内脂素对人胆管癌细胞QBC939侵袭及增殖影响的体外研究

目的:研究人内脂素(visfatin)对胆管癌细胞QBC939体外增殖和侵袭能力的影响,并初步探讨可能存在的机制。方法:培养胆管癌细胞QBC939,在不同浓度的内脂素作用不同时间后,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖能力,用Tran-swell小室检测内脂素(200 ng/ml)24 h后对胆管癌QBC939细胞侵袭能力的影响,Western blot检测内脂素对QBC939细胞内基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2蛋白的表达。结果:内脂素可以促进QBC939细胞的增殖(P<0.01),且存在剂量依赖性;内脂素(200 ng/ml)处理24 h后,QBC939细胞穿透聚碳酸酯膜的能力与对照组相比显著增强(P<0.01);Westernblot显示内脂素(200 ng/m1)处理24 h后,QBC939细胞MMP-2蛋白的表达明显增高。结论:内脂素可以明显提高人胆管癌细胞QBC939的增殖和侵袭能力,其作用机制可能与MMP-2水平的增高有关。

RNA干扰ANXA5表达对人胆管癌细胞QBC939的增殖和侵袭的影响

目的:探讨膜联蛋白A5(ANXA5)对人胆管癌细胞QBC939增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:构建3个沉默QBC939细胞ANXA5的shRNA质粒(ANXA5-sh1/2/3)和1个阴性对照质粒,慢病毒包装质粒后感染QBC939细胞,流式细胞仪检测感染效率。病毒感染QBC939细胞后,Western blotting检测细胞的ANXA5蛋白表达情况;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率变化;划痕实验和Transwell实验评估QBC939细胞迁移和侵袭能力的变化。结果:干扰组(KD)细胞中的ANXA5蛋白水平显著低于空白组(BC)和阴性对照组(NC)细胞中的ANXA5蛋白水平。与NC组和BC组细胞相比,KD组细胞中G0/1细胞的百分比和凋亡率增高,而细胞增殖活性降低。KD组细胞中的细胞迁移和侵袭能力也低于NC和BC组细胞。结论:RNA干扰QBC939细胞的ANXA5表达后,明显抑制其增殖、侵袭和诱导凋亡的作用。

阻断NF-κB信号通路对人肝门部胆管癌细胞QBC939增殖的影响

目的:研究阻断NF-κB信号通路对人肝门部胆管癌细胞QBC939生长增殖的影响。方法:常规培养QBC939细胞,采用PDTC(100μmol/L)阻断NF-κB信号通路,Western blot检测核内P65蛋白水平的表达,CCK-8检测细胞生长增殖抑制率,流式细胞仪观察细胞周期与凋亡的变化情况。结果:经PDTC阻断NF-κB信号通路后,与对照组相比,细胞核内P65蛋白水平明显下降(P<0.05)。CCK-8检测显示细胞增殖活性明显受到抑制,并随时间的延长而愈渐明显,12、24、36h后细胞增殖抑制率分别为(22.53±0.03)%、(46.54±0.03)%、(58.02±0.03)%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测发现实验组G0/G1期细胞比例高于对照组,分别为(68.53±1.72)%、(38.3±1.35)%,差异有统计学意义(P<0.05);细胞凋亡率在实验组为(27.68±2.77)%,对照组仅为(9.27±2.36)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:阻断NF-κB信号通路诱导人肝门部胆管癌细胞G_0/G_1期阻滞及细胞凋亡,从而抑制细胞生长与增殖,提示NF-κB信号通路组成性激活参与人肝门部胆管癌的发生发展,以NF-κB信号通路作为治疗的靶点可能给人肝门部胆管癌带来新的治疗选择。

