龙生蛭胶囊对人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤的作用

目的 探讨龙生蛭胶囊对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)氧化应激损伤的影响。方法建立过氧化氢内皮细胞损伤模型,给予不同剂量的龙生蛭胶囊乙醇提取物(2.5、5.0、10.0 mg·mL^(-1))和辛伐他汀(5mg·mL^(-1))干预。采用CCK8法检测细胞活性,用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞上清液的炎症相关因子[白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、IL-12和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)]水平,用硝酸还原酶法检测一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,用流式细胞仪检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。结果 与空白组相比,模型组中细胞活力和NO含量均显著下降,而炎症相关因子(IL-1β、IL-6、IL-12和TNF-α)和ROS水平明显上升,给予龙生蛭胶囊和辛伐他汀干预后,上述各组指标均呈现逆转(P<0.05),且与剂量呈一定相关性。结论 龙生蛭胶囊通过提高细胞活性,抑制炎症和氧化应激反应,从而对由过氧化氢诱导的HUVEC氧化应激损伤发挥保护作用。

LncRNA SNHG10对脂多糖诱导血管内皮细胞氧化应激损伤的影响

目的探讨lncRNA SNHG10对脂多糖(LPS)诱导血管内皮细胞氧化应激损伤的影响。方法通过筛选出的LPS最适浓度500 ng/mL诱导人脐静脉内皮细胞HUVEC,构建血管内皮细胞氧化应激损伤体外模型。取对数生长期的HUVEC细胞,分别将si-NC、si-SNHG10质粒转染至HUVEC细胞,采用LPS(500 ng/mL)处理(分别记为LPS+si-NC组、LPS+si-SNHG10组),选择未行任何处理的HUVEC细胞为Control组,仅加入500 ng/mL LPS处理的细胞为LPS组。CCK-8法、流式细胞术检测细胞活力和凋亡水平;RT-qPCR法检测小核仁RNA宿主基因10(SNHG10)相对表达量;Western blotting法检测Ki-67、Bcl-2和Bax蛋白表达;ELISA法检测TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA含量和SOD活性。结果LPS+si-SNHG10组HUVEC细胞活力、Ki-67蛋白、Bcl-2蛋白表达分别为(75.6±4.1)%、0.74±0.06、0.65±0.05,LPS+si-NC组分别为(45.4±2.8)%、0.52±0.04、0.42±0.03;LPS+si-SNHG10组SNHG10表达、细胞凋亡率、Bax蛋白表达、TNF-α、1L-6和1L-1β含量分别为1.88±0.11、(16.8±0.9)%、1.32±0.07、(289.2±25.1)pg/mL、(363.3±22.4)pg/mL、(402.6±21.3)pg/mL,LPS+si-NC组分别为3.24±0.19、(23.1±1.2)%、1.68±0.11、(536.6±33.0)pg/mL、(634.5±33.1)pg/mL、(664.5±38.1)pg/mL,LPS+si-SNHG10组SNHG10表达、细胞凋亡率、Bax蛋白表达、TNF-α、1L-6和1L-1β含量低于LPS+si-NC组(P均<0.05)。与Control组相比,LPS组HUVEC细胞内MDA表达升高(P<0.05),SOD活性降低(P<0.05);与LPS+si-NC组相比,LPS+si-SNHG10组HUVEC培养液MDA含量降低(P<0.05),SOD活性升高(P<0.05)。结论干扰SNHG10表达可以减轻LPS诱导的HUVEC凋亡、炎症和氧化应激,促进细胞增殖。

LncRNA MIAT靶向miR-361-3p影响内毒素诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤的分子机制

