三七总皂苷通过激活PPARα/Nrf2减轻内皮细胞屏障和功能损伤

目的研究三七总皂苷(PNS)对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的内皮细胞屏障和功能损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法使用OGD/R诱导bEnd.3细胞以建立缺血再灌注损伤模型,同时设立对照组(Control)、模型组(OGD/R)、PNS高剂量组(OGD/R+PNS 400μg/mL)、PPARα抑制剂组(OGD/R+PNS 400μg/mL+PPARαinhibitor)和Nrf2抑制剂组(OGD/R+PNS 400μg/mL+Nrf2 inhibitor)。采用CCK-8检测bEnd.3细胞活性损伤,LDH试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)表达,蛋白印迹法检测ZO-1、claudin-5、occludin表达;采用细胞划痕和细胞侵袭实验检测bEnd.3细胞侵袭和迁移的水平;借助小管形成实验检测bEnd.3细胞小管形成能力。结果PNS通过激活过氧化物酶体增殖物激活受体α/核因子E2相关因子2(PPARα/Nrf2)信号减轻OGD/R诱导的bEnd.3细胞活性损伤和内皮屏障损伤,抑制细胞迁移和侵袭能力,改善血管生成损伤。结论PNS通过激活PPARα/Nrf2信号减轻OGD/R诱导的内皮细胞屏障和功能损伤。

肺微血管内皮细胞屏障功能损伤与急性呼吸窘迫综合征

急性呼吸窘迫综合征（ARDS）是急性呼吸衰竭发生的主要原因，其特征是弥漫性的肺泡损伤，伴透明膜形成，肺泡腔高蛋白性水肿、毛细血管损伤和肺泡上皮破裂，它最突出的临床表现为顽固的低氧血症。尽管在最佳的通气支持和液体平衡的治疗改善后，它仍有很高的死亡率及短、长期的并发症。因此，对这种综合征的早期识别和治疗性干预措施的早期应用至关重要。本综述描述了肺微血管内皮细胞（PMVECs）屏障功能损伤与ARDS发生、发展的相互关系。具体来说是描述了ARDS定义、PMVECs的屏障功能，以及在ARDS的发生、发展时PMVECs的通透性改变，异常凋亡、分泌和功能失调，以期深入探讨ARDS可能的病理生理学机制。

红霉素改善百草枯致损血管内皮细胞屏障功能的分子机制

目的观察红霉素对百草枯所致血管内皮细胞屏障功能损伤的保护作用,并探讨可能的分子机制。方法采用"二室弥散装置"体外培养人脐静脉内皮细胞。设立百草枯组(P)、百草枯+红霉素组(P+E)、正常对照组(N),利用免疫荧光、放射免疫法分别检测各种因素下单层血管内皮细胞屏障对大分子物质的通透性变化;内皮细胞骨架蛋白F-actin形态分布以及含量变化;内皮细胞内cAMP浓度的变化。结果P组24 h后内皮细胞通透性较其它两组高(P<0.05或P<0.01),且随时间延长逐渐升高(P<0.01),引起细胞骨架F-actin重构和含量增加(P<0.05),同时伴内皮细胞内cAMP浓度降低(P<0.05);而P+E组细胞通透性24 h内升高,但36 h后明显改善(P<0.01),胞浆内F-actin逐渐减少,细胞周边增多,48 h细胞轮廓逐渐清晰,cAMP浓度也随时间延长而升高(P<0.01)。P组和P+E组内皮细胞通透率与细胞内cAMP浓度均呈负相关(r=-0.913,-0.648,P<0.05),而与F-actin含量变化均呈正相关(r=0.921,0.817,P<0.05)。结论红霉素能降低细胞通透性,升高内皮细胞cAMP浓度,稳定细胞骨架,这可能是改善百草枯致损血管内皮细胞屏障功能的机制。

