高级蛋白氧化产物对人脐静脉内皮细胞ECV-304的作用

目的 观察体外制备的高级蛋白氧化产物修饰蛋白（AOPP-HSA）对人脐静脉内皮细胞（ECV-304细胞株）的作用.方法 在高压液相色谱仪（HPLC）中将人血清白蛋白（HSA）用次氯酸处理制备AOPP-HSA,观测AOPP-HSA对ECV-304细胞增殖和凋亡,细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和E-选择素（E-selectin）及单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的表达,以及P50、P65和I-кB的mRNA表达含量的影响.结果 （1）AOPP-HSA与ECV-304细胞共同孵育后,可使其增殖指数下降,约为对照组的70%～80%.凋亡试验结果：AOPP-HSA组细胞早期凋亡较对照组升高17%.（2）ECV-304细胞有ICAM-1和MCP-1的基础表达,与AOPP-HSA共同孵育24 h后,两者的表达均有上调,以VitE预先孵育后,其表达量均较相应浓度AOPP-HSA组有明显下降;ECV-304细胞无E-selectin的基础表达,给予AOPP-HSA后也无改变.（3）ECV-304细胞与AOPP-HSA共同孵育后,其P50、P65的mRNA的相对表达含量均显著上调,在VitE干预组,P50、P65的相对表达含量较相应AOPP-HSA组下降.I-кB mRNA的相对表达含量在AOPP-HSA 100～400 μmol/L各组均明显下降,而在AOPP-HSA 600 μmol/L组中,其I-кB的相对表达含量出现显著的升高,给予VitE干预后,I-кB的相对含量也出现明显升高.结论 AOPP-HSA对ECV-304细胞具有多种生物学效应,可抑制增殖、促进凋亡、上调黏附分子和趋化因子的表达.这些作用可能是通过影响NF-кB而产生的.氧化应激参与了这些作用的发生.

川芎嗪对缺氧缺糖状态下培养的血管内皮细胞ECV-304的影响

目的 :观察缺氧缺糖条件下血管内皮细胞 (ECV 30 4 )释放乳酸脱氢酶 (LDH)、一氧化氮 (NO)、丙二醛(MDA)水平和细胞膜流动性的变化及川芎嗪对它们的影响。方法 :缺氧缺糖诱导血管内皮细胞损伤 ,自动生化分析仪测定培养液和细胞层中LDH活性 ;用比色法测定细胞培养液中NO水平 ;用荧光法检测细胞内脂质过氧化产物MDA以评价脂质过氧化程度 ;荧光偏振法测定内皮细胞膜流动性。结果 :缺氧缺糖引起的血管内皮细胞LDH释放增加、MDA生成增多和膜流动性增高 ,NO水平降低。而川芎嗪可抑制缺氧缺糖引起的血管内皮细胞释放LDH ,MDA生成和降低细胞膜流动性 ,提高NO水平。结论 :川芎嗪可保护缺氧缺糖诱导血管内皮细胞的损伤 ,其作用机制有待进一步研究。

氧化低密度脂蛋白对人血管内皮细胞ECV-304促增殖及诱导凋亡的作用

目的 :探讨氧化低密度脂蛋白 (ox -LDL)对血管内皮细胞损伤作用的多样性。方法 :通过细胞形态学、台盼蓝活细胞计数、细胞毒四唑盐 (MTT)比色试验、乳酸脱氢酶 (LDH)、流式细胞凋亡和细胞凋亡小分子量DNA片段凝胶电泳测定法 ,观察 (0 1、1、10、10 0、15 0和 2 0 0 )mg/L的ox-LDL的条件培养液对人血管脐静脉内皮细胞ECV- 3 0 4的影响。结果 :(0 1- 10 )mg/L的ox -LDL对ECV - 3 0 4细胞具有促增殖作用 ,而增加浓度达 10 0mg/L及以上时 ,其表现则主要是对ECV - 3 0 4的细胞毒性 ;而且 ,这种细胞毒性以当ox -LDL的浓度达到 15 0和 2 0 0mg/L时 ,在12h开始诱导ECV - 3 0 4细胞出现凋亡 ,分别达 15 86%和 2 1 89%。而当ox-LDL作用ECV - 3 0 4细胞 18h后 ,则出现伴随凋亡的细胞坏死。结论 :ox -LDL具有很强的细胞毒性 ,其对内皮细胞的细胞毒性经历了促细胞增殖、凋亡前期。

