一例大黄鱼内脏白点病精准用药案例

大黄鱼是我国东南沿海重要的海水养殖经济鱼类之一,随着养殖规模不断扩大、养殖海区老化,病害问题频发,特别是每年越冬前后由杀香鱼假单胞菌引起的内脏白点病,给大黄鱼养殖业造成了严重的经济损失,养殖业者盲目和超量使用抗生素,不仅导致细菌产生耐药性,更是对养殖对象的机体生理代谢和自身免疫防御系统产生影响。

斜带髭鲷内脏白点病病原的分离鉴定及耐药性分析

本研究采用平板分离法对具有典型症状的斜带髭鲷(Hapalogenys nitens)进行病原微生物的分离培养,结合形态学、生理生化特征和分子生物学技术对病原进行种属鉴定,并对分离得到的病原菌进行了药物敏感性试验。病理切片结果显示,病鱼肝脏、脾脏、鳃、头肾、心脏均可观察到明显的白色炎性肉芽肿病灶,从患病鱼脾脏、肝脏和头肾的白色结节处均分离到单一外观的细菌菌落hn-1。通过生理生化特征鉴定、16S rRNA基因测序和回归感染实验证实斜带髭鲷内脏白点病的致病菌为哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)。透射电镜观察显示分离菌具有极生鞭毛及侧鞭毛;毒力基因检测显示分离菌携带toxR、luxR、vvh、vhh和trh基因;药敏试验结果显示,分离菌株主要对喹诺酮类、氨基糖苷类、四环素类等药物具有较强的敏感性。研究结果可为斜带髭鲷的内脏白点病的病害防控提供科学依据。

大黄鱼内脏白点病的病原分析与鉴定

从福建三都澳网箱养殖患病的大黄鱼脾、肾分离到2株优势菌(H2013032002和H2013032003),通过人工感染试验证实其为大黄鱼内脏白点病病原,应用API-20E生理生化和16SrRNA分子系统鉴定,药物敏感试验筛选敏感药物。生化鉴定结果显示2株菌与恶臭假单胞菌和荧光假单胞菌的符合度为75.2%;16SrRNA序列分析结果表明:该2株菌与恶臭假单胞菌同源率高达99.0%,确定这2株菌为恶臭假单胞菌;药物敏感试验表明:病原菌对诺氟沙星、环丙沙星、恶喹酸、卡那霉素等4种药物高度敏感。

大黄鱼(Pseudosciaena crocea)内脏白点病病原分离鉴定及致病性研究

于2013年4月从宁德患内脏白点病大黄鱼(Pseudosciaena crocea)中分离得到两株优势菌NZBD9和NZBD11,这两株菌在16—19°C条件下回归感染能引起大黄鱼内脏白点病,而在7—10°C和24—27°C条件下同样的人工感染不能致病,从而证实这两株菌为大黄鱼内脏白点病的病原菌。经16S rDNA基因的测序和时间飞行质谱微生物鉴定仪分析,NZBD9和NZBD11同为变形假单胞菌。药敏性实验结果显示NZBD9对庆大霉素、诺氟沙星和四环素等7种药物高度敏感。组织病理学观察结果显示病鱼的肝脏、脾脏、头肾等组织中均出现明显病症,如变性和坏死。

大黄鱼内脏白点病病原杀香鱼假单胞菌及其毒力因子研究进展

2002年以来,在我国东南沿海爆发了大黄鱼的内脏白点病,该病的特点是能够在大黄鱼内脏器官如肝、脾、肾中形成白色结节,其致死率极高,目前尚未有有效办法进行防治,给大黄鱼养殖业造成了严重的经济损失。2013年,大黄鱼内脏白点病的致病病原菌被鉴定为杀香鱼假单胞菌。目前关于该胞菌的报道和研究仍很少。文章从全基因组测序注释的角度对大黄鱼内脏白点病病原杀香鱼假单胞菌及其毒力因子进行了综述。