S1P信号通路:上皮细胞和内皮细胞屏障功能调控的新靶点

1-磷酸鞘氨醇(S1P)是一种具有多种生物活性的鞘脂类代谢产物,通过激活G蛋白偶联受体S1PRs调节重要的生理功能。S1P是维持上皮细胞和内皮细胞屏障功能重要的信号分子,S1P信号通路通过调节黏附连接和紧密连接组装、细胞骨架重排、黏着斑形成,发挥对屏障功能的调控作用,因此S1P信号通路可能成为改善急性肺损伤、炎症性肠病和败血症等疾病中屏障功能紊乱的新靶点。本文对S1P信号通路在上皮细胞和内皮细胞屏障功能调控中的作用及其在屏障功能破坏相关性疾病模型中的保护作用的研究进展进行综述,以期为开发治疗屏障功能破坏相关性疾病的新药提供理论参考。

血管内皮细胞屏障功能的血流动力学调控及其与动脉粥样硬化的关系

动脉粥样硬化是心脑血管疾病的重要病理基础。内衬于血管的内皮细胞是血管壁与血流之间的一道具有选择通透性的屏障,对于维持血管内环境稳态发挥重要作用。血管内皮屏障功能的紊乱是动脉粥样硬化发生发展的重要环节之一。近年的研究表明血流动力学能明显影响血管内皮细胞屏障功能。扰动流和振荡流等异常血流形态能改变血管内皮的通透性,甚至形成动脉内膜破裂。本文通过聚焦内皮细胞内外侧的物质交换、动脉内膜破裂方面的最新研究成果,评述血流动力学变化对血管内皮细胞屏障功能的影响,讨论了值得进一步深入研究的领域,以期为进一步阐明动脉粥样硬化发生发展机制以及有效防治策略的选择提供一个新的思路。

探讨“天麻-红景天”药对调控TNF-α/NF-κB保护低灌注-脑小血管病模型小鼠内皮细胞屏障的作用机制

目的 探讨“天麻-红景天”药对通过调控肿瘤坏死因子-α(TNF-α)/核因子κB(NF-κB),保护低灌注-脑小血管病小鼠内皮细胞屏障的作用机制。方法 将70只雄性C57BL/6小鼠分为假手术组、模型组、天麻-红景天1~3组(天麻与红景天质量比分别为1∶1、2∶1、1∶2),每组14只。采用单侧颈总动脉闭塞法制备脑小血管病小鼠模型。术后6 h灌胃1次,之后每24 h灌胃1次,天麻-红景天1~3组小鼠给药剂量分别为1.30、1.95、1.95 g/(kg·d),假手术组、模型组小鼠灌胃等体积生理盐水。在实验第3天(急性期)、第7天(亚急性期)进行脑血流量和行为学检测后取材。激光散斑衬比成像观察脑血流量的变化;步态分析仪评价运动协调能力;HE染色观察脑组织病理形态学变化;蛋白质印迹法检测白蛋白的表达水平;免疫荧光法和蛋白质印迹法检测咬合蛋白(Occludin)和闭锁连接蛋白-1(ZO-1)的表达水平;实时荧光PCR和蛋白质印迹法检测TNF-α、NF-κB、白细胞介素-β(IL-β)、白细胞介素-6(IL-6)的表达水平。结果 与假手术组比较,第3、7天模型组小鼠脑血流量降低(P<0.05);出现摆动时长延长、步频减少、步态平衡性降低(P<0.05)的步态异常情况;脑组织病理损伤严重,白蛋白表达水平升高,Occludin和ZO-1蛋白表达水平下降(P<0.05);TNF-α、NF-κB、IL-β、IL-6 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05)。与模型组比较,第3、7天天麻-红景天各组小鼠脑血流量升高(P<0.05);摆动时长缩短、步频增加、步态平衡性升高(P<0.05);脑组织病理损伤减轻,白蛋白表达水平降低(P<0.05),Occludin和ZO-1蛋白表达水平升高(P<0.05);TNF-α、NF-κB、IL-β、IL-6的mRNA及蛋白表达降低(P<0.05)。其中,天麻-红景天2组在第3天综合疗效较好,天麻-红景天3组在第7天综合疗效更佳。结论 “天麻-红景天”药对能提高低灌注-脑小血管病小鼠脑血流量,改善步态异常,减轻脑组织病理损伤,保护内皮细胞屏障的功能和结构,其机制可能与降低炎症因子表达有关。