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)心肌梗死相关转录本(MIAT)对内毒素(LPS)诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤的影响及分子机制。方法将人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)随机分为control组、LPS组、si-LncRNA MIAT+LPS组、si-NC+LPS组、miR-361-3p+LPS组、miR-NC+LPS组、anti-miR-361-3p+si-LncRNA MIAT+LPS组、anti-miR-NC+si-Ln-cRNA MIAT+LPS组;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测LncRNA MIAT和miR-361-3p表达水平;流式细胞术实验检测细胞凋亡;Western印迹法检测凋亡相关蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性;双荧光素酶报告实验检测LncRNA MIAT和miR-361-3p的靶向关系。结果LPS处理的血管内皮细胞中LncRNA MIAT表达水平明显升高,miR-361-3p表达水平明显降低,切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved-caspase)-3表达水平、细胞凋亡率明显升高,MDA含量明显升高,SOD和CAT活性明显降低(P<0.05)。低表达LncRNA MIAT或过表达miR-361-3p,Cleaved-caspase-3表达水平和血管内皮细胞凋亡率明显降低,MDA含量明显降低,SOD和CAT活性明显升高(P<0.05)。LncRNA MIAT靶向调控miR-361-3p;低表达miR-361-3p可以逆转LncRNA MIAT低表达对LPS处理的血管内皮细胞氧化应激损伤的影响。结论低表达LncRNA MIAT可通过靶向调控miR-361-3p抑制LPS诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤。

山姜素下调微小RNA146a-5p表达减轻血管内皮细胞氧化应激损伤

目的:探讨山姜素调控微小RNA(miR)146a-5p表达对内毒素诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤的影响。方法:采用1μg/mL的脂多糖处理人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)构建细胞损伤模型。将HUVEC分为对照组、LPS组、LPS+山姜素低、中、高剂量组、LPS+anti-miR阴性对照组、LPS+anti-miR-146a-5p组、LPS+山姜素+miR-NC阴性对照组、LPS+山姜素+miR-146a-5p组。采用生化法检测超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及丙二醛(MDA)水平。采用流式细胞术检测HUVEC的凋亡率。采用实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-146a-5p表达。结果:与Con组比较,LPS组细胞凋亡率、MDA水平、miR-146a-5p表达显著升高,SOD和GSH-Px活性显著降低。与LPS组比较,LPS+山姜素低、中、高剂量组细胞凋亡率、MDA水平、miR-146a-5p表达显著降低,而SOD和GSH-Px活性显著升高(P均<0.05)。与LPS+anti-miR-阴性对照组比较,LPS+anti-miR-146a-5p组细胞凋亡率、MDA水平显著降低,而SOD和GSH-Px活性显著升高(P均<0.05)。与LPS+山姜素+miR-阴性对照组比较,LPS+山姜素+miR-146a-5p组细胞凋亡率、MDA水平显著升高,而SOD和GSH-Px活性显著降低(P均<0.05)。结论:山姜素通过下调miR-146a-5p表达减轻内毒素诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤。

杨梅素减轻高糖诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤

目的探讨杨梅素对高糖诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤的影响。方法体外培养原代人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）,分为正常对照组（葡萄糖浓度5.56 mmol/L）、甘露醇高渗对照组（5.56 mmol/L葡萄糖＋27.8 mmol/L甘露醇）、高糖处理组（葡萄糖浓度33.36 mmol/L）、杨梅素保护组（0.1~10μmo/L杨梅素＋33.36 mmol/L葡萄糖）,处理48 h后,CCK-8比色法检测细胞活力,Annexin-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,同时检测细胞内活性氧（ROS）含量,及培养上清液中丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性。结果高糖处理HUVECs 48h后,与正常对照组比较,细胞活力显著降低（P〈0.05）,细胞凋亡率、ROS及MDA含量均显著增加（P〈0.05）,而SOD和CAT活性显著下降（P〈0.05）;杨梅素预处理HUVECs后,可显著抑制高糖引起的HUVECs细胞凋亡、ROS和MDA含量的增加以及细胞活力、SOD和CAT活性的下降（P〈0.05）。结论杨梅素可减轻高糖诱导的血管内皮细胞氧化应激,抑制细胞凋亡。

