,破骨细胞,软骨细胞,巨噬细胞,滑膜成纤维细胞,T细胞,血管内皮细胞”为检索词检索中国知网数据库,以“fibroblast growth factor receptor 1,rheumatoid arthritis,bone destruction,osteocytes,osteoblasts,osteoclasts,chondrocytes,macrophages,synovial fibroblasts,T cells,endothelial cells”为检索词检索PubMed数据库,检索时间范围重点为1992年4月至2024年1月。通过阅读文献题目、摘要及全文,根据纳入与排除标准进行筛选,最后纳入82篇文献进行综述。结果与结论:成纤维细胞生长因子受体1广泛表达于骨组织相关细胞,包括骨细胞、成骨细胞、破骨细胞等,可以通过调控这些细胞的功能来影响骨重塑过程和维持骨稳态,促进类风湿关节炎骨破坏的发生和发展。成纤维细胞生长因子受体1还可以在滑膜成纤维细胞和巨噬细胞中参与炎症反应,在内皮细胞中调控滑膜血管生成,从多个方面促进骨破坏。成纤维细胞生长因子受体1可能是类风湿关节炎骨破坏的一个重要参与因素,为进一步研究类风湿关节炎治疗靶点提供依据。

巨噬细胞转分化在肾纤维化中的调控机制

肾纤维化是所有进展性慢性肾病发展至终末期肾病的共同病理改变。肾移植术后发生肾纤维化会严重影响移植肾功能。巨噬细胞具有高度的异质性和可塑性,在肾损伤过程中,受局部微环境刺激被募集、激活和极化,通过多种机制参与肾组织损伤、修复和纤维化的过程。近年来,多项研究表明,巨噬细胞可以转分化为肌成纤维细胞直接参与肾纤维化形成,这一过程被称为巨噬细胞-肌成纤维细胞转分化,但其调控机制尚不清楚。因此,本文就巨噬细胞在肾纤维化中的作用、巨噬细胞-肌成纤维细胞转分化的特点及可能的调控机制进行综述,以期为肾纤维化的相关研究提供参考。

LncRNA FEZF1-AS1靶向调控miR-200c-3p对人肺成纤维细胞生物学行为的影响

目的探讨FEZ家族锌指1-反义RNA1(LncRNA FEZF1-AS1)靶向调控miR-200c-3p对人肺成纤维细胞HLF生物学行为的影响。方法采用转化生长因子β1(TGF-β1)诱导HLF向肌成纤维细胞转化,分为空白对照组(Blank组)和造模组(HLF+TGF-β1组),另根据转染质粒不同将细胞分为Blank组、TGF-β1+Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组和TGF-β1+Si LncRNA FEZF1-AS1组。采用Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)和波形蛋白(Vimentin)蛋白的表达。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LncRNA FEZF1-AS1和miR-200c-3p的表达。采用CCK-8法检测细胞增殖,细胞划痕实验检测迁移能力,Transwell实验检测侵袭能力;采用双萤光素酶实验检测FEZF1-AS1与miR-200c-3p的靶向作用关系。结果与Blank组比较,HLF+TGF-β1组α-SMA、CollagenⅠ、Vimentin蛋白表达及LncRNA FEZF1-AS1表达水平升高,miR-200c-3p表达水平降低(P<0.05);与TGF-β1+Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组比较,TGF-β1+Si LncRNA FEZF1-AS1组细胞增殖、迁移、侵袭能力下降,LncRNA FEZF1-AS1表达及α-SMA、CollagenⅠ、Vimentin蛋白表达水平降低,miR-200c-3p表达水平升高(P<0.05);FEZF1-AS1与miR-200c-3p基因序列上存在结合位点。结论LncRNA FEZF1-AS1通过抑制miR-200c-3p促进特发性肺间质纤维化的发生、发展。