大黄鱼(Pseudosciaena crocea)内脏白点病的组织病理和超微病理分析

利用组织切片及超薄切片电镜技术对患内脏白点病大黄鱼(Pseudosciaena crocea)的肝脏、脾脏和肾脏3种组织进行病理学分析,探讨该病的致病机理。结果显示,大黄鱼的临床症状为体表无明显病症,脾、肾、肝等内脏有大量白色结节;组织病理显示,肝、肾和脾是感染损伤的主要靶器官,出现组织变性坏死,空泡化严重,炎性细胞浸润;病变组织均出现病理性结节。超微病理显示,病鱼肝、肾、脾细胞超微结构受损严重,尤以线粒体和细胞核损伤明显。线粒体肿胀,嵴断裂消失,空泡化;细胞核核膜破裂,染色质浓缩边集;肾脏和脾脏均发现大量菌聚集成团的病原。研究表明,大黄鱼内脏白点病的组织细胞病理变化特征显示了病原菌的入侵和危害,造成鱼体生理代谢紊乱,免疫力和抵抗力下降,鱼体终因无法维持正常的生命活动而导致死亡。

网箱养殖大黄鱼内脏白点病病原菌分离鉴定及致病性研究

为探究宁德市网箱养殖大黄鱼内脏白点病及其病原菌的致病性,通过宏基因组分析及对比,初步判定内脏白点病病原菌为假单胞菌属细菌。将分离纯化后的菌株ND2018对健康大黄鱼进行腹腔注射回归感染试验,证实菌株ND2018为大黄鱼内脏白点病病原菌。结合菌株ND2018的全基因测序结果,最终确定菌株ND2018为变形假单胞菌。试验结果显示,变形假单胞菌ND2018为条件病原菌,菌液密度高于1×10^(4)cfu/mL时,大黄鱼内脏出现白色结节症状,变形假单胞菌ND2018致病性得到体现。对白色结节内脏进行组织病理学观察,结果显示,病鱼的肝脏、脾脏和肾脏组织均发生炎性病变,含铁血黄素沉积,变性或坏死组织细胞与菌体形成肉芽肿组织结节,即为肉眼可见的“白点”。该菌株对新霉素、卡那霉素、呋喃唑酮、环丙沙星、复方磺胺以及多黏菌素B敏感,对恩诺沙星、庆大霉素、氟苯尼考等20种抗生素耐药。本试验结果可为该地区网箱大黄鱼健康养殖和内脏白点病防预及治疗工作提供基础理论参考。

大黄鱼内脏白点病的病原分离鉴定及致病性

为探究引起福建省福州市连江县某养殖场内大黄鱼内脏白点病的致病原,本研究从患白点病大黄鱼肝脏中分离纯化出一株优势菌DGZ5.形态学观察、生理生化特性鉴定、16S rRNA基因序列分析、18种毒力基因检测、人工回归感染试验以及对36种抗菌药物敏感性检测的结果显示,DGZ5菌株为杀香鱼假单胞菌.DGZ5菌株携带ompA、sigX、flgM、secY和编号为EPB94769.1的5种毒力基因,对体长为10~15 cm的大黄鱼的半致死浓度(LD_(50))为8.07×10^(6)cfu·mL^(-1).其对头孢他啶、庆大霉素、丁胺卡那和新霉素等12种抗生素药物敏感.组织病理切片结果显示:患病大黄鱼的肝脏和肾脏发生了明显的组织病理变化.本研究结果为由该菌引起的大黄鱼内脏白点病的有效防治提供了科学依据.