离体大鼠主动脉内皮细胞氧化应激损伤模型的建立及评价

目的:建立离体大鼠主动脉内皮细胞氧化应激损伤模型,为细胞损伤及细胞凋亡的调控研究提供基础。方法:大鼠断头处死在无菌条件下开胸取主动脉,经组织块培养法后传代培养得到充足主动脉内皮细胞,接种于96孔板或爬片培养,每组设6个复孔,用于之后的各项试验检测。以不加H2O2的组作为对照组,以不同浓度的H2O2(100、200、300、400、500μmol/L)作用于内皮细胞相同时间12 h,来筛选最佳作用浓度;依据结果以相同浓度的H2O2(100和200μmol/L)分别作用不同时间(3、6、9、12及24 h),来筛选最佳作用时间。通过免疫荧光法鉴定、细胞存活率检测、生化指标(LDH-L、NO、MDA、SOD)检测及内皮细胞凋亡指数等变化,评价及验证模型的建立。结果:对细胞内Ⅷ型胶原抗原进行免疫荧光染色后鉴定血管内皮细胞培养成功;在12 h的相同作用时间下,随着H2O2浓度的加大,细胞存活率呈显著下降(77.63%±5.20%~40.90%±2.10%);相同浓度(100μmol/L组和200μmol/L组)随着作用时间的增加,细胞存活率呈显著递减(100μmol/L组为86.83%±12.11%~44.26%±5.70%,200μmol/L组为78.28%±11.98%~34.45%±5.87%);以H2O2浓度为100μmol/L作用3、6、9、12及24 h,培养液中生化指标在9 h后LDH-L与MDA呈显著递增,NO与SOD呈显著递减;在H2O2浓度为100μmol/L与作用时间12 h的条件下,流式检测结果显示内皮细胞凋亡率为16.92%±2.37%,显著高于对照组2.68%±0.47%(P<0.01);TUNEL检测内皮细胞凋亡指数为17.65%±2.36%,显著高于对照组的3.23%±0.57%(P<0.01)。结论:该方法成功建立了体外血管内皮细胞氧化应激损伤模型,探索了轻重适度的诱导细胞损伤和细胞凋亡的造模方法,可以成为开展多种血管内皮细胞损伤及凋亡调控机制研究的基础。

丹参酮ⅡA通过调节自噬小体对ox-LDL诱导内皮细胞氧化应激损伤的保护作用

目的基于自噬小体形成信号通路探讨丹参酮ⅡA对ox-LDL诱导内皮细胞氧化应激损伤的保护作用及机制。方法体外培养EA.hy926细胞,随机分为正常组、模型组、丹参酮ⅡA组、丹参酮ⅡA+模型组、3-MA组、模型+3-MA组、丹参酮ⅡA+模型+3-MA组。比色法检测各组细胞氧化应激损伤丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力,Western blot技术检测细胞自噬小体形成信号通路相关蛋白表达情况。结果与正常组比较,模型组MDA含量增高(P<0.01),SOD活力降低(P<0.01),LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ蛋白含量增多(P<0.01);3-MA组LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ蛋白含量无明显变化(P>0.05)。与模型组比较,丹参酮ⅡA+模型组细胞中MDA含量降低(P<0.01),SOD活力增高(P<0.01),LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ蛋白含量增多(P<0.01);模型+3-MA组MDA含量增高(P<0.01),SOD活力降低(P<0.01),LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ蛋白含量减少(P<0.01)。与丹参酮ⅡA+模型组比较,丹参酮ⅡA+模型+3-MA组MDA含量增高(P<0.01),SOD活力降低(P<0.01),LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ蛋白含量减少(P<0.01)。与正常组比较,模型组Atg3、Atg4b、Atg7蛋白表达水平明显增高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,丹参酮ⅡA+模型组Atg3、Atg7、Atg5-Atg12蛋白表达水平明显增高(P<0.05,P<0.01);与丹参酮ⅡA+模型组比较,丹参酮ⅡA+模型+3-MA组Atg3、Atg7、Atg5-Atg12蛋白表达水平均明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论丹参酮ⅡA可能通过调节EA.hy926细胞自噬小体形成信号通路即Atg12-Atg5通路和LC3-PE通路相关蛋白,发挥其保护EA.hy926细胞抗氧化应激损伤的生物学活性,进而防治动脉粥样硬化的发生发展。

