重组腺病毒IκBαM抑制高糖诱导的血管内皮细胞炎症因子的异常分泌

构建携有核因子κB抑制物IκBα的突变体IκBαM的重组腺病毒(AdIκBαM),并感染ECV304血管内皮细胞,采用Westem blot、电泳迁移率变动分析和逆转录-聚合酶链反应等方法研究核因子κB在高浓度葡萄糖刺激的ECV304细胞分泌功能中所起的作用以及阻断其活性对内皮细胞分泌功能的影响。结果发现,高糖能诱导ECV304细胞IκBα的降解和核因子κB的激活,同时上调炎症因子细胞间粘附分子1、单核细胞趋化蛋白1和内皮素1 mRNA表达水平,而感染AdIκBαM的ECV304/IκBαM细胞则能拮抗高糖所致的IκBα降解与核因子κB激活,同时下调这些炎症因子的异常分泌水平。结果提示,核因子κB的激活在高糖所致的内皮细胞分泌功能改变中起中轴作用,抑制核因子κB的活化,有助于改善血管内皮细胞功能。

白细胞介素38过表达抑制氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞炎症的分子机制研究

目的探究白细胞介素(IL)-38在动脉粥样硬化患者血清中的水平及其对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的内皮细胞炎症的作用及分子机制。方法收集65例颅内外颈动脉粥样硬化患者和30例健康人的血液,ELISA检测血清中IL-38的表达。在人动脉内皮细胞(HAECs)中先转染pcDNA3.1-IL-38质粒过表达IL-38,然后用100μg/ml ox-LDL刺激。ELISA检测细胞上清液中IL-6、IL-8、IL-17、ICAM-1和MCP-1等炎性介质的表达;real-time PCR检测细胞中凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)和CD36 mRNA水平的表达,Western blot检测细胞中LOX-1、CD36、磷酸化核内转录因子p65(p-NF-κB p65,p-p65)和IκB蛋白水平的表达。最后转染pcDNA3.1-IL-38质粒24 h后,用100μmol/L PDTC(NF-κB抑制剂)预处理HAECs2 h,再加入100μg/ml ox-LDL刺激,检测细胞中LOX-1、IL-6、IL-8、IL-17、ICAM-1和MCP-1的表达。结果与健康人相比,脑动脉粥样硬化患者血清中IL-38的表达明显增加(P<0.05),且与其动脉粥样硬化程度呈正相关性。IL-38能够降低ox-LDL诱导的IL-6、IL-8、IL-17、ICAM-1和MCP-1等炎性介质、LOX-1 mRNA和蛋白水平、p-p65的表达,增加IκB蛋白水平表达(P均<0.05),但是对CD36 mRNA和蛋白表达无影响。PDTC能够减弱IL-38对LOX-1、IL-6、IL-8、IL-17、ICAM-1和MCP-1表达的影响。结论 IL-38的表达水平与动脉粥样硬化程度呈正相关,它能够抑制ox-LDL诱导的内皮细胞炎症,这可能与其抑制NF-κB信号通路相关。

曲古抑菌素C通过上调Krüppel样转录因子2抑制TNFα诱导的内皮细胞炎症

Krüppel样转录因子2(Krüppel-like factor 2,KLF2)在内皮细胞炎症、血栓形成、血管生成以及巨噬细胞的炎症和极化等过程中发挥调节作用,上调KLF2的表达具有防治动脉粥样硬化的潜力。本研究利用KLF2表达上调剂筛选模型,从一株链霉菌CPCC 203909的大米发酵次级代谢产物中分离得到一个KLF2小分子上调剂曲古抑菌素C(trichostatin C,TSC)。TSC可以显著抑制肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNFα)诱导的单核细胞(THP-1)黏附到人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)上;Western blot实验结果表明,TSC具有抑制血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)的作用,从而减轻内皮细胞炎症;过表达组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)质粒转染和分子对接实验结果表明,TSC通过抑制HDAC 4/5/7来上调KLF2的表达。综上,TSC通过抑制HDAC 4/5/7上调KLF2的表达从而减轻TNFα诱导的内皮细胞炎症,具有预防和治疗动脉粥样硬化的潜力。

铁调素对NF-κB介导血管内皮细胞炎症反应的影响

目的探讨铁调素(hepcidin)对血管内皮细胞(vascular endothelial cell,VEC)炎症通路中核转录因子κB(Nuclear Factor-κB,NF-κB)家族的影响。方法使用不同浓度的人铁调素处理人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell;HUVEC)24h后,利用蛋白印迹技术(Western blot)检测细胞中核转录因子κB抑制蛋白α(inhibitor of NF-κB;IκBα)、细胞间粘附分子(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的蛋白表达;免疫荧光法观察NF-κB p65转核、ICAM-1蛋白表达;体外粘附实验检测干预后的HUVEC的粘附能力。结果铁调素能剂量依赖的降低HUVEC中IκBα及促进ICAM-1表达,其中干预剂量大于300 ng/ml处理组时的相比对照组差异均具有统计学意义(P<0.05);激光共聚焦成像结果显示,600 ng/ml铁调素处理24h后,HUVEC中NF-κB p65转入核内,ICAM-1蛋白表达增加;粘附实验的结果显示,剂量量大于75 ng/ml铁调素处理能剂量依赖性的上调HUVEC的粘附能力,与对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05)结论铁调素可诱导血管内皮细胞IκBα的下调,促使NF-κB p65转核,升高血管内皮细胞ICAM-1的表达水平。铁调素可通过调控NF-κB通路介导血管内皮细胞炎症反应。[营养学报,2014,36(1):31-34]