硒对人脐静脉内皮细胞ECV-304单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的 观察硒对人脐静脉内皮细胞 ECV- 30 4单核细胞趋化蛋白 - 1(MCP- 1)表达的影响。方法 分别用高葡萄糖、糖基化终末产物 ,高胰岛素和过氧化氢孵育人脐静脉内皮细胞 ECV- 30 4 ;在先加入 10 0 nmol/L硒后 ,再给予以上 4种因素 ,分别检测人脐静脉内皮细胞 ECV- 30 4 MCP- 1m RNA的表达并比较。结果 4种因素均可作为独立因素 ,导致人脐静脉内皮细胞 ECV- 30 4 MCP- 1m RNA表达量增加 ;硒能抑制 4种因素所致的MCP- 1m RNA表达。结论 硒抑制 MCP- 1m RNA在人脐静脉内皮细胞 ECV- 30 4中的表达。

Baicalein抑制人血管内皮细胞ECV-304的增殖和迁移

目的 探讨选择性 12 -脂氧酶抑制剂baicalein对血管内皮细胞增殖和移行的抑制作用。方法 采用倒置显微镜、光镜、流式细胞仪进行细胞周期分析、MTT检测、缺损闭合实验观察分析不同浓度baicalein作用后 ,人脐静脉内皮细胞系ECV 30 4细胞形态、增殖和迁移的变化。结果 (1)不同浓度 (0 .1～ 10 0 μM )的baicalein处理ECV 30 4细胞 2 4～ 12 0h后或一定浓度 (30 μM)的baicalein处理ECV 30 4细胞不同时间 (1～ 6d)后 ,内皮细胞变形 ,有不同程度的变性、坏死 ,与baicalein的浓度和作用时间成正比 ;(2 )细胞周期分析显示baicalein处理后细胞周期阻滞在G0 /G1期 ,4 8h时相点最为显著 ;并在G0 /G1期前出现高于对照的凋亡峰 (Sub G1) ,12h时相点最高(10 .6 % ) (P <0 .0 1) ;(3)缺损闭合实验baicalein处理组的ECV 30 4细胞缺损区面积显著大于对照组 (P <0 .0 1)。结论 选择性 12 脂氧酶抑制剂baicalein抑制血管内皮细胞的增殖和迁移 ,初步证明亦有诱导凋亡的作用 。

人巨细胞病毒感染对单核细胞和内皮细胞株ECV-304间趋化和黏附的增强作用

目的 研究人巨细胞病毒(HCMV)感染对单核细胞及内皮细胞株表达趋化因子的影响,以及对两者之间趋化和黏附的影响。方法 通过ELISA法和半定量RT-PCR的方法,检测CMV感染对单核细胞株(THP-1)及内皮细胞株(ECV-304)几种趋化因子及其受体表达的改变,同时通过趋化实验和黏附实验研究内皮细胞对单核细胞的趋化和黏附的改变。结果 HCMV感染可刺激ECV-304分泌MCP-1、GROα,在mRNA水平可改变内皮细胞MCP-1、CRO-α和IL-8表达,先下调后上调(IL-8除外);而对单核细胞趋化因子受体CCR2、CXCR2的表达在mRNA水平却有明显的下调作用(P<0.05)。HCMV感染可显著增强内皮细胞对单核细胞的趋化和黏附。结论 HCMV感染可增强内皮细胞对单核细胞的趋化和黏附,参与炎症反应,这可能与CMV上调内皮细胞趋化因子表达有关。

