内皮细胞表达血管内皮细胞生长因子的研究

目的 观察体外培养的内皮细胞表达和分泌血管内皮细胞生长因子 (VEGF)的情况。方法 以脐静脉内皮细胞系ECV 30 4为研究对象 ,采用RT PCR、流式细胞仪、ELISA法分别观察佛波脂 (PMA)对ECV 30 4合成与分泌VEGF的作用。结果 10 0ng/mlPMA能明显上调VEGFmRNA的表达、VEGF蛋白的合成及分泌。其对VEGFmRNA表达及细胞内VEGF合成的作用在 12h最为明显 ;而分泌至上清液中的VEGF量则在 18h达到高峰。PMA的上述作用能够被放线菌素D所抑制。结论 PMA能够诱导内皮细胞ECV 30 4表达、合成及分泌VEGF ,该作用呈剂量和时间依赖性。其对VEGFmRNA的作用涉及核苷酸的从头合成途径。

单核细胞黏附对内皮细胞表达组织因子的影响及其相关因素

目的 研究人外周血单核细胞黏附对人脐静脉内皮细胞表达组织因子的影响及其相关机制。方法 采用淋巴细胞分离液和Percoll分离法分离人外周血中的单核细胞与酶消化法培养的脐静脉内皮细胞共同培养,在不同的时间(1,2 ,6 ,12和18h)采用一期血浆复钙时间法测定TF促凝活性,用RT -PCR法检测TFmRNA表达,免疫组织化学法检测细胞间黏附分子(ICAM - 1)和TF蛋白的表达。结果 单核细胞黏附脐静脉内皮细胞,2h后内皮细胞上组织因子促凝活性和mRNA表达开始升高,6h后促凝活性达到高峰,呈时间依赖性(P <0 0 5 ) ;I CAM - 1在单核细胞黏附脐静脉内皮细胞后的1h ,表达即显著升高(P <0 0 1) ;组织因子在6h后表达增多(P <0 0 1) ,差异有显著性,两者呈正相关(r=0 72 3,P <0 0 5 )。结论 单核细胞黏附脐静脉内皮细胞是TF促凝活性和表达升高的原因之一,其黏附作用与ICAM - 1的表达相关。

电磁场对移植异体血管内皮细胞表达血管内皮生长因子的影响

本实验旨在观察微血管移植后血管内皮生长因子（VEGF）水平的变化，探讨电磁场对异体血管内皮细胞的影响，现报道如下。一、材料与方法1．材料：清洁级Wister大鼠，购于哈尔滨医科大学动物中心；多聚甲醛、VEGF检测试剂盒购自宁波瑞源生物科技有限公司。可调式电磁场发生系统由哈尔滨工业大学研制（专利申请号：201110426247．6）。

他汀对糖尿病鼠血管内皮细胞白细胞介素-6表达的影响

目的观察高血糖对大鼠动脉内皮细胞表达白细胞介素6(IL6)的影响及不同他汀药物的治疗作用。方法45只SD大鼠随机分为正常对照组9只、糖尿病对照组12只、糖尿病阿托伐他汀治疗组12只、糖尿病普伐他汀治疗组12只(用链脲佐菌素制备糖尿病模型),4周后取其主动脉,采用免疫组化检测各组大鼠动脉内皮细胞IL6的表达。结果糖尿病对照组IL6的表达量高于正常组;糖尿病两治疗组IL6的表达量均低于糖尿病对照组;两治疗组之间无显著性差异。结论高血糖促进内皮细胞产生IL6,而他汀类药物能下调血管内皮细胞IL6的表达。

内皮活化相关新基因EOLA1的体外表达及亚细胞定位

目的 研究内皮细胞高表达脂多糖相关因子 1(Endothelial over expressedlipopolysaccharide associatedfactor 1,EOLA1)基因的体外表达和亚细胞定位 ,为进一步功能研究打下基础。方法 通过偶联转录 翻译系统体外表达EOLA1蛋白 ,并用变性凝胶电泳进行产物检测 ;构建EOLA1 EGFP(绿色荧光蛋白 )融合蛋白表达质粒 ,转染内皮细胞后瞬时表达 ,在激光共聚焦显微镜下观察EOLA1蛋白的亚细胞定位。结果 体外表达的EOLA1蛋白分子量约 18× 10 3,与预测结果相符合 ;EOLA1蛋白主要定位于细胞浆 ,少量表达于细胞核。结论 EOLA1属细胞内结构蛋白 ,可能是参与了炎症时细胞内信号转导。