负载成纤维细胞3D打印甲基丙烯酰化明胶水凝胶支架的体外促血管化

背景:将种子细胞与3D生物打印技术相结合可特异性地构建各种组织和器官以满足组织修复的需求,但对于损伤组织促血管化的有关研究仍有待深入。目的:通过培养负载成纤维细胞的甲基丙烯酰化明胶水凝胶支架获得上清液并与完全培养基按不同比例混合,以模拟组织修复过程中的细胞微环境,探究多种细胞微环境对内皮细胞促血管化的作用。方法:采用挤压式3D生物打印工艺制备负载成纤维细胞的甲基丙烯酰化明胶水凝胶支架,制备水凝胶支架浸提液;将水凝胶支架浸提液与完全培养基按照1∶1、1∶2、1∶4的体积比混合获得条件培养基。将小鼠胚胎成纤维细胞BALB3T3、人脐静脉内皮细胞分别与完全培养基(对照组)、水凝胶支架浸提液共培养,采用CCK-8法检测细胞增殖,活/死细胞染色分析细胞活性。采用3种条件培养基与完全培养基(对照组)分别与人脐静脉内皮细胞共培养,进行成管实验、血管基因检测与CD31免疫荧光染色。结果与结论:①扫描电镜下可见水凝胶支架呈多孔性结构,流变学结果显示该水凝胶具有良好的机械性能,CCK-8检测与活/死细胞染色显示该水凝胶支架浸提液无明显的细胞毒性。②成管实验显示,1∶1条件培养基组细胞成管总长度小于对照组(P<0.05),4组细胞成管分支数比较差异无显著性意义(P>0.05)。③qRT-PCR检测显示,对于血管内皮生长因子mRNA表达,培养第1天,1∶2条件培养基组低于1∶1条件培养基组(P<0.01);培养第3天,1∶2条件培养基组高于对照组(P<0.01);培养第5天,1∶2条件培养基组高于其他3组(P<0.01或P<0.0001),1∶1条件培养基组低于其他3组(P<0.05或P<0.01)。对于碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达,培养第1天,1∶1条件培养基组高于对照组、1∶4条件培养基组(P<0.01,P<0.05),1∶2条件培养基组高于对照组(P<0.05);培养第3天,1∶4条件培养基组高于对照组(P<0.05)。④培养第3天,1∶2条件培养基组CD31表达高于对照组、1∶4条件培养基组(P<0.05)。⑤结果表明该条件培养基可模拟组织损伤后血管再生微环境,进而促进内皮细胞的血管化进程,并且1∶2条件培养基促血管化效果最好。

转化生长因子β1诱导皮肤成纤维细胞向肌成纤维细胞表型转分化的机制研究

目的:探讨TGF-β1诱导皮肤成纤维细胞(FB)向肌成纤维细胞转分化的可能途径和调控机制。方法:将野生型和Smad3基因敲除(KO)型小鼠皮肤FB分为9组:野生型FB组、野生型FB+TGF-β1组、野生型FB+SB431542组、野生型FB+SB431542+TGF-β1组、Smad3KOFB组、Smad3KOFB+TGF-β1组、野生型FB+SB203580+TGF-β1组、野生型FB+PD98059+TGF-β1组和野生型FB+SP600125+TGF-β1组。各组细胞经同步化处理后,直接以TGF-β1刺激或经上述各激酶抑制剂预处理后再以TGF-β1刺激。收集细胞,一部分以单细胞RT-PCR检测α-SMA阳性表达百分比,另一部分细胞抽提总RNA后采用实时荧光定量RT-PCR检测α-SMA的表达水平变化。结果:Smad3KO组与SB431542组的α-SMA表达水平和阳性百分比显著升高(Smad3KOFB组vs野生型FB组;野生型FB+SB431542+TGF-β1组vs野生型FB+SB431542组;Smad3KOFB+TGF-β1组vsSmad3KOFB组,P<0.01),而SB203580组和SP600125组中α-SMA表达水平和阳性百分比升高的作用则被显著抑制(野生型FB+SB203580+TGF-β1组、野生型FB+SP600125+TGF-β1组vs野生型FB+TGF-β1组,P<0.05)。结论:在TGF-β1诱导成纤维细胞向肌成纤维细胞的转分化过程中,Smad3途径介导抑制作用,而p38/MAPK、JNK/MAPK途径则介导正向调节作用。