宁德市三都湾养殖大黄鱼内脏白点病发生规律初探

通过2015-2018年对三都湾海区大黄鱼养殖区的监控及调查,发现该地区大黄鱼内脏白点病的发病情况和流行规律。结果显示,该病的流行具有鲜明的周期性,每年的发病期为10月至次年5月中旬,且该病的发生与水体溶解氧含量(DO值)存在正向关联。这可能与大黄鱼内脏白点病主要致病菌假单胞菌为专性需氧菌有关。因此,水溶氧量可能是监测该病发生的一项重要预测指标,可为大黄鱼内脏白点病的预防和控制提供理论依据。

一株大黄鱼内脏白点症病原菌的分离鉴定及其理化特性分析

为探究大黄鱼内脏白点症病原,了解病原特征及其药敏特性,对分离自患内脏白点病大黄鱼的内脏组织的一株优势菌NDLC-P1进行回归感染实验,并确定其为内脏白点症的致病菌.扩增并克隆致病菌的gyrB基因,在线同源序列比对结果显示其与变形假单胞菌的同源性达100%;基于gyrB序列构建发育树结果显示,NDLC-P1与变形假单胞菌聚为一支,置信度达100%,综合判断NDLC-P1为变形假单胞菌.在此基础上,利用梅里埃微量多项鉴定系统对病原菌NDLC-P1的生理生化特性进行分析.按常规纸片法进行药敏试验,结果显示菌株NDLC-P1对氧氟沙星、庆大霉素、卡那霉素、诺氟沙星及强力霉素敏感.研究结果将为大黄鱼内脏白点症的病原特征研究及药物防治提供基础数据.

2017年~2019年福建大黄鱼内脏白点病病原菌耐药性状况分析

为了解福建大黄鱼内脏白点病病原菌的耐药情况,作者于2017年1月~2019年12月期间从福建省大黄鱼主要养殖区宁德市发病或有明显内脏白点病症状的大黄鱼体内共分离获得病原菌69株,均为假单胞菌,对其进行8种水产用抗菌药物的敏感性试验。结果表明:69株大黄鱼源假单胞菌对8种抗菌药物敏感性表现不一,总体而言,其对硫酸新霉素、恩诺沙星、盐酸环丙沙星相对敏感;而对甲砜霉素、氟苯尼考、磺胺嘧啶相对耐药。

网箱养殖大黄鱼内脏白点病的早期干预效果分析

在2016年大黄鱼内脏白点病病原菌耐药性普查工作的基础上,筛选出盐酸恩诺沙星和盐酸土霉素2种大黄鱼源假单胞菌的敏感性药物,首次在国内针对大黄鱼内脏白点病开展早期干预治疗试验,显著降低了该病的发病率及因该病引起的死亡率,其中,又以盐酸恩诺沙星的抗菌效果更为明显。本次试验以期探索早期防治大黄鱼内脏白点病的有效方法,在降低发病率的同时,指导养殖户科学用药,为保障渔药减量行动、节约渔药成本等打下基础。

加州鲈内脏白点病的防治建议

今年,加州鲈行情看好,广大养殖户投苗积极性高昂。即使进入了六月,仍有不少养殖户投苗或补苗。最近,很多养殖户反映其小规格加州鲈出现类似诺卡氏菌病的内脏白点,但拌喂抗生素的疗效很差。经我们检测,小规格加州鲈(100g/尾以下)的内脏白点病与诺卡氏菌病有很大差别,二者的病因完全不同。

生鱼内脏白点病病因分析与防治建议

近期,生鱼价格疯狂上涨,苗种紧缺,后市可期。然而,当前生鱼正遭受内脏白点病的肆虐,小至全长仅8cm的朝苗、大至二龄成鱼均有发病,给养殖户带来巨大损失。生鱼内脏白点病是何病因,该如何防控呢?1 概述生鱼内脏白点病,是指以肝脏、脾脏、肾脏等内脏器官出现白点为主要症状的病害,一年四季、各种规格均有发病,是生鱼最常见的病害之一。近年来,我们依托于活宝源鱼病室的专业设备,对大量患内脏白点病的生鱼进行全面检测.