TNF-α和LPS对体外培养血脑屏障内皮细胞胞浆内钙离子浓度的影响

目的观察脂多糖 (Lipopolysaccharid ,LPS)和肿瘤坏死因子α(Tumornecrosisfactor -α ,TNF -α)对血脑屏障内皮细胞 (Blood_brainbarrierendothelialcell,BBBEC)胞浆内钙离子浓度(plasmicinnerconcentrationofcalcium ,[Ca2 +]i)的影响。方法用Fluo -3/AM做为荧光探针对钙离子进行负载 ,激光扫描共聚焦显微镜观察不同浓度LPS和TNF -α刺激下BBBEC胞浆内钙离子浓度的变化。结果在TNF -α刺激下 ,单个BBBEC[Ca2 + ]i呈浓度依赖性的一过性升高。不同浓度TNF -α引起的BBBECCa2 + 的荧光强度达高峰的时间基本一致 ,高峰荧光强度和荧光持续时间随TNF -α浓度的升高而增加。低浓度LPS(1μg/ml和10μg/ml)刺激细胞时 ,BBBEC[Ca2 +]i无明显变化 ,高浓度LPS刺激细胞时 ,可见[Ca2 +]i呈短暂性升高 ,随后下降。结论TNF -α和LPS在极短的时间内导致BBBEC[Ca2 + ]i的升高 ,激活BBBEC ,这一过程是缺血性脑损伤极早期的重要病理机制之一。

阿司匹林对丙酮醛引起的人血脑屏障内皮细胞损伤的影响

目的探讨阿司匹林对丙酮醛(MGO)引起的人血脑屏障内皮细胞(hCMEC/D3)损伤的影响及调控机制。方法首先,观察WST-1试剂盒检测含不同浓度MGO(0.1~10 mmol/L)或阿司匹林(0.1~1 mmol/L)的培养液处理24 h对细胞活力的影响。然后,将实验细胞分组处理:对照组(培养液加入对应体积的DMSO或去离子水)、MGO处理组(培养液加入1 mmol/L的MGO)、MGO联合阿司匹林处理组(培养液加入1 mmol/L的MGO和不同浓度的阿司匹林),培养24 h后,试剂盒检测细胞活力、Caspase-3活性、活性氧(ROS)水平,Western blot检测LC3Ⅰ、LC3Ⅱ表达情况。结果不同浓度的MGO处理细胞24 h后,细胞活力随MGO浓度提高而逐步降低,当MGO浓度达到1 mmol/L时,细胞活力为(79.72±5.01)%,与0 mmol/L MGO组的(100.00±2.45)%比较差异有统计学意义(P<0.05);不同浓度的阿司匹林处理细胞24 h后,阿司匹林浓度依赖性降低细胞活力,当阿司匹林浓度为0.5 mmol/L或1 mmol/L时,细胞活力为分别为(87.72±3.36)%和(81.55±2.85)%,与0 mmol/L阿司匹林组相比,差异有统计学意义(P<0.05);MGO联合阿司匹林处理进一步降低细胞活力,MGO联合0.5 mmol/L或1 mmol/L阿司匹林处理组,细胞活力分别为(67.33±6.47)%和(59.40±5.12)%,与MGO处理组的(80.16±3.50)%相比,差异均有统计学意义(P<0.05);MGO处理组的Caspase-3活性为(112.38±4.62)%,较对照组的(100.00±2.32)%有所升高,但差异无统计学意义(P>0.05);MGO联合1 mmol/L阿司匹林处理组,Caspase-3活性为(133.13±7.23)%,与对照组或MGO处理组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,MGO处理组ROS阳性的细胞数明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05);MGO联合不同浓度阿司匹林处理组ROS阳性的细胞数较MGO处理组均进一步增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,MGO处理组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达比值上升至4.7倍,然而阿司匹林能够完全抑制MGO引起的LC3Ⅱ表达增加。结论阿司匹林加重丙酮醛引起的h CMEC/D3损伤,这可能与其提高细胞氧化应激水平以及抑制细胞自噬有关。