卡维地洛对过氧化氢致血管内皮细胞氧化应激损伤的保护作用

目的观察卡维地洛(carved ilol)对过氧化氢(hydrogenperoxide,H2O2)致内皮细胞损伤及表面粘附分子表达的影响。方法采用H2O2作为外源性自由基生成系统,模拟内皮细胞的脂质过氧化损伤,建立离体培养的ECV-304细胞氧化应激损伤模型,观察卡维地洛对H2O2致内皮细胞损伤及表面粘附分子表达的影响。结果卡维地洛各浓度组均明显改善H2O2(1.0×10-6mol.L-1)所致ECV-304细胞形态学损伤,提高细胞生存率,降低LDH释放,并可使细胞内及细胞培养液中MDA含量降低,SOD活性升高,亦可下调ICAM-1蛋白及细胞内ICAM-1mRNA表达水平,上述作用随药物浓度增加呈增强趋势。结论卡维地洛可保护内皮细胞结构和功能的完整性,提高内皮细胞抗氧化能力,并从转录水平抑制脂质过氧化诱导的粘附分子表达增加,降低单核-内皮细胞粘附,有利于减少动脉粥样硬化的始动环节和早期事件的发生。

SIRT1/UCP2通路在白藜芦醇抑制血管内皮细胞氧化应激损伤中的作用

目的观察白藜芦醇对血管内皮细胞氧化应激损伤的抑制作用,并围绕SIRT1/UCP2信号通路探讨其作用机制。方法原代培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),用叔丁基过氧化氢(t-BHP)建立HUVECs氧化应激损伤模型。CCK-8法检测细胞增殖,确定半抑制浓度(IC50)。荧光分光光度计检测细胞内活性氧(ROS)生成。CCK-8法检测白藜芦醇对t-BHP诱导的HUVECs活力的影响;qRT-PCR法检测白藜芦醇对SIRT1和UCP2mRNA表达的影响;Western blot法检测白藜芦醇对SIRT1、UCP2和Caspase-3在细胞内蛋白表达的影响。结果 t-BHP明显抑制细胞活力,IC50为80μmol/L。白藜芦醇(0.1、1、10μmol/L)预处理2 h能显著抑制t-BHP诱导的细胞活力下降(P<0.05),并抑制t-BHP诱导的细胞内ROS增加(P<0.05)。同时,白藜芦醇能明显抑制t-BHP诱导的SIRT1的mRNA和蛋白表达下降、UCP2的mRNA和蛋白表达升高及Caspase-3表达增加(P<0.05),而Sirt1抑制剂尼克酰胺能削弱白藜芦醇的抑制作用。结论白藜芦醇可能通过活化SIRT1抑制UCP2表达,削弱t-BHP诱导的细胞内ROS生成,从而抑制血管内皮细胞氧化应激损伤。

NADPH氧化酶在高脂诱导的人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤中的作用

目的探讨NADPH氧化酶在高脂诱导的人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)氧化应激损伤中的作用。方法不同浓度(0.1、0.2、0.4、0.8 mmol·L^(-1))棕榈酸(palmitic acid,PA)刺激HUVECs 0、12、24、48 h,CCK-8法检测血管内皮细胞增殖能力;免疫印迹法检测血管内皮细胞NADPH氧化酶亚基p22phox、p47phox、p67phox、gp91phox的表达水平;免疫荧光法检测血管内皮细胞细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的表达水平。结果 0.4 mmol·L^(-1)PA刺激HUVECs 24、48 h组的细胞增殖率出现明显降低。因此,实验中我们采用0.4 mmol·L^(-1)PA刺激24 h作为模型组;0.4 mmol·L^(-1)PA刺激HUVECs24、48 h时,p22phox、p47phox、p67phox、gp91phox的表达均明显升高(P<0.05),24 h组与48 h组差异不明显(P>0.05);0.4mmol·L^(-1)PA刺激血管内皮细胞24、48 h时,细胞内ROS表达水平均明显增高(P<0.05),24 h组与48 h组差异不明显(P>0.05);与模型组(0.4 mmol·L^(-1)PA刺激24 h)相比,NADPH氧化酶抑制剂diphenyliodonium(DPI,10μmol·L^(-1))预处理可以使模型组血管内皮细胞ROS表达水平明显下调(P<0.05)。结论 NADPH氧化酶活性对高脂所致血管内皮细胞氧化应激损伤的防治有重要意义。