诱导心脏肌成纤维细胞向心肌样细胞转分化的miRNA

背景:微小RNA(miRNA)是一类非编码小分子RNA,miRNA参与调控基因表达,在促进前体细胞增殖与分化中发挥了重要的作用。miRNA是否可促进前体细胞向心肌细胞的分化则鲜见报道。目的:验证转入特定miRNA(miRNA-1、miRNA-499)诱导新生小鼠心脏肌成纤维细胞转分化为心肌样细胞的可行性。方法:体外培养新生小鼠心脏成纤维细胞,常氧培养传代至P2;37℃低氧(体积分数3%O2)培养48 h;免疫荧光染色检测心脏成纤维细胞特异性标记物波形蛋白的表达,免疫荧光染色、流式细胞技术检测心脏成纤维细胞向心脏肌成纤维细胞表型转化的标记物α-平滑肌激动蛋白的表达。实验分为4组:miRNA-1转染组、miRNA-499转染组、miRNA-1/miRNA-499共转染组及空白对照组,采用miRNA芯片检测心脏肌成纤维细胞与心肌细胞中微小RNA的表达差异;real-time qPCR方法验证芯片检测结果。结果与结论:心脏肌成纤维细胞中过表达miR-1、miR-499后,心脏发育不同阶段特异性因子发生不同程度的表达变化,与空白对照组相比,其余3组GATA4、Tbx5、Mef-2c、α-MHC表达明显增高,Mesp1、Isl1表达均无显著变化。结果表明,特定miRNAs可诱导心脏肌成纤维细胞表达心肌细胞特异性性标志物,具备诱导心脏肌成纤维细胞向心肌细胞直接转分化的潜力。

沙利度胺抑制TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞系转分化为肌成纤维细胞

目的研究沙利度胺(THD)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(HFL-F)向肌成纤维细胞(MF)转分化和对已分化MF的作用。方法体外培养HFL-F,以TGF-β1(5μg/L)诱导HFL-F向MF转分化,通过碱水解法测定羟脯氨酸含量(HYP),免疫印迹法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,半定量RT-PCR测定α-SMAmRNA和Ⅲ型胶原(COLⅢ)mRNA,观察THD(50μg/L)对HFL-F向MF转分化的过程及已分化MF的影响。结果TGF-β1诱导HFL-F 96 h,诱导分化同时加入THD可抑制HYP含量增高和COLⅢ mRNA表达上调(P<0.05),可抑制α-SMA蛋白表达增加,但对于α-SMA mRNA表达没有影响。TGF-β1诱导HFL-F 96 h后再加入THD可抑制COLⅢ mRNA的表达(P<0.05),但对HYP含量、α-SMA蛋白表达量和α-SMA mRNA表达无明显影响。结论TGF-β1可诱导HFL-F向MF转分化,THD可抑制这一过程中α-SMA蛋白与胶原合成。对TGF-β1诱导下已分化的MF,THD可抑制其COLⅢ mRNA的表达。

瘦素促进肺成纤维细胞向肌纤维母细胞的转分化

目的探讨瘦素对肺成纤维细胞向肌纤维母细胞转分化的影响及其作用机制。方法体外培养HFL-1人胚肺成纤维细胞，用（0—200）ng／mL重组人瘦素（rHL）干预或联合转化生长因子β1（TGF-β1）处理HFL-1细胞，Western blot法测定α平滑肌肌动蛋白（OL．SMA）、蛋白激酶B（AKT）、磷酸化的AKT（p-AKT）的表达。CCK-8法测定细胞增殖，ELISA测定细胞上清液1型胶原蛋白含量。结果（50、100、200）ng／mL的rHL处理HFL-1细胞48h，α-SMA的蛋白表达水平均较对照组明显上调；与200ng／mL rHL或5ng／mLTGF—β1单独处理的细胞相比，200ng／mL rHL和5ng／mLTGF-β1联合处理HFL-1细胞48h，HFL-1细胞α-SMA蛋白表达水平显著上调。rHL能够上调HFL-1细胞P-AKT的表达，LY294002可抑制rHL对HFL-1细胞α-SMA表达的诱导作用。与对照组相比，（12．5、25、50、100、200）ng／mL作用72h，细胞存活率无显著性差异。（50—200）ng／mLrHL作用48h，细胞上清液中1型胶原蛋白含量明显升高。结论瘦素能够促进肺成纤维细胞向肌纤维母细胞转分化，其作用机制与激活P13K／AKT信号通路有关。

重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液联合聚乙二醇滴眼液治疗白内障术后干眼症患者的效果

目的:观察重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液联合聚乙二醇滴眼液治疗白内障术后干眼症患者的效果。方法:选取2020年4月至2022年10月该院收治的72例白内障术后干眼症患者进行前瞻性研究,按照随机数字表法将其分为对照组和观察组各36例。对照组予以聚乙二醇滴眼液治疗,观察组在对照组基础上联合重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液治疗,两组均持续治疗1个月。比较两组临床疗效,治疗前后角膜内皮细胞功能指标(角膜内皮细胞密度、角膜内皮细胞面积变异系数)水平、泪膜破裂时间(BUT)、泪液分泌试验(SIT)水平、氧化应激指标[脂质过氧化物(LPO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)]水平,以及不良反应发生率。结果:观察组治疗总有效率为94.44%(34/36),高于对照组的75.00%(27/36),差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组角膜内皮细胞面积变异系数小于对照组,角膜内皮细胞密度大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组BUT、SIT水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组MDA、LPO水平均低于对照组,SOD水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液联合聚乙二醇滴眼液治疗白内障术后干眼症患者可提高治疗总有效率和BUT、SIT水平,改善角膜内皮细胞功能,减轻氧化应激反应,效果优于单纯聚乙二醇滴眼液治疗。