同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞株ECV-304生长的抑制作用

目的 :观察同型半胱氨酸 (Hcy)对人脐静脉内皮细胞株ECV 30 4细胞生长的影响 ,探讨高同型半胱氨酸血症 (HHCY)致动脉粥样硬化 (As)的机制。方法 :将不同浓度Hcy与ECV 30 4细胞体外共培养不同时间 ,倒置显微镜下观察细胞形态 ,MTT法检测细胞生长抑制率 ,3 H TdR掺入法检测细胞DNA合成。结果 :显微镜见对照组细胞呈单层鹅卵石样紧密排列 ,而实验组随Hcy浓度的升高及作用时间的延长 ,细胞排列杂乱 ,聚集成团。低浓度Hcy对细胞生长的抑制作用不明显 ,5 .0、10 .0mmol/LHcy对细胞生长呈现抑制作用 ,且两组浓度作用 72h的生长抑制率高于作用 4 8h(P <0 .0 1)。 5 .0、10 .0mmol/LHcy作用 4 8h、72h ,3 H TdR掺入抑制率高于相应对照组和低浓度组 ,且作用 72h的掺入抑制率显著高于 4 8h(P <0 .0 1)。结论 :Hcy对VEC具有直接损伤作用 ,可以时间及剂量依赖方式抑制ECV 30 4细胞的生长及DNA的合成。

血管抑制素对血管内皮细胞系ECV-304的抑制作用

目的 观察血管抑制素 (Angiostatin)对血管内皮细胞系ECV 3 0 4的抑制作用。 方法 利用MTT法分析结果 ,实验分为 :1 .将血管抑制素与细胞同时加入 ;2 .先接种细胞 ,培养 2 4h后再加血管抑制素。结果 血管抑制素对ECV 3 0 4的抑制作用呈典型的量效关系。结论 血管抑制素对血管内皮细胞有显著的抑制作用。

两种剂型的鱼肝油酸钠对ECV-304细胞系病理作用的对比研究

目的对比研究鱼肝油酸钠的普通剂型和脂质体剂型对ECV-304细胞系的病理作用。方法以ECV-304细胞系为实验对象,分别加入鱼肝油酸钠的普通剂型和脂质体剂型,通过对比形态学(倒置显微镜、Giemsa染色、透射电镜观察)、细胞活性(MTT法)及流式细胞仪检测来探讨不同剂型对ECV-304细胞系作用及其机制。结果普通剂型组出现细胞水肿、线粒体和内质网肿胀、染色质絮状化等坏死性变化;脂质体剂型组中染色质出现了新月状边集,碎裂并向胞膜移动,形成凋亡小体。细胞活性测定显示普通剂型组活细胞数目下降速度快;脂质体剂型组活细胞数目下降速度较慢。脂质体剂型组PI染色后行流式细胞仪检测,结果出现典型亚二倍峰。结论鱼肝油酸钠普通剂型表现为剧烈的毒性作用,呈现坏死性变化;而鱼肝油酸钠脂质体剂型对ECV-304细胞系表现为渐进性的缓释作用,诱导细胞发生凋亡性变化。

舒林酸和吲哚美辛对人血管内皮细胞ECV304的生长抑制作用

目的 体外研究非甾体类消炎药对人血管内皮细胞的生长抑制作用。方法 采用舒林酸和吲哚美辛作用于人脐静脉内皮细胞株ECV30 4 ,并设置不同的作用浓度和作用时间 ,以体外药物敏感实验 (MTT)检测舒林酸和吲哚美辛在不同浓度及作用时间下对ECV30 4细胞的增殖抑制效应 ;以流式细胞仪技术和Hoechst332 5 8荧光染色检测药物作用后细胞有无凋亡改变及其形态学变化。结果 舒林酸和吲哚美辛在体外对ECV30 4细胞均有显著的生长抑制作用 ,并且具有时间和剂量依赖性 ,舒林酸能显著诱导ECV30 4细胞产生凋亡。结论 舒林酸和吲哚美辛在体外具有良好的抑制人脐静脉内皮细胞株ECV30 4生长的作用 ,非甾体类消炎药能够诱导血管内皮细胞产生凋亡而抑制其生长 ,同时也可能存在其他的作用机制。