血红素对人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤的保护作用

采用过氧化氢作用于人脐静脉内皮细胞 ,成功地制作了氧化应激损伤的细胞模型 ,将培养的细胞分为 3组 :正常对照组 ,损伤组 (给予过氧化氢 )和血红素组 (同损伤组的制备 ,预先加入血红素 ) .观察各组细胞在光、电镜下形态学和蛋白质电泳的改变 ,用MTT法检测了各组细胞的生长状态 .结果表明 :在血红素组 ,细胞生长状态、MTT水平和蛋白质电泳结果与损伤组相比有明显好转且差异显著 ,证明血红素对人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤有明显的保护作用 .

艳山姜挥发油对TGF-β_1诱导内皮细胞氧化应激损伤的保护作用研究

通过体外离体培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),建立转化生长因子-β_1(TGF-β_1)诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤模型,观察艳山姜挥发油(EOFAZ)对TGF-β_1诱导的HUVECs氧化应激损伤的保护作用,并初步分析其机制.实验结果显示TGF-β_1显著引起内皮细胞氧化应激损伤,艳山姜挥发油能够明显抑制内皮细胞存活率降低、细胞内ROS水平升高及细胞迁移能力增强,并上调Nrf2蛋白的表达.上述结果表明,艳山姜挥发油对TGF-β_1诱导的HUVECs氧化应激损伤具有保护作用,其机制可能与其调控Nrf2蛋白的表达相关.

染料木黄酮对人血管内皮细胞氧化应激损伤的保护作用

目的观察染料木黄酮(genistein,Gen)对人血管内皮细胞株EAhy.926氧化应激损伤保护效应并探讨其机制。方法用H2O2建立氧化应激损伤模型,CCK-8法检测Gen对细胞活力的影响;流式细胞仪和TUNEL法检测Gen对氧化应激诱导细胞凋亡的影响;Western blot检测Gen对Bcl-2、Nrf2、HO-1表达的影响。结果 H2O2明显影响细胞活力和诱导凋亡(IC50为650μmol/L),Gen(100～500 nmol/L)处理能显著抑制细胞活力下降,且细胞凋亡率由16.54%下降为6.18%;Gen对Bcl-2有上调作用;Gen能激活Nrf2/HO-1抗氧化途径。结论 Gen抑制血管内皮细胞的氧化应激损伤与对Bcl-2的调节和Nrf2/HO-1抗氧化途径的激活有关。