内皮素在诱导人气管上皮下成纤维细胞转分化中的作用

目的:探讨ET-1在诱导气道上皮下成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞过程中的作用及其信号与离子机制。方法:将人气道上皮下成纤维细胞或种植在胶原凝胶中的成纤维细胞与经机械划伤加细菌脂多糖(LPS)刺激(L+M)的人气道上皮细胞株(16HBE)共培养,并加入ET受体A(ETRA)阻断剂BQ123或p38MAPK、ERK1/2丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)特异性抑制剂,观察成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况与收缩反应性,以及p38MAPK、ERK1/2信号通路的活化及其对α-SMA表达的影响;经钙离子荧光探针(Fluo-3/AM)负载,应用激光共聚焦显微镜观察成纤维细胞胞内钙的动态变化。结果:损伤的气道上皮细胞诱导了上皮下成纤维细胞转分化为表达α-SMA、具有显著收缩反应能力的肌成纤维细胞,BQ123对其有一定的抑制效应;p38MAPK、ERK1/2的特异性阻断剂(SB203580、PD98059)可钝化损伤上皮对成纤维细胞α-SMA表达的诱导作用。添加外源性ET-1增加成纤维细胞α-SMA表达并诱导p38MAPK、ERK1/2信号通路的活化;同时,引起胞内钙水平的迅速上升。结论:损伤的气道上皮细胞通过释放ET-1能够诱导上皮下成纤维细胞转分化为具有收缩反应性的肌成纤维细胞,p38MAPK、ERK1/2信号通路介导了这一过程,ET-1增强成纤维细胞Ca2+内流可能是启动其转分化的早期事件。

葫芦巴总皂苷对心肌成纤维细胞转分化的影响及机制的实验研究

目的探讨葫芦巴总皂苷（Trigonellafoenumgreacum．LSaponin，TFGs）对尾加压素Ⅱ（UrotensinII，UII）诱导体外培养的大鼠心肌间质成纤维细胞（CFs）发生肌成纤维细胞转分化的干预作用及相关分子机制．方法体外培养大鼠心肌间质成纤维细胞，随机分为正常对照组、UⅡ刺激组和TFGs干预组．正常对照组在整个培养过程中未加任何刺激；uⅡ刺激组加入10“mol／L的尾加压素Ⅱ培养，并分别终止培养于12，24和48h；TFGs干预组将UⅡ作为刺激因素，分别加入终浓度为0，25，50，100和200mg／L的TFGs．应用免疫荧光和免疫组化方法检测显示d—SMA的表达，应用RT—PCR和免疫印迹法分别检测结缔组织生长因子（CTGF）的基因及蛋白表达．结果免疫荧光检测显示，培养24h后，正常对照组细胞胞浆中仅有少量仅．SMA表达，而仅．SMA表达量在经uⅡ作用后明显增多．尾加压素Ⅱ干预CFs不同时间后（12，24，48h），免疫组化显示仪-SMA表达量逐渐增加．UⅡ的这种诱导CFs发生肌成纤维细胞转分化作用可被含TFGs的培养液所抑制，且呈浓度和时问依赖性．与对照组比较，UⅡ刺激组的CTGF的基因及蛋白表达均明显增高（P〈0．01）．而TFGs则可以抑制UⅡ诱导的CTGF基因及蛋白表达量的上调（P〈0．01）．结论尾加压素Ⅱ具有诱导大鼠心肌问质成纤维细胞发生肌成纤维细胞转分化的作用，此作用可能与其促进CTGF的基因及蛋白表达有关．葫芦巴总皂苷能有效地抑制大鼠CFs的转分化，并且下调UⅡ诱导的CTGF的过表达．这进一步明确UⅡ在心肌纤维化发生、发展中的作用，也为临床应用葫芦巴总皂苷防治心肌纤维化提供了实验依据．