β-榄香烯对ECV-304细胞碱性成纤维细胞生长因子受体mRNA表达的调节作用

β-榄香烯（β-elemene）是基于20世纪70年代莪术挥发油局部治疗宫颈癌有良好效果发现的一种有效抗癌成分[1]。随着对其研究的深入,发现β-榄香烯对多种肿瘤细胞的增殖活性具有选择性抑制作用、诱导肿瘤细胞凋亡及分化、抗肿瘤转移、逆转肿瘤细胞耐药性、免疫增强、抗瘤谱广、抑制血管生长等特点,得到临床广泛的应用。

川芎嗪二苯甲基哌嗪衍生物对ECV-304细胞氧化损伤的保护作用

目的:研究川芎嗪二苯甲基哌嗪衍生物对ECV-304细胞氧化损伤的保护作用。方法:用过氧化氢致ECV-304细胞损伤,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活数量。结果:川芎嗪二苯甲基哌嗪衍生物具有对ECV-304细胞氧化损伤的保护作用,其活性比川芎嗪强。结论:川芎嗪二苯甲基哌嗪衍生物具有对ECV-304细胞氧化损伤的保护作用。

PTEN抑制人脐静脉内皮细胞ECV304的增殖和VEGF的表达

目的:探讨与张力蛋白同源的10号染色体缺失的磷酸酶基因(phosphatase and tensin hemology deleted on chromo-some ten gene,PTEN)对人脐静脉内皮细胞ECV304细胞增殖、凋亡,及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体1(VEGF receptor 1,VEGFR1)的影响。方法:将携带有野生型PTEN及绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的腺病毒Ad-PTEN-GFP及空载体腺病毒Ad-GFP感染ECV304细胞,MTT实验、Hoechst3342染色法及流式细胞术检测ECV304细胞的增殖和凋亡。实时荧光定量PCR法检测Ad-PTEN-GFP感染后ECV304细胞中PTEN、VEGF和VEG-FR1 mRNA表达水平,ELISA检测ECV304细胞培养上清中VEGF的水平。鸡胚尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)血管生长实验检测PTEN对鸡胚血管生长的影响。结果:与Ad-GFP相比,Ad-PTEN-GFP感染能明显抑制ECV304细胞的增殖,诱导细胞凋亡,5 d时增殖抑制率可达(50.38±5.42)%、细胞凋亡率达(73.3±5.3)%。当感染复数为100时,Ad-PTEN-GFP组ECV304细胞的VEGF及VEGFR1 mRNA表达水平分别为未感染组的(13.40±1.32)%及(46.12±5.20)%。同时,Ad-PTEN-GFP感染能够明显抑制CAM体内血管生长[血管指数(57.6±3.37)%vs(92.2±4.37)%,P<0.05]。结论:PTEN能显著抑制人脐静脉内皮细胞ECV304的增殖、促进其凋亡,其机制可能与抑制VEGF和VEGFR1表达,抑制血管新生有关。

汉黄芩素对人胃癌细胞SGC-7901和人脐静脉内皮细胞ECV304增殖抑制及能量代谢的影响

目的探讨汉黄芩素(Wogonin)对人胃癌细胞SGC-7901和人脐静脉内皮细胞ECV304增殖抑制及能量代谢的影响及机制。方法采用MTT法和生长曲线法检测汉黄芩素对2种细胞的增殖抑制活性;HE染色法观察细胞形态变化;检测己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)、乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)的活力及三磷酸腺苷(ATP)含量;Western Blot法检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和单羧基转运体4(MCT4)蛋白表达水平。结果15μg·mL-1汉黄芩素对SGC-7901、ECV304的细胞增殖抑制率较好,且作用相近(P>0.05),故选择该浓度作为后续实验浓度。与对照组比较,汉黄芩素对2种细胞均有明显的持续增殖抑制作用,实验组细胞浓度在第6天下降最为明显(P<0.01);汉黄芩素干预后2种细胞均出现数量变少、胞质凝集等形态变化,SGC-7901细胞改变更为明显;SGC-7901汉黄芩素组的LDH、SDH活力及ATP含量显著降低(P<0.05,P<0.01),ECV304汉黄芩素组的HK活力及ATP含量显著下降(P<0.01);SGC-7901、ECV304细胞在汉黄芩素干预后HIF-1α及MCT4蛋白表达均明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论汉黄芩素可能通过下调SGC-7901、ECV304细胞的HIF-1α及MCT4表达,抑制2种细胞不同能量代谢酶活力,减少ATP生成,改善细胞酸性微环境,抑制胃癌细胞增殖和肿瘤血管生成,其对不同细胞能量代谢的影响具有差异性。