1-磷酸鞘氨醇调控血管功能在动脉粥样硬化中的研究进展

在日常生活中,高血压、代谢综合征、吸烟和缺乏运动等条件可能诱发血管内皮细胞障碍^([1]),具体表现为内皮舒张功能受损、血管通透性增加、氧化应激和炎症等病理现象^([2]),正常内皮细胞的一个关键功能是防止血管黏附,内皮屏障异常导致内膜中形成包括各种细胞、脂质和组织碎屑在内的斑块,推动动脉粥样硬化的发展^([1])。

1-磷酸鞘氨醇对大鼠急性坏死性胰腺炎肺损伤保护作用

目的探讨1-磷酸鞘氨醇(S1P)对大鼠急性坏死性胰腺炎肺损伤(ANP-LI模型组)的保护作用及机制。方法36只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、S1P处理组(S1P组)。3组动物于术后6h留取标本作如下实验:(1)测定血清淀粉酶和血脂肪酶。(2)测定左肺组织髓过氧化物酶(MPO)。(3)行左肺组织病理学检查。(4)取左肺进行肺泡灌洗测定蛋白含量;细胞沉淀涂片行白细胞和中性粒细胞计数。(5)行胰腺组织病理学检查。结果S1P组在造模后6h,肺组织MPO水平、肺泡灌洗液蛋白含量、肺泡灌洗液白细胞及中性粒细胞计数均显著低于模型组(均为P<0.01);肺组织病理组织学改变显著减轻。与模型组比,S1P组血清淀粉酶、脂肪酶及胰腺病理无明显改变。结论S1P对大鼠ANP-IL有明显的保护作用;其有可能作为临床治疗的有效手段。

基于RhoA/ROCK信号通路研究消渴通痹方含药血清对高糖诱导的HUVEC屏障功能和细胞凋亡的影响

目的:探讨Rho相关蛋白激酶(Rho-associated coiled-coil containing kinase, ROCK)抑制剂Y27632和消渴通痹方含药血清对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells, HUVEC)屏障功能和细胞凋亡的影响。方法:制备消渴通痹方含药血清,将SD大鼠随机分为正常对照组和消渴通痹方22.5 g/kg组,每天灌胃1次,连续7 d。根据葡萄糖的浓度和消渴通痹方含药血清的浓度将实验分为正常对照组、高糖模型组、Y27632 10μmol/L组和消渴通痹方22.5 g/kg 5%、10%、15%含药血清联合Y27632 10μmol/L组。各组细胞传代8代~15代时,应用辣根过氧化物酶(horse radish peroxidase, HRP)检测HUVEC的单层通透性,流式细胞术检测HUVEC凋亡,Western blot检测闭锁小带蛋白1(zonula occludens-1, ZO-1)、闭合蛋白(Occludin)和Ras基因家族成员A (Ras homolog gene family member A, RhoA)、ROCK蛋白的表达。结果:与正常对照组相比,高糖模型组HRP吸光度、细胞凋亡率、RhoA、p-ROCK/ROCK的比值都显著升高,ZO-1、Occludin蛋白表达显著下调(P<0.01)。与高糖模型组相比,Y27632 10μmol/L组HRP吸光度、细胞凋亡率显著降低(P<0.01),ZO-1、RhoA蛋白表达显著上调(P<0.01);消渴通痹方22.5 g/kg含药血清联合Y27632组HRP吸光度、细胞凋亡率显著降低、RhoA蛋白表达显著下调(P<0.01),ZO-1、Occludin蛋白表达显著上调(P<0.01);10%、15%消渴通痹方22.5 g/kg含药血清联合Y27632组p-ROCK/ROCK的比值显著降低(P<0.01)。与Y27632组相比,消渴通痹方22.5 g/kg各浓度含药血清联合Y27632组HRP吸光度、凋亡率明显降低、RhoA蛋白表达明显下调(P<0.01或P<0.05);ZO-1、Occludin蛋白表达上调(P<0.05);15%消渴通痹方22.5 g/kg含药血清联合Y27632组p-ROCK/ROCK的比值降低(P<0.05)。结论:益气活血中药消渴通痹方能改善高糖诱导的HUVEC细胞屏障功能、降低内皮细胞凋亡、增加紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达,其机制可能与RhoA/ROCK信号通路有关。