冬凌草甲素对胆管癌QBC939细胞增殖、凋亡及端粒酶活性的影响

目的探讨冬凌草甲素对胆管癌细胞系QBC939细胞增殖、凋亡及端粒酶活性的影响。方法采用不同浓度冬凌草甲素(0、10、20、40、80、100μmol/L)处理QBC939细胞24、48、72 h,MTT法测定QBC939细胞活力并计算增殖抑制率;不同浓度冬凌草甲素(0、20、40、80μmol/L)处理QBC939细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率,Western Blot法检测QBC939细胞B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达,端粒酶重复序列扩增法检测QBC939细胞的端粒酶活性。结果 QBC939细胞增殖抑制率随冬凌草甲素的药物浓度升高、作用时间延长而升高;与0μmol/L冬凌草甲素组相比,其他浓度冬凌草甲素组的S期细胞比例降低;0、20、40、80μmol/L冬凌草甲素组QBC939细胞的凋亡率分别为0.5%、14.8%、25.8%及37.7%;Western Blot结果显示随着药物浓度的升高,QBC939细胞的Bax表达量逐渐升高,Bcl-2表达量逐渐降低;其他浓度冬凌草甲素组QBC939的端粒酶活性均低于0μmol/L冬凌草甲素组,且QBC939细胞的端粒酶活性随冬凌草甲素浓度的升高而降低(P<0.05)。结论冬凌草甲素可抑制QBC939细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制Bcl-2表达以降低端粒酶活性有关。

体外转染PTEN抑制胆管癌QBC939细胞生长及下调mTOR表达的研究

目的研究信号转导通路PI3K/AKT/PTEN/mTOR中抑癌基因PTEN在体外对胆管癌QBC 9 3 9细胞生长的抑制作用,及对下游mTOR表达的影响。方法用携带有野生型PTEN和突变型PTEN的真核表达载体及空载质粒转染QBC 9 3 9;用W estern blot检测转染后PTEN蛋白的表达及蛋白激酶B磷酸化的变化;流式细胞技术检测细胞周期和细胞凋亡情况,及对下游mTOR表达的影响。结果野生型PTEN转染成功后的QBC 9 3 9细胞中PTEN明显上升,磷酸化AKT明显下降,mTOR表达也明显下调;而突变型PTEN转染后的细胞中PTEN上升,但磷酸化AKT的变化不明显,mTOR的表达亦无明显变化。结论PTEN通过磷酸化AKT使之活化,进一步使下游的mTOR同步下调,继而调节肿瘤细胞周期和细胞凋亡。在PI3K/AKT/PTEN/mTOR信号转导途径中,PTEN与mTOR通过AKT的磷酸化有密切关系。

平消胶囊对胆管癌细胞生长及CD44v6蛋白表达的影响

目的通过观察平消胶囊(郁金、马钱子粉、仙鹤草、五灵脂、白矾、硝石、干漆、枳壳)血清作用于人肝外胆管癌细胞QBC939后,对癌细胞的生长和转移的影响,探讨其抗癌及转移机制。方法将平消胶囊灌喂大鼠,制备含药血清,血清培养胆管癌细胞,MTT法检测不同剂量含药血清对人胆管癌细胞QBC939的生长抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期、细胞膜上黏附分子CD44v6表达的变化。结果平消胶囊血清能明显抑制人肝外胆管癌细胞QBC939的增殖,具有时间、剂量依赖关系。药物作用后,QBC939细胞生长受阻于G0/G1期,并且黏附分子CD44v6在细胞膜上表达下调,剂量越大,CD44v6下调越明显。结论平消胶囊能有效地抑制QBC939细胞增殖,通过影响细胞生长、诱导细胞膜上黏附分子CD44v6表达下调,导致细胞凋亡,防止癌细胞转移。