Y-27632通过抑制ROCK通路降低内皮细胞中基质金属蛋白酶2和9表达

目的:探讨ROCK通路抑制剂Y-27632对肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)基质金属蛋白酶2和9(matrix metalloproteinase 2 and 9,MMP2,MMP9)的表达与活性的影响。方法:体外培养原代HUVEC,分别予以TNF-α(25 ng/m L)、TNF-α+Y-27632(10μmol/L)处理24 h。Real-time PCR检测血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)、细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、MMP2和MMP9 m RNA的表达水平;明胶酶谱检测MMP2和MMP9蛋白活性的改变情况。结果:与对照组相比,TNF-α明显上调ICAM-1,VACAM-1,MMP2,MMP9 m RNA的表达(P<0.01)和MMP2,MMP9的蛋白活性(P<0.05);与TNF-α处理组相比,Y-27632可显著抑制ICAM-1,VCAM-1,MMP2和MMP9 m RNA的表达(P<0.01),下调MMP2和MMP9的蛋白活性(P<0.05)。结论:Y-27632可以抑制TNF-α诱导的HUVEC炎症反应和MMP2,MMP9 m RNA和蛋白活性水平。

舒洛地特对高糖作用下人腹膜间皮细胞炎症及纤维化因子表达影响

舒洛地特(SLX,肝素类似物)是目前临床上一种全新的GAGs制剂,被应用于临床治疗中。本文首先对舒洛地特临床研究与应用进行了解,发现在溶栓作用治疗深静脉血栓、糖尿病治疗及腹膜透析等方面都有极大的作用。此外,本文还对高糖对人腹膜间皮细胞(HPMCs)糖萼的成分透明质酸(HA)、核心蛋白聚糖(DCN)和发炎与纤维化因素(白细胞介素6,IL-6);转化生长机制-β1(TGF-β1)对基因的影响展开了研究探讨,并就长期观察舒洛地特(sulodexide,SLX)对上述因子表达作用的研究进展作出说明,希望能为相关人员提供参考。

复方降脂胶囊对实验性动脉粥样硬化鹌鹑血液中炎症因子的影响

目的观察复方降脂胶囊对实验性动脉粥样硬化(AS)鹌鹑血液中炎症因子的影响。方法采用高脂饲养法复制鹌鹑高脂血症模型,并诱发AS模型。采用复方降脂胶囊及洛伐他汀分组治疗;于第12周经右侧颈静脉采血,测定血浆中循环内皮细胞(CEC)数,酶联免疫吸附法检测血清中CD40、CD40L、转化生长因子(TGF)-β、血管细胞间黏附分子(sVCAM-1)、细胞间黏附分子(sICAM-1)的含量。结果 实验动物经复方降脂胶囊干预治疗后,可明显降低血液中循环内皮细胞的数量,降低血清中CD40、CD40L、TGF-β、sVCAM-1及sICAM-1的含量,与模型组对比有显著差异。结论复方降脂胶囊可降低血管内皮的损伤,抑制AS斑块发生发展过程中的炎症反应过程,可能是其治疗AS的机制。

L-选择素和甘露糖受体与肿瘤淋巴转移的相关性

肿瘤的侵袭转移是一个复杂的、多因素、多步骤的病理生理过程。L-选择素属于选择素类黏附分子,表达在多数白细胞表面,参与其与炎症内皮细胞的黏附和游走,并能促进淋巴细胞归巢。甘露糖受体是C型凝集素家族的一员,主要表达在巨噬细胞和树突状细胞;能够介导细胞的内吞和噬菌作用。二者的相互识别和结合在肿瘤细胞的淋巴转移过程中起到重要作用。

三叶青主要成分抗炎作用及其机制

基于与Keap1蛋白的分子对接结果初步筛选,进而在血管内皮细胞低水平炎症模型下试验,对比分析活性成分对各类炎症相关因子的基因及蛋白表达影响。结果表明,三叶青根部的山柰酚-3-O-芸香糖苷、异槲皮苷、芦丁以及叶片中的5-咖啡酰奎宁酸、牡荆苷、荭草苷均能与Keap1蛋白紧密结合在Keap1与Nrf2蛋白相互作用的活性空腔中,从而可能使Nrf2解离并活化。6种活性成分均可缓解血管内皮细胞低水平炎症,其中作用最强的是牡荆苷。进一步发现牡荆苷可显著上调细胞内Nrf 2基因和蛋白表达,下调Keap1蛋白表达,说明Nrf2被活化。此外,牡荆苷在细胞培养基及缓冲盐溶液中稳定性强,能以原型形式被血管内皮细胞吸收,以剂量依赖的方式显著抑制IL-6、IL-1β和ICAM等炎症相关因子的基因和蛋白表达及NF-κB p65磷酸化水平。牡荆苷可能通过与Keap1蛋白结合活化Nrf2及影响NF-κB通路活性来发挥强效抗炎作用。