Kv1.5蛋白对内毒素致血管内皮细胞氧化应激损伤的影响

目的研究Kv1.5蛋白对内毒素(LPS)所致血管内皮细胞氧化应激损伤的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),给予5μg/mL LPS刺激建立脓毒症细胞模型,并分为:空白对照组、LPS组、LPS+MT1组(以Kv1.5特异性通道阻滞剂MT 250nmol/L预处理30min)及LPS+MT2组(MT浓度为500nmol/L)。采用MTT法检测内皮细胞存活率;ELISA法检测细胞上清液中内皮细胞E-选择素(E-selectin)、细胞间粘附分子(ICAM-1)浓度变化;激光共聚焦显微镜观察内皮细胞内ROS水平;比色法检测脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与空白对照组比较,LPS组内皮细胞存活率明显下降[(32.54±1.87)%vs.(98.64±0.92)%,P<0.01],而LPS+MT1组及LPS+MT2组内皮细胞存活率分别为(77.39±1.15)%、(93.22±1.15)%,均较LPS组上升(均P<0.01);LPS组内皮细胞E-selectin、ICAM-1分泌增加(均P<0.01),予以250、500nmol/L MT预处理后,E-selectin、ICAM-1分泌减少(均P<0.01);激光共聚焦显微镜观察内皮细胞内ROS水平发现,LPS组细胞内ROS水平升高为空白对照组的(3.39±0.42)倍(P<0.05),予以250、500nmol/L MT预处理后,ROS水平分别为空白对照组的(1.88±0.36)倍、(1.46±0.47)倍,与LPS组比较,差异有统计学意义(均P<0.05);且LPS组较空白对照组MDA水平上升、SOD活性降低(均P<0.01),而MT预处理可降低MDA含量、增加SOD活性(均P<0.01)。结论 Kv1.5蛋白与内毒素诱导的血管内皮细胞损伤密切相关;MT通过阻断Kv1.5通道可减轻内皮细胞脂质过氧化损伤。

正源方对过氧化氢诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤的保护作用研究

目的探索正源方对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人脐静脉血管内皮细胞氧化损伤的作用及其作用机制。方法MTT法检测正源方对H_(2)O_(2)诱导的细胞活力减少的影响;采用罗丹明123染色法检测正源方对H_(2)O_(2)诱导的细胞线粒体膜电位的影响;采用流式细胞术检测正源方对H_(2)O_(2)诱导的细胞中活性氧(ROS)的影响;通过Western blot检测正源方对H_(2)O_(2)诱导的细胞中促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路关键蛋白表达的影响。结果正源方可抑制H_(2)O_(2)诱导的细胞活力减少,提高细胞线粒体膜电位,抑制H_(2)O_(2)诱导的细胞中ROS的产生及p-p38/p38、p-JNK/JNK、p-ERK/ERK蛋白的表达。结论正源方可能通过调控MAPK通路对H_(2)O_(2)诱导的血管内皮细胞损伤起保护作用。

泰山白花丹参对人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤的保护作用

目的研究泰山白花丹参对血管内皮细胞氧化损伤的保护作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞株ECV304,在培养液中预先加入不同浓度(0、0.3、0.6、0.9g/L)的白花丹参制剂后,以0.001%过氧化氢诱导内皮细胞损伤,通过光镜观察细胞形态,以四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞存活数量,用流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡变化。结果血管内皮细胞受到氧化损伤后,细胞存活率明显降低,而预先加入白花丹参制剂可改善上述结果,它能抑制H2O2引起的血管内皮细胞减少,降低凋亡细胞比例。结论泰山白花丹参对内皮细胞氧化应激损伤有保护作用。

灵芝多糖、水飞蓟素改善不同程度肾小球内皮细胞氧化应激损伤的Sirt1调节机制研究

目的对照Sirt1激动剂白藜芦醇(Res),研究灵芝多糖(GLPs)、水飞蓟素(Silymarin)对肾小球内皮细胞不同程度氧化损伤的保护作用及Sirt1影响。方法 80μmol/L过氧化氢(H2O2)损伤时,反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定各组细胞Sirt1基因水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定各组蛋白表达水平;95μmol/L H2O2损伤时,慢病毒颗粒转导Sirt1 SHRNA后MTT法测定各组细胞活力。结果 80μmol/L H2O2损伤下,各组Sirt1mRNA水平为水飞蓟素组=白藜芦醇组=模型对照组>灵芝多糖组=正常对照组,Sirt1蛋白表达为模型对照组>白藜芦醇组>灵芝多糖组=水飞蓟素组=正常对照组;H2O2浓度95μmol/L时,各组细胞活力依次为:灵芝多糖组>水飞蓟素组>白藜芦醇组=模型对照组。结论一定程度氧化损伤下,机体自我修复作用可能与主动上调Sirt1表达有关;氧化损伤时细胞存活率与Sirt1表达非线性关系,Sirt1mRNA和蛋白表达水平也不尽一致;灵芝多糖、水飞蓟素、白藜芦醇对Sirt1的影响不同。