反义CD147分子对人胆管癌细胞株侵袭性影响的实验研究

目的探讨反义CD147分子对人胆管癌细胞株QBC939侵袭性的影响。方法构建含反义CD147分子片段的重组真核表达质粒,将人胆管癌细胞株QBC939分为三组:(1)反义CD147组,运用重组真核表达质粒as CD147-pc DNA3.1(-)转染QBC939细胞;(2)空质粒组,运用pc DNA3.1(-)空质粒转染QBC939细胞;(3)对照组,运用DMEM常规处理细胞。采用MTT法检测各组QBC939细胞的生长情况,RT-PCR和Western blotting法分别对三组QBC939细胞中的CD147、MMP-2、MMP-9、TIMP-2的m RNA表达水平及其对应蛋白的表达水平进行检测。结果成功构建了携带反义CD147分子片段的重组真核表达质粒。MTT法检测显示:三组QBC939细胞的生长曲线及对数生长期情况无统计学差异(P>0.05)。RT-PCR法检测显示:反义CD147组QBC939细胞中CD147和MMP-2分子的m RNA表达均低于空质粒组和对照组(P<0.05),且空质粒组与对照组相比无统计学差异(P>0.05);反义CD147组QBC939细胞中MMP-9和TIMP-2分子的m RNA表达与空质粒组和对照组相比无统计学差异(P>0.05)。Western blotting检测发现:与空质粒组和对照组相比,反义CD147组QBC939细胞中CD147和MMP-2分子的蛋白表达明显降低(P<0.05),空质粒组与对照组相比无统计学差异(P>0.05);与空质粒组和对照组相比,反义CD147组QBC939细胞株中MMP-9和TIMP-2分子的蛋白表达无统计学差异(P>0.05)。结论 (1)反义CD147对胆管癌细胞株QBC939的生长无影响;(2)反义CD147对胆管癌细胞株QBC939中MMP-9和TIMP-2的m RNA表达及对应蛋白表达无影响;(3)反义CD147降低胆管癌细胞株QBC939中CD147和MMP-2的m RNA表达及对应蛋白表达,可能会降低胆管癌细胞株的侵袭性。

NF-κB特异性抑制剂PDTC对人肝门部胆管癌细胞增殖及SMYD3表达的影响

【目的】研究核转录因子-κB(NF-κB)特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲盐酸对肝门部胆管癌QBC939细胞增殖及组蛋白甲基转移酶表达的影响。【方法】不同浓度的PDTC作用于QBC939细胞不同时间后,CCK-8测定其对QBC939细胞增殖的抑制率,流式细胞仪观察QBC939细胞的周期变化情况,RT-PCR检测PDTC作用下QBC939细胞中SMYD3 mRNA的表达情况,Western blot法检测QBC939细胞内SMYD3蛋白的表达。【结果】经PDTC处理的实验组,肿瘤细胞增殖活性明显受到抑制(P<0.05),呈时间和剂量依赖性;与对照组相比,PDTC作用后QBC939细胞G0/G1期细胞比例上升(P<0.05),并同时伴有癌细胞内SMYD3 mRNA和蛋白表达的降低(P<0.01),且呈明显的剂量依赖关系。【结论】PDTC具有显著抑制肝门部胆管癌QBC939细胞生长的作用,其机制可能与细胞增殖抑制、周期阻滞、以及NF-κB、SMYD3表达抑制有关。

人参皂苷Rg3逆转人胆管癌细胞多药耐药性的实验研究

目的探讨人参皂苷Rg3逆转人胆管癌多药耐药细胞株QBC939/ADM的耐药性。方法人胆管癌多药耐药细胞株QBC939/ADM的建立,主要采用阿霉素(ADM)持续接触浓度递增法,必要时结合高低浓度交替法诱导人胆管癌细胞QBC939产生多药耐药性(MDR)。将三种不同浓度的化疗药物,即环磷酰胺(CTX)、丝裂霉素(MMC)、5-氟尿嘧啶(5-FU)分别作用于QBC939及QBC939/ADM,用CCK-8法检测不同化疗药物的细胞毒作用,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR法检测MDR基因的表达水平,将得到的数据运用统计学分析,并得出结果,从而证明人胆管癌多药耐药细胞株QBC939/ADM的建立。以中药人参的有效成分人参皂苷Rg3作为MDR逆转剂,逆转QBC939/ADM的MDR,用CCK-8法、流式细胞术、RT-PCR法检测其逆转作用。结果CCK-8法检测化疗药物作用于对照组和实验组的细胞毒作用,结果显示:实验组细胞的OD值(吸光度)明显低于对照组,P <0. 05,差异有统计学意义;流式细胞仪检测化疗药物作用于对照组和实验组的细胞凋亡率:实验组的细胞凋亡率明显高于对照组,P <0. 05,差异有统计学意义; RT-PCR法测定MDR基因的表达,结果显示实验组MDR基因的表达明显低于QBC939/ADM,P <0. 05,差异有统计学意义。结论人胆管癌多药耐药细胞株QBC939/ADM成功建立,并初步证明中药人参的有效成分人参皂苷Rg3能有效逆转其MDR,但其逆转机制尚未研究,需进一步探索。