常规制备家兔血清对人脐静脉内皮细胞-304的影响

目的 :探讨中药血清药理学研究中常规制备的正常家兔血清浓度变化对培养体系中细胞的影响。方法 :常规制备无污染、无溶血正常家兔血清 ,通过细胞形态学、台盼蓝染色活细胞计数、细胞毒四唑盐 (MTT)比色试验、乳酸脱氢酶 (LDH)及血管紧张素转换酶 (ACE)等指标 ,观察 5 %、10 %、2 0 %、4 0 %、60 %和 80 %家兔血清对人脐静脉内皮细胞 (VEC) 30 4的影响。结果 :5 %和 10 %两浓度组各指标均无变化 ,对VEC 30 4没有损伤作用。 4 0 %、60 %和 80 % 3个浓度组家兔血清浓度对细胞均有不同程度的损伤 ,而且随着浓度的增加 ,呈现出损伤加重的趋势 ,而 2 0 %的浓度从细胞形态、台盼蓝染色活细胞计数、MTT及ACE方面没有表现出明显的损伤作用 ,只有LDH含量差异有显著性 (P <0 0 1)。结论 :常规制备的家兔血清在无污染和无溶血的情况下 ,其对细胞的作用浓度是有一定限制的 ,当达到 4 0 %或更高浓度时有较为明显的损伤。所以 ,在中药血清药理学研究中 ,应进行常规制备正常血清及含药血清的细胞毒实验 。

同型半胱氨酸硫内酯对ECV-304细胞凋亡及ROS生成的影响

目的 探讨同型半胱氨酸硫内酯(HcyT)对人脐静脉内皮细胞株(HUVEC)的损伤作用及其可能机制。方法 采用倒置显微镜、四唑盐(MTT)比色法及碘化吡啶(PI)染色流式细胞仪检测HeyT对细胞毒性作用，以荧光标记流式细胞仪检测细胞内反应性氧类(ROS)的生成。结果 一定剂量HcyT刺激后，内皮细胞发生凋亡，且凋亡呈浓度时间依赖性。随着HcyT浓度的增加，ROS的生成逐渐增加。结论 HcyT通过ROS呈时间浓度依赖性地诱导内皮细胞凋亡，这可能是Hey致血管病变的机制之一。

同型半胱氨酸对ECV-304细胞NO和ROS形成的影响

目的 :观察同型半胱氨酸 (Hcy)对ECV 30 4细胞产生一氧化氮 (NO)及其对细胞内活性氧 (ROS)产生的影响。 方法 :将不同浓度的Hcy与ECV 30 4细胞体外共培养 2 4h ,硝酸还原酶法检测 3种一氧化氮合酶 (NOS)激动剂前后各组NO含量 ;流式细胞术检测细胞荧光强度 ,以反映ROS水平。结果 :0 .5 0、1.0 0mmol/LHcy作用 2 4h时NO量明显低于对照组(P <0 .0 1) ;加入 3种NOS激动剂刺激后 ,仍显示Hcy对ECV 30 4细胞释放NO反应的抑制作用 ,1.0 0mmol/LHcy组与对照组和低浓度组差异均有显著性 (P <0 .0 1)。 0 .5 0、1.0 0mmol/LHcy组的荧光强度明显高于对照组和低浓度组 (P <0 .0 1)。结论 :Hcy可促进血管内皮细胞内ROS的产生 ,并抑制NO的形成 ,且呈剂量