雌激素对骨质疏松大鼠骨折愈合过程成骨细胞血管内皮生长因子表达的影响分析

目的:探讨雌激素对成骨细胞血管内皮生长因子(VEGF)的影响,就骨质疏松大鼠骨折愈合进行试验。方法:选择40只雌性Wistar大鼠,随机分为观察组和对照组,每组各20例,取左股骨骨折模型,观察组每隔1d注射雌激素,就各项指标进行分析。结果:观察组优于对照组骨痂密度(P<0.05)。结论:观察组优于对照组的成骨细胞血管生长因子的表达量,其成骨细胞数量优于对照组,故其可促进骨组织的钙化及骨细胞的增殖分化,使骨密度提高。

高糖环境下P物质活化Akt通路促进间充质干细胞增殖和成血管内皮细胞分化的研究

目的揭示高糖环境下P物质(SP)对人骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖、迁移及成血管内皮细胞分化的影响,为其应用于治疗糖尿病皮肤溃疡等并发症提供依据。方法细胞高糖模型分为高糖对照组、高糖SP组和高糖蛋白激酶B(Akt)抑制剂组;正常环境培养的BMSC为正常对照组。CCK-8法检测细胞增殖情况;Transwell细胞小室迁移实验检测BMSC迁移数目;各组BMSC进行成血管内皮细胞分化实验,酶联免疫吸附试验检测成血管内皮细胞分化后各组BMSC的CD31蛋白含量;基质胶网眼形成实验检测成血管形成能力。Western blot检测各组BMSC的Akt和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达情况。结果与正常对照组比较,高糖对照组吸光度(A_(450))值、迁移数目、CD31蛋白含量、网眼数目、Akt和p-Akt蛋白相对表达量均降低;与高糖对照组比较,高糖SP组A_(450)值、迁移数目、CD31蛋白含量、网眼数目、Akt和p-Akt蛋白相对表达量均升高;与高糖SP组相比,高糖Akt抑制剂组上述指标均降低(P<0.01)。结论高糖环境下,SP可活化Akt通路促进BMSC增殖、迁移和血管内皮细胞分化。

掺锶聚磷酸钙共培养成骨细胞与内皮细胞:行为和功能蛋白的变化

背景:前期实验发现掺锶的聚磷酸钙材料对单独培养内皮细胞或成骨细胞的行为有显著促进作用。目的:观察掺锶聚磷酸钙对共培养下成骨细胞与脐静脉内皮细胞行为和功能蛋白表达的影响。方法:取第3代人脐静脉内皮细胞与人成骨肉瘤细胞MG63以2∶1的浓度比接种于24孔板中,然后再分别加入掺锶聚磷酸钙、聚磷酸钙与羟基磷灰石,共培养7 d后。采用ELISA法检测细胞血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子蛋白的表达,采用MTT法检测细胞活性。结果与结论:与聚磷酸钙与羟基磷灰石相比,在掺锶聚磷酸钙表面生长的细胞呈现更加良好的形态,细胞融合生长形成单层覆盖在材料表面,并且在材料表面有一定的跨度生长,说明掺锶聚磷酸钙材料能促进内皮细胞在其上黏附、伸展,有利于细胞的生长和增殖。掺锶聚磷酸钙组细胞分泌的血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子明显高于聚磷酸钙组和羟基磷灰石组(P<0.05),说明掺锶聚磷酸钙可上调血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子蛋白的表达。

冠状动脉钙化与成骨细胞表型的内皮祖细胞相关性

目的：探讨冠状动脉钙化与表达成骨细胞表型的内皮祖细胞（EPC-OCN）含量的关系。方法：收集上海新华医院行冠状动脉CT血管造影的患者48例，以钙化积分（CACS）定量评估冠脉钙化程度。其中冠状动脉无明显或轻度钙化的记为轻、中、重度钙化组。流式细胞术分析以CD34、KDR和OCN抗体所标记外周血单个核细胞中的EPC数量及EPC-OCN含量。结果：轻度钙化组EPC数量较中度及重度钙化组明显增多；重度钙化组表达EPC-OCN比例显著高于轻、中度钙化组；3组EPC-OCN数量无显著差异；多因素回归分析显示，EPC数量与钙化积分呈负相关；而EPC-OCN比例与钙化积分、血磷浓度、空腹血糖、糖化血红蛋白呈正相关。结论：冠状动脉钙化患者循环EPC数量减少，与钙化积分呈负相关；冠状动脉严重钙化患者EPC-OCN比例升高，并与钙化积分、血磷浓度、空腹血糖和糖化血红蛋白呈正相关。

Sema4D蛋白高表达与结直肠癌血管形成和临床进展的相关性

目的:探讨轴突导向因子4D(Semaphorin 4D,Sema4D)在结直肠癌组织中的表达及结肠癌细胞分泌Sema4D对血管形成的影响。方法:采用免疫组织化学SP法检测86例结直肠癌组织和52例正常结直肠组织中Sema4D的表达,并分析其与临床病理特征的关系;单纯血管内皮细胞组为空白对照组,结肠癌Lovo细胞和血管内皮细胞共培养组为实验组,应用ELISA检测2组Sema4D蛋白的表达,并观察其对内皮细胞成管的影响。结果:Sema4D蛋白在结直肠癌组织阳性表达率为60%,在正常结直肠组织中阳性表达率为12%,差异有统计学意义(P<0.05),且Sema4D蛋白表达与组织分化类型、TNM分期和淋巴结转移明显相关(P<0.05),而与年龄、肿瘤大小无关(P>0.05);ELISA检测结果显示,对照组和实验组Sema4D蛋白分别为(663.54±21.59)pg/mL、(1 320.99±28.42)pg/mL(P<0.05);内皮细胞管形成实验显示,对照组和实验组小管数目分别为7.25±1.26、15.25±0.96(P<0.05)。结论:Sema4D蛋白表达与结直肠癌组织分化类型、TNM分期和淋巴结转移相关;Sema4D蛋白促进内皮细胞管形成。