姜黄素增强人胆管癌细胞株QBC939对吉西他滨敏感性的研究

目的探讨姜黄素对人胆管癌细胞株QBC939吉西他滨的增敏作用及其机制研究。方法将人胆管癌细胞QBC939培养后分为对照组、5μg／m1单药姜黄素组、0．625μg／m1单药吉西他滨组及5μg／m1姜黄素联合0．625μg／m1吉西他滨组，采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞周期及凋亡变化，同时用Westernblot法检测相关蛋白核因子±κB（NF±κB）、细胞周期蛋白（Cyclin）B1、凋亡抑制蛋白（1AP）-1的表达改变。结果姜黄素联合吉西他滨处理人胆管癌细胞QBC939后12、24、48、72h的抑制率分别为（10．00±0．02）％、（23．10±0．03）％、（33．234±0．01）％、（48．304±0．05）％，显著高于对照组及单药组（P=0．001、0．000、0．000、0．000）。两药联合作用后能使（28．75±3．23）％的人胆管癌细胞QBC939被阻滞在G2／M期，显著高于单药姜黄素组及单药吉西他滨组[（14．494±2．20）％、（11．824±2．10）％；P=0．000]，且细胞凋亡率为（13．644±3．40）％，显著高于对照组、单药姜黄素组及单药吉西他滨组[（4．534±0．56）％、（6．47±0．98）％、（9．874±1．12）％，P=0．000]；姜黄素联合吉西他滨作用于人胆管癌细胞株QBC939后NF±κB及下游分子CyclinB1和IAP±1蛋白的相对表达量分别为0．3004±0．001、0．4074±0．036、0．4754±0．032，显著低于对照组、单药姜黄素组及单药吉西他滨组（P=0．000、0．001、0．003）。结论姜黄素可增强人胆管癌细胞株QBC939对吉西他滨的敏感性，其机制可能与NF±κB信号通路的抑制相关。

小泛素样修饰物特异性蛋白酶1促进人胆管癌细胞株QBC939的增殖与侵袭

本研究旨在观察小泛素样修饰物特异性蛋白酶1（SENP1）对人胆管癌细胞株QBC939增殖与侵袭能力的影响。

选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398对胆管癌细胞株QBC939的抑制作用

NS-398是一种选择性环氧合酶．2（COX-2）的抑制剂，其抗肿瘤作用与其抑制COX-2的活性，减少前列腺素生成有关。本研究旨在探讨NS-398对人胆管癌细胞QBC939的作用机制。一。

Wnt通路关键因子在人胆管癌细胞株QBC939中的表达及其意义

目的 以人胆管癌细胞株QBC939为基础,观察Wnt通路关键因子的表达,探讨Wnt信号通路在胆管癌发生、发展中的作用.方法 体外培养人胆管癌细胞株QBC939,利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot分别从mRNA水平、蛋白水平检测Wnt、β-catenin因子的表达.结果 Wnt、β-catenin在体外培养人胆管癌细胞株QBC939中有较高水平表达.结论 人胆管癌细胞株QBC939中存在Wnt通路关键因子的高表达,提示Wnt可能在胆管癌发生、发展中起了重要作用.