姜黄素保护血管内皮细胞氧化应激损伤分子机制的研究进展

随着我国经济社会发展,国民生活方式的转变,心血管病的发病人数持续增加,心血管病已成为我国居民的首位死亡原因。冠心病是最常见的心血管病,血管内皮功能障碍是动脉粥样硬化的起因和最早改变,而氧化应激则是导致血管内皮功能不全和心肌损伤的最常见原因。姜黄素是一种提取于草本植物姜黄根茎的天然疏水性多酚,已被证实其可以通过调节基因表达或直接作用在抗肿瘤、抗增殖、抗炎、抗氧化等诸多方面发挥药理作用,该文旨在对姜黄素保护血管内皮细胞氧化应激损伤的最新分子机制作一综述。

地红方调控Keap1/Nrf2信号通路干预糖尿病血管内皮细胞氧化应激损伤的研究

目的观察地红方对糖尿病血管内皮细胞Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路相关因子的影响。方法传代后的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)以标准培养液培养24 h,更换培养液并随机分为5个组,每组10个样本。(1)正常组:葡萄糖浓度为5.6 mmol/L的MEM培养液加10%的无药血清培养;(2)模型组:葡萄糖浓度为22.2 mmol/L的MEM培养液加10%的无药血清培养;(3)低剂量含药血清组(简称低剂量组):在模型组基础上培养6 h后,葡萄糖浓度为22.2 mmol/L的MEM培养液加5%含药血清及5%无药血清继续培养;(4)中剂量含药血清组(简称中剂量组):在模型组基础上培养6 h后,葡萄糖浓度为22.2mmol/L的MEM培养液加7.5%含药血清及2.5%无药血清继续培养;(5)高剂量含药血清组(简称高剂量组):在模型组基础上培养6 h后,葡萄糖浓度为22.2 mmol/L的MEM培养液加10%含药血清继续培养。以上各组分组培养72 h后,Western blot检测各组血管内皮细胞质内Keap1的蛋白表达,实时荧光定量PCR(qPCR)检测各组血管内皮细胞Nrf2、谷胱甘肽S-转移酶(GST)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL)、NAD(P)H:醌氧化还原酶-1(NQO1)和血红素加氧酶-1(HO-1)的mRNA表达。结果与正常组比较,模型组Keap1蛋白表达明显下降(P<0.05);中剂量组、高剂量组Nrf2、GST、SOD、CAT、GPx、GCL、NQO1、HO-1的mRNA表达明显升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组相比,低、中、高剂量组Keap1蛋白表达和Nrf2、GST、SOD、CAT、GPx、GCL、NQO1、HO-1的mRNA表达均明显升高(P<0.05或P<0.01)。与中剂量组比较,低剂量组GST、SOD、CAT、GPx、NQO1、HO-1的mRNA表达明显下降(P<0.05)。结论地红方可能通过调控Keap1/Nrf2信号通路治疗糖尿病血管内皮细胞氧化应激损伤。

蓝莓花青素对由H_2O_2诱导人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤的保护作用

目的通过建立人脐静脉内皮细胞株(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)氧化应激损伤细胞模型,探讨蓝莓花青素是否能够对H_2O_2引起的细胞损伤具有保护作用。方法采用过氧化氢(H_2O_2)创建ECV304氧化应激损伤细胞模型,实验分为正常对照组、H_2O_2组、蓝莓花青素低、中、高剂药物组,药物组中加入蓝莓花青素培养2h后,再加入H_2O_2继续培养6h,采用MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期变化情况及细胞凋亡率。结果细胞活力与H_2O_2浓度及其作用的时间呈相关性下降趋势,在一定浓度范围内蓝莓花青素对细胞具有保护作用。结论蓝莓花青素对由H_2O_2引起的氧化应激损伤具有一定保护作用。