鞘氨醇-1-磷酸在脓毒症中调节作用的研究进展

鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate,S1P)是具有多种生物活性的鞘磷脂代谢产物,通过激活细胞膜表面的G蛋白偶联受体即S1P受体(sphingosine-1-phosphate receptors,S1PRs),参与细胞生长和凋亡、免疫与凝血系统调节等多种生理功能。脓毒症是由于感染引起免疫反应失调所致的严重危及生命的疾病,常导致多器官功能障碍甚至衰竭。脓毒症导致的器官衰竭主要与内皮细胞和免疫细胞在炎症环境中的病理生理变化有关,包括血管通透性增加、血栓形成、炎症及免疫反应失调。S1P可参与调节脓毒症的多种病理生理过程,有望成为预测脓毒症患者病情严重程度的重要标志物,也是治疗脓毒症的潜在靶点。本文通过对S1P在脓毒症发生发展过程中的调节作用及相关临床研究进行总结,旨在为该领域的后续研究提供参考。

消渴通痹颗粒对高糖诱导的HUVEC屏障功能的影响及保护作用

目的:观察益气活血中药消渴通痹颗粒对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)屏障功能及紧密连接蛋白(ZO-1)、闭合蛋白(Occludin)表达的影响,探讨消渴通痹颗粒保护糖尿病周围神经病变内皮细胞屏障功能的作用及机理。方法:将不同浓度的消渴通痹颗粒含药血清和5.5 mmol/L葡萄糖作用于HUVEC 24 h,MTT法检测细胞的存活率,确定消渴通痹颗粒含药血清的给药浓度。根据葡萄糖的浓度和消渴通痹颗粒含药血清的浓度将实验分为正常对照组,高糖模型组和消渴通痹颗粒22.5 g/kg含药血清组。各组细胞传代8代~15代时,应用HRP检测HUVEC单层通透性;流式细胞术检测HUVEC凋亡;免疫荧光法、流式细胞术检测紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达。结果:与正常对照组相比,5%、10%消渴通痹颗粒22.5 g/kg含药血清组的存活率明显升高(P<0.05),15%、20%消渴通痹颗粒22.5 g/kg含药血清组的存活率明显下降(P<0.05或P<0.01),故而确定消渴通痹颗粒含药血清的浓度为5%、10%、15%。与正常对照组相比,高糖模型组单层通透性增加,凋亡率显著上升,ZO-1、Occludin蛋白的表达减少、荧光信号减弱、边缘粗糙、细胞与细胞之间的连接有断裂(P<0.05或P<0.01)。与高糖模型组相比,5%、10%消渴通痹颗粒22.5 g/kg含药血清组单层通透性降低,凋亡率下降,ZO-1、Occludin的蛋白表达上调、荧光信号加强、边缘趋于光滑、细胞与细胞之间连接紧密(P<0.05或P<0.01);15%消渴通痹颗粒22.5 g/kg含药血清组单层通透性降低,凋亡率下降,Occludin蛋白表达下调、荧光信号减弱(P<0.05或P<0.01),ZO-1蛋白表达变化不明显(P>0.05)。结论:益气活血中药消渴通痹颗粒改善了高糖诱导的HUVEC细胞屏障功能,其机制可能与增加紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达有关。

急诊脓毒症预防中的早期目标导向治疗

脓毒症是临床上常见的急危重症,其防治主要是保护脏器功能。糖萼是内皮细胞表面多糖-蛋白复合结构,具有保护细胞屏障、维持器官灌注的功能。在早期监测感染病人血清中糖萼破坏情况,并予以保护,或可保护病人脏器功能,预防感染病人进展为脓毒症,从源头降低脓毒症发病率。本文就糖萼保护与预防脓毒症进展展开综述,为临床上诊疗提供参考。