同型半胱氨酸体外对VCAM-1的表达及内皮单核细胞黏附的影响

目的:探讨同型半胱氨酸(Hcy)对血管内皮细胞VCAM-1的表达及内皮-单核细胞黏附率的影响。方法:体外培养的大鼠主动脉内皮细胞通过区组接种随机分为5组,分别用0、0.01、0.1、1.0、5.0mmol/LHcy干预24h后,检测培养上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性、丙二醛(MDA)浓度及内皮-单核细胞黏附率;免疫细胞化学法检测NF-кB蛋白的表达;Hcy干预8h后检测VCAM-1mRNA表达量。结果:与对照及0.01mmol/LHcy组相比,0.1～5.0mmol/LHcy可明显降低SOD、GSH-Px的活性,增加MDA的生成量;上调NF-кB、VCAM-1的表达,促进内皮-单核细胞黏附。结论:Hcy可能通过自身巯基氧化激活NF-кB,上调VCAM-1等黏附分子的表达,促进内皮-单核细胞的黏附,这可能是Hcy致动脉粥样硬化(AS)的机制之一。

核因子κB反义和诱骗寡核苷酸联合作用对培养人脐静脉内皮细胞血管细胞粘附分子1表达的影响

为探讨在人脐静脉内皮细胞中,核因子κB的反义核酸及诱骗性寡核苷酸联合作用对肿瘤坏死因子α诱导的血管细胞粘附分子1表达的影响,采用培养的人脐静脉内皮细胞株ECV304,分别和联合应用反义核酸和诱骗性寡核苷酸干预,流式细胞仪检测寡核苷酸转染效率,并用逆转录一聚合酶链反应和流式细胞仪测定其对肿瘤坏死因子α诱导的血管细胞粘附分子1的表达。结果发现,联合应用反义核酸及诱骗性寡核苷酸,可使肿瘤坏死因子α刺激的人脐静脉内皮细胞中血管细胞粘附分子1的表达明显下调,且下调幅度显著大于反义核酸或诱骗性寡核苷酸的单独作用。由此提示,核因子κB的反义核酸及诱骗性寡核苷酸可显著下调核因子κB调控的与动脉粥样硬化相关的粘附分子的表达,且联合作用效果强于单独作用,可能为核酸干预防治动脉粥样硬化提供新的思路。

人内皮细胞高表达脂多糖相关因子1启动子荧光素酶报告基因重组体的构建

目的构建内皮细胞高表达脂多糖相关因子1(EOLA1)基因启动子的报告基因重组质粒,为EOLA1启动子的分析鉴定奠定基础。方法提取人内皮细胞基因组DNA,设计引物克隆EOLA1基因上游不同长度的基因片段,插入到含荧光素酶报告基因的载体pGL3-Basic中,经限制性内切酶酶切鉴定、测序。结果成功构建了3种含有不同长度EOLA1上游基因的pGL3-EOLA1-Luc荧光素表达质粒,形成了系列的EOLA1启动子重组体。结论建立的不同长度EOLA1上游基因的报告基因系统为EOLA1启动子的活性分析奠定了基础。

胆固醇损伤内皮细胞差异表达基因的生物信息学分析

目的利用差异表达基因克隆方法(抑制消减杂交)获得大量的动脉粥样硬化相关候选基因和表达序列标签后,探讨如何进行后续基因表达及功能的研究。方法利用Internet网络上的数据库及生物学分析软件对胆固醇损伤内皮细胞后获得的差异表达基因进行核酸序列和蛋白质序列分析,探索差异表达基因克隆后的研究方法和思路。结果通过电子延伸得到一个684bp的全长cDNA序列;通过核酸序列分析,该序列定位在线粒体基因组的7587位～8270位,含有一个完整的开放阅读框,编码与氧化磷酸化相关的9个亚基。对其中一个亚基细胞色素氧化酶Ⅱ(COX2)分析得知,细胞色素氧化酶Ⅱ基因编码一段25.6kDa的弱酸性的信号锚蛋白,细胞色素氧化酶Ⅱ蛋白的三维结构是一个典型的椅式结构,它含有一段疏水区域,一个跨膜结构域和一个胞质结构域。运用蛋白的进化分析,得知细胞色素氧化酶Ⅱ蛋白胞质结构域的氨基酸序列在进化过程中高度保守。结论生物信息学技术是一种高效的获取疾病相关基因信息的方法,利用生物信息学方法对细胞色素氧化酶Ⅱ基因进行分析,获得了基因及其编码蛋白的相关信息,该蛋白参与电子传递,可能与细胞的氧化应激有关。