大黄鱼(Larimichthys crocea)内脏白点病的病原分离和组织病理学观察

【目的】确定大黄鱼"内脏白点病"的病原,初步分析该病的致病机理,为大黄鱼内脏白点病的防治提供部分启示。【方法】开展病原菌的分离、种类鉴定和人工感染试验等工作,同时通过石蜡组织切片的方法,观察病鱼的组织病理学变化。【结果】确定病原菌为恶臭假单胞菌。在病鱼的肝脏、肾脏、脾脏等组织中均能发现明显症状或病症,各组织均发生炎性病变,细胞变形或解体,在脾、肾等组织中,纤维组织增生,围绕菌体形成肉眼见到的"白点"。【结论】恶臭假单胞菌作为病原菌,引起大黄鱼内脏出现明显白点,其致病机理仍需进一步探讨。

浅析大黄鱼源变形假单胞菌的流行与防控

变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)是一类重要的鱼类条件致病菌,可感染多种海、淡水养殖鱼类。变形假单胞菌引起的内脏白点病是网箱养殖大黄鱼最重要的病害之一,在海水网箱养殖中,患病大黄鱼没有明显的外观症状,给疾病的诊断和防治工作带来了更大的挑战。从病原入侵大黄鱼的部位、发病症状、流行季节、发病地域、防治措施等方面综述变形假单胞菌的相关内容,并从养殖管理、药物防治和疫苗开发3个方面提出防治大黄鱼内脏白点病的策略,提出降低养殖密度、做好养殖管理是目前防治该病最主要的手段,期望为这一疾病的防治提供参考,推动大黄鱼养殖产业健康发展。

抗杀香鱼假单胞菌溶血素共调节蛋白单链抗体的制备及特性分析

杀香鱼假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)是大黄鱼(Larimichthys crocea)内脏白点病的主要致病菌,为制备能识别杀香鱼假单胞菌的特异性抗体,采用固相化抗原筛选方法,以杀香鱼假单胞菌重组溶血素共调节蛋白为抗原,从兔天然噬菌体scFv文库中筛选出特异性的单链抗体(scFv);通过构建含有针对杀香鱼假单胞菌单链抗体(scFv)的重组质粒,对筛选出的scFv进行原核诱导表达。通过4轮淘选,共获得16株针对杀香鱼假单胞菌溶血素共调节蛋白的单链抗体(scFv),通过亲和力分析,最终筛选出7株特异性较高的单链抗体(scFv)进行原核表达;成功构建了含有抗杀香鱼假单胞菌溶血素共调节单链抗体(scFv)的重组质粒pET-30a-Hcp-scFv,转化到大肠杆菌表达菌株中,其中6个重组质粒可稳定表达,经过蛋白质可溶性分析和Western Blot鉴定,目的蛋白主要以包涵体的形式存在。研究结果为快速制备大量抗杀香鱼假单胞菌抗体提供了一种简便的方法,为今后大黄鱼内脏白点病的临床快速诊断奠定了基础。

大黄鱼trim38基因的克隆及其表达分析

由变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)引起的大黄鱼(Larimichthys crocea)内脏白点病的死亡率可达50%~80%。对抗病相关基因trim38进行了分子及表达特征等分析。结果显示:该基因开放阅读框(ORF)1623 bp,编码540个氨基酸,预测蛋白分子量为61.58 ku,等电点6.99。qRT-PCR的结果表明,在所有检测的组织中都发现了trim38的转录产物,但在肾脏中的相对表达量最高。变形假单胞菌攻毒刺激后,大黄鱼脾脏中该基因持续表达,在120 h达到峰值;肝脏中3 h显著表达,之后相对表达量降低;肾脏中该基因相对表达量变化不大,在96 h左右达到最大值。上述结果表明trim38基因参与了大黄鱼应对变形假单胞菌感染的抗病免疫过程。

大黄鱼杀香鱼假单胞菌实地操作指南

据椒江区近年来对养殖大黄鱼的病害测报和监测,网箱养殖大黄鱼主要疾病有内脏白点病、寄生虫病、弧菌病、虹彩病毒病等,其中冬春季以内脏白点病为主。台州市椒江区水生动物防疫检疫站于2017年1月着手开展大黄鱼杀香鱼假单胞菌诊断与控制技术研究,现将大黄鱼杀香鱼假单胞菌实地操作汇总如下。