联合应用9-顺式维甲酸和化疗药物对人胆管癌细胞系QBC_(939)的作用

目的 观察联合应用分化诱导剂9-cis RA和化疗药物对人胆管癌细胞QBC939细胞的作用,为临床诱导分化治疗胆管癌提供实验基础。方法 以10-6mol/L的9-cis RA作用于培养的人胆管癌细胞系QBC939细胞1、2、3、5 d后检测几种常用化疗药物对细胞的杀伤作用。并观察同时加入10-6mol/L的9-cis RA和化疗药物对QBC939细胞的杀伤作用。结果 同时应用9-cis,RA和化疗药物时,对QBC939细胞的杀伤作用与单用化疗药物时无明显差异。9-cis RA作用2 d和3 d时,化疗药物对QBC939,细胞的杀伤作用强于9-cis RA作用前;9-cis RA作用5 d时,化疗药物对QBC939细胞的作用较9-cis RA作用前强,但比3 d时下降。结论先用9-cis RA作用后可增强QBC939细胞对化疗药物的敏感性,此作用与9-cis RA作用时间有关。不同联合用药方法的效果不同。

大黄素对胆管癌QBC939细胞凋亡及丝裂原活化蛋白激酶信号转导途径表达的影响

目的 观察大黄素在体外对胆管癌QBC939细胞增殖的抑制作用及信号转导通路丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）的影响.方法 用大黄素作为干预因素,剂量效应组分别用不同浓度大黄素的培养液与QBC939细胞共培养;检测细胞增殖、凋亡,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞中c-myc mRNA表达,Western blot检测细胞中c-myc、MAPK、p-MAPK蛋白质的表达.结果 大黄素抑制QBC939细胞增殖,0、20、40、80 μmol/L大黄素对QBC939细胞增殖抑制率分别为（4.73±0.88）％、（21.27±4.04）％、（38.68±4.57）％、（62.45±6.12）％ （P ＜0.05）,c-myc、p-MAPK蛋白明显下降,MAPK蛋白表达无变化.结论 大黄素可能通过抑制MAPK信号转导途径抑制QBC939细胞增殖.

尼美舒利对体外培养人胆管癌细胞QBC939增殖的抑制作用

近年来研究表明,环氧合酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）抑制剂具有抑制结肠癌、胃癌、肝癌等癌细胞增殖的作用.我们采用选择性COX-2抑制剂尼美舒利作用于胆管癌QBC939细胞,观察尼美舒利对胆管癌细胞的影响.……

索拉非尼对胆管癌细胞株QBC939增殖和凋亡的影响

索拉非尼能抑制细胞转化分裂介质（Raf-1）、B-Raf、B-RafV600E、血管内皮生长因子受体（VEGFR）、血小板源性生长因子受体（PDGFR）-h、Fh-3和c-Kit等多种激酶活性，已被美国食品药品监督管理局批准用于晚期肾癌及肝癌的治疗。国外临床前试验发现索拉非尼对胆管细胞癌也具有抗瘤活性，但确切机制尚不清楚。本实验旨在观察在体外条件下索拉非尼对胆管细胞癌增殖及凋亡的影响，并探讨其机制。

Bcl-2反义寡核苷酸对人胆管癌细胞株QBC939中Bcl-2表达的影响

胆管癌对放疗、化疗不敏感，手术效果差，如何提高其治疗效果，一直是困扰临床医师的难题。作者既往的实验显示胆管癌组织中Bcl-2高表达，胆管癌细胞株QBC939中Bcl-2阳性表达，Bcl-2反义寡核苷酸（ASODN）可抑制QBC939细胞增殖。本研究将Bcl-2 ASODN作用于人胆管癌细胞株QBC939，旨在探索Bcl-2 ASODN作用的分子机制，为胆管癌反义基因治疗提供实验依据。

胆囊收缩素对胆管癌细胞生长的影响

目的 探讨胆囊收缩素（CCK）对胆管癌细胞生长的影响。方法 应用细胞培养技术及^3H-胸腺嘧啶脱氧核苷(^3H-TdR）掺入法，研究CCK及其A受体拮抗剂L-364.718(L18)、B受体拮抗剂L-365.260(L60)对培养的人胆管癌细胞QBC939（QB）、OCUCb-LM1(OC)、HuCC-T1(Hu)、OZ生长的影响。结果 CCK通过其A和B受体显著的促进了QB和OC的生长，而对Hu和OZ的生长无明显影响。结论 CCK可促进胆管癌细胞的生长，胆管癌细胞可能无自分泌和旁分泌CCK的机制。