转化生长因子-β与高度近视脉络膜新生血管病变关系的研究进展

高度近视是世界范围内造成视力受损的常见眼病,发病率呈上升趋势,而黄斑区脉络膜新生血管(CNV)是高度近视的并发症之一,也是导致患者失明的主要原因,可明显降低患者的生存质量。转化生长因子-β(TGF-β)作为调节细胞增殖、分化、运动、凋亡的重要因子,通过信号通路、浓度梯度、内皮细胞间充质转化、受体CD105表达等途径调控视网膜/脉络膜新生血管的生成,并在高度近视中发挥巩膜重塑作用,通过促进或抑制其他因子的表达促进近视发展。TGF-β与高度近视CNV密切相关,有望成为治疗高度近视及CNV病变的新靶点。

视网膜色素上皮细胞通过分泌含有miR-4488的外泌体抑制糖尿病视网膜病变进展的机制研究

目的探讨视网膜色素上皮细胞通过分泌含有miR-4488的外泌体抑制糖尿病视网膜病变进展的分子机制。方法将人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19细胞分为空白组、高糖组。将人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)分为NG组、HG组、NG+外泌体组和HG+外泌体组。空白组、NG组和NG+外泌体组细胞用含5.5 mmol·L^(-1)正常浓度葡萄糖的培养基培养24 h;高糖组、HG组和HG+外泌体组细胞用含30 mmol·L^(-1)高浓度葡萄糖的培养基培养24 h;NG+外泌体组和HG+外泌体组细胞在培养基中分别加入空白组或高糖组ARPE-19细胞分泌的外泌体40μg·L^(-1)。PKH67绿色荧光标记外泌体;利用CCK-8法、Transwell小室法检测HRMECs增殖、迁移和血管生成。取空白组和高糖组ARPE-19细胞外泌体进行miRNA微阵列分析。采用双荧光素酶报告分析检测miR-4488和转化生长因子β受体Ⅱ(TGFβR2)基因序列的靶向关系。采用Western blot或免疫荧光染色检测各组HRMECs中TGFβR2、Smad2、p-Smad2ser467或Desmin、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果空白组和高糖组ARPE-19细胞分泌的被PKH67标记的外泌体加入培养基后都可被HRMECs吸收。与NG组相比,HG组HRMECs细胞增殖率、迁移率、血管结点数和血管总长度、TGFβR2和p-Smad2ser467蛋白表达量、Desmin和α-SMA蛋白荧光强度均增加(均为P<0.05);与HG组相比,HG+外泌体组上述指标均被逆转(均为P<0.05);NG+外泌体组与NG组上述指标相比差异均无统计学意义(均为P>0.05)。与空白组相比,高糖组ARPE-19细胞分泌的外泌体中miR-4488相对表达量增加,且miR-4488模拟物和TGFβR2wt共转染可增加双荧光素酶活性(均为P<0.05)。结论在高糖条件下,ARPE-19细胞释放的外泌体可通过miR-4488/TGFβR2/Smad信号通路抑制HRMECs间充质转化。

甲状旁腺激素对HAEC细胞EndMT诱导作用及机制探讨

目的探讨甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)是否诱导血管内皮细胞上皮细胞-间充质转化(endothelial-mesenchymal transition,EndMT)及相关机制。方法血管内皮细胞HAEC培养至对数期,分别加入不同剂量的全长重组PTH(10-12mol/L、10-11mol/L、10-10mol/L、10-9mol/L、10-8mol/L)作用48h;再在10-8mol/L PTH作用下,选择12、24、36、60h 4个时间点;分别收集总蛋白。Western blot分析Ve-Cadherin、CD31、α-SMA、TGF-β1和ILK的表达改变。结果 Western blot结果表明在PTH作用下,血管内皮细胞标志分子Ve-Cadherin和CD31表达降低;纤维细胞标志分子α-SMA表达则显著升高,且呈时间和剂量依赖性。Western blot分析发现TGF-β1和ILK表达同时升高。结论 PTH减弱内皮细胞特征、增强纤维化特征,诱导HAEC细胞发生EndMT,TGF-β1-ILK通路是其调控的可能通路之一。