不同子宫内膜癌细胞系中G蛋白耦联受体30mRNA及蛋白表达观察

目的观察不同子宫内膜癌细胞系中G蛋白耦联受体30(GPR30)mRNA及蛋白的表达变化。方法收集正常增生期人子宫内膜组织,原代培养子宫内膜腺上皮细胞并鉴定。体外培养人子宫内膜癌细胞系ISK(ERα阳性、ERβ阳性、高分化)、RL95-2(ERα阳性、ERβ阳性、中分化)、HEC-1-B(ERα阴性、ERβ阳性、中分化)、KLE(ERα阴性、ERβ阴性、低分化)。采用real-time PCR法检测正常子宫内膜腺上皮细胞及不同子宫内膜癌细胞系中的GPR30 mRNA,采用Western blotting法检测GPR30蛋白。结果子宫内膜腺上皮细胞、ISK细胞系、RL95-2细胞系、HEC-1-B细胞系、KLE细胞系中GPR30 mRNA相对表达量分别为0.016±0.002、0.032±0.004、0.049±0.003、0.051±0.006、0.083±0.001,GPR30蛋白相对表达量分别为0.31±0.22、0.57±0.01、1.21±0.04、1.34±0.05、1.77±0.01。各子宫内膜癌细胞系中GPR30 mRNA及蛋白相对表达量均高于子宫内膜腺上皮细胞(P均<0.05);ISK细胞系中GPR30 mRNA及蛋白相对表达量最低,与RL95-2细胞系、HEC-1-B细胞系、KLE细胞系相比,P均<0.05;KLE细胞系中GPR30 mRNA及蛋白相对表达量高于HEC-1-B细胞系及RL95-2细胞系(P均<0.05)。结论不同子宫内膜癌细胞系中GPR30 mRNA及蛋白均呈高表达,且在高、中、低分化的子宫内膜癌细胞系中表达水平逐渐增高。

单核巨噬细胞系THP-1对子宫内膜癌细胞系RL952增殖和侵袭能力的影响及其分子生物学机制

目的探讨单核巨噬细胞系THP-1对子宫内膜癌细胞系RL952增殖和侵袭能力的影响及其分子生物学机制。方法收集2015年3月至2016年5月的各类型子宫内膜病变病例180例,增殖期、分泌期、单纯增生期、复杂增生期、不典型增生和Ⅰ型子宫内膜癌病例各30例。采用免疫组织化学方法分析各类型子宫内膜病变中的巨噬细胞增殖