高糖通过转化生长因子β信号诱导肾小球内皮细胞向肌成纤维细胞转分化

目的探讨高糖（HG）能否通过转化生长因子β（TGF—β）途径诱导大鼠肾小球内皮细胞向肌成纤维细胞转分化（EndMT）。方法体外培养大鼠肾小球内皮细胞（GEnC），分为正常对照组（NG，5．5mmol／L）、高糖组（HG，15、30mmol／L）、TGF—B抑制剂组（HG＋LY36，30mmol／L葡萄糖＋10μmol／LLY364947）以及高渗对照组（M，5．5mmol／L葡萄糖＋25．5mmol／L甘露醇）和溶剂对照组（D，5．5mmol／L葡萄糖＋1ml／LDMSO）。采用Western印迹法检测各组细胞内皮细胞标志物claudin5和肌成纤维细胞标志物α-SMA表达变化；实时定量PCR法检测细胞TGF—β1和TGF—β2mRNA表达改变；免疫荧光法观察细胞形态学变化以及血管内皮细胞标志物VE—cadherin和肌成纤维细胞标志物α—SMA的表达。结果与NG组比较，HG组claudin5蛋白的表达量随葡萄糖浓度增加而降低（P〈0．05），α－SMA蛋白表达量随葡萄糖浓度增加而升高（P〈0．05），TGF-β1和TGF—β2mRNA表达均升高（P〈0．05）。与HG组比较，TGF－β抑制剂组claudin5蛋白表达量升高（P〈0．05），α—SMA蛋白表达降低（P〈0．05）。高渗对照组和溶剂对照组改变差异无统计学意义。激光共聚焦免疫荧光结果显示，高糖处理可引起细胞形态由卵圆形向梭形改变，VE－cadherin表达减少，α－SMA表达增加；TGF－β抑制剂组细胞形态无明显改变。与HG组比较，TGF－β抑制剂组VE—cadherin表达增加，α—SMA表达降低（P〈0．05）。结论高糖诱导大鼠肾小球内皮细胞TGF－β表达增加及内皮细胞－肌成纤维细胞转分化。抑制TGF—β可抑制高糖引起的转分化，提示TGF—β参与了高糖引起的肾小球内皮细胞转分化过程。

桃红四物汤对UV辐照致HDMEC损伤后VCAM-1和bFGF表达的影响

目的:探讨桃红四物汤对模拟日光中UV辐照所致人真皮微血管内皮细胞(HDMEC)损伤的干预作用。方法:研究以人真皮微血管内皮细胞为研究对象,采用UVA照射的方法造模,以不同浓度的桃红四物汤为干预因素,分别予高、中、低剂量桃红四物汤含药血清培养,用ELISA法检测培养上清液中VCAM-1和bFGF的含量。结果:与空白对照组比较,模型对照组和桃红四物汤中、低剂量含药血清组中的VCAM-1含量均显著上调且有统计学差异(P<0.05,P<0.01),而桃红四物汤高剂量组无统计学差异(P>0.05);与模型对照组比较,桃红四物汤高剂量、中剂量和低剂量含药血清组中的VCAM-1含量均显著下降,存在统计学差异(P<0.01)。与空白对照组比较,模型对照组、桃红四物汤高剂量、中剂量和低剂量含药血清组中的bFGF含量均显著上调且有统计学差异(P<0.01);与模型对照组比较,桃红四物汤高剂量、中剂量和低剂量含药血清组中的bFGF含量均显著下降且有统计学差异(P<0.01)。结论:UVA辐射致HDMEC损伤发生炎症反应,促进VCAM-1、bFGF的表达上调,桃红四物汤干预后二者表达下调,表明桃红四物汤能修复受损的血管内皮细胞,进而降低紫外线辐射造成的皮肤损伤。

EndMT及其与纤维化疾病关系的研究进展

纤维化疾病的主要效应细胞是成纤维细胞。成纤维细胞可来源于内皮细胞向肌成纤维细胞转分化(EndM T)过程中。血管内皮细胞具有较强的可塑性,不同组织血管床的血管内皮细胞在多种病理因素刺激以及多种细胞因子的共同作用下均可发生EndM T。EndM T可通过多种生物活性分子包括转化生长因子β、血管紧张素Ⅱ、微小RNA,螺旋-环-螺旋转录因子(如Twist)和锌指转录因子(如Snail和Slug)等介导多种器官(如心脏、动脉、肺、肾)发生纤维化改变。在EndM T发生过程中内皮细胞失去其本身特性,并表现出间质细胞特征,侵入和迁移能力增强,逐渐转化为血管壁中的肌成纤维细胞,肌成纤维细胞可迁移到血管周围区域并参与组织纤维化过程。因此,EndM T与心肌纤维化、移植动脉硬化及动脉粥样硬化、放射性肺纤维化、肾脏纤维化等疾病的发生均密切相关。

骨钙素对动脉粥样硬化作用的研究进展

骨钙素是成骨细胞合成和分泌的基质蛋白,参与骨吸收调节、成骨细胞分化和基质的矿化,是骨转化的特定生物标志物。研究发现骨钙素调节血管内皮舒张因子的产生、炎症因子的作用和抑制血管钙化,直接影响动脉粥样硬化的形成和发展;另外骨钙素能够调节糖脂代谢和性激素水平,间接影响动脉粥样硬化。本综述旨在对骨钙素与动脉粥样硬化的关系予以阐述。