不同剪切力作用与不同时间点血管内皮细胞内皮素-1和一氧化氮含量变化的差异

目的:应用不同剪切力作用体外培养的脐静脉内皮细胞,观察其在不同时间点内皮素-1和一氧化氮含量表达的差异。方法:实验于2002-07/2004-05在解放军总医院基础医学研究所生化研究室完成。利用流室装置通过精密蠕动泵提供剪切力,以50Pa和100Pa两种剪切力作用体外培养的脐静脉内皮细胞,并分别从30,60,120,300,420min5个时间点取灌流液,对照组为没有施加剪切力的脐静脉内皮细胞。用放射免疫法和硝酸还原酶法检测50Pa和100Pa剪切力作用下及空白对照组脐静脉内皮细胞内皮素-1和一氧化氮的含量。结果:①两组剪切力作用内皮细胞,其内皮素-1的表达量在开始前120min均有升高趋势,在30,60,120min时,50Pa组和100Pa组内皮素-1含量明显高于对照组[(28.7±2.1),(37.8±3.5),(26.0±2.8)ng/L;(33.6±5.8),(43.3±7.2),(26.5±3.6)ng/L;(45.3±9.4),(53.6±8.6),(32.2±4.7)ng/L,(t=1.835～6.079,P<0.05)]。②一氧化氮含量:在30,60,120min时,50Pa组和100Pa组一氧化氮含量明显高于对照组[(37.5±5.4),(40.2±6.7),(20.7±3.0)μmol/L;(52.7±6.3),(63.7±7.2),(21.4±3.3)μmol/L;(67.8±6.9),(84.5±8.6),(23.5±4.1)μmol/L,(t=1.835～6.079,P<0.05)]。100Pa组在60,120min时明显高于50Pa组(t=2.556,3.376,P<0.05)。结论:在一定层流剪切力和时间范围内内皮细胞表达内皮素-1和一氧化氮呈递增趋势,保持相对稳定,当时间进一步延长时,其表达失去平衡,具有强烈收缩血管活性的内皮素-1相对增多,提示损伤内皮细胞的因素增加。

脂糖激活补体诱导内皮细胞释放粘附分子和凋亡

目的：在细胞水平上研究脂多糖（1ipopolysaccharide，LPS）激活血清补体对内皮细胞的作用和影响，进一步探讨临床上常见的细菌感染释放内毒素引发炎症的作用和机理，为相关临床防治策略、新药研发提供有益的思路和有价值的参考。方法：研究LPS激活血清补体的作用方式和特点，观察LPS激活补体对内皮细胞表达粘附分子和凋亡的影响。

外源性抗原诱导内皮细胞增殖及其MICA分子的表达

MHC—I类相关链A（MICA）位于人类第6号染色体，属于非经典HLA—I类基因家族。抗MICA抗体与肾移植排斥反应相关及影响移植肾长期存活的观点已得到学者的广泛认同。MICA分子在移植物血管内皮细胞表达，特别是在内皮细胞膜蛋白的表达，增加了MICA抗原在移植受者体内成为抗移植物靶目标的可能性。

人内皮细胞高表达脂多糖相关因子1蛋白的纯化

目的探讨通过金属螯合亲和层析的方法获得高纯度的人内皮细胞高表达脂多糖相关因子1(EOLA1)蛋白的可行性。方法采用蛋白抽提试剂破菌方法抽提包涵体蛋白,初步纯化后在变性条件下用组氨酸标签结合树脂进行亲和层析,以透析方法复性,对纯化样品进行聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫印迹法、肽质量指纹谱鉴定。结果EOLA1蛋白在大肠杆菌中的表达主要以包涵体形式存在,初步纯化的包涵体中蛋白纯度>75%,亲和层析纯化后获得的蛋白纯度高达90%以上,肽质量指纹谱分析目的蛋白与理论蛋白肽段覆盖率较高。结论所应用的EOLA1蛋白纯化和复性方法简便有效,能够获得足量的高纯度EOLA1蛋白,有助于下一步制备EOLA1单克隆抗体及对相关基因进行功能研究。

E-选择素及其配体与肿瘤关系的研究进展

肿瘤转移是一个多步骤、多环节、多因素参与的复杂过程.研究表明:肿瘤侵袭转移过程中均存在细胞黏附分子及其介导的黏附行为的改变.其中,肿瘤细胞与内皮细胞间的相互作用是造成肿瘤器官特异性转移的重要环节.E-selectin是黏附分子选择素家族中的一员,在激活的内皮细胞表达,其配体SleX、SleA存在于肝癌、食道癌、肠癌等多种肿瘤细胞表面,两者在肿瘤侵袭转移中起着重要的作用.现将E-selectin及其配体与肿瘤关系的研究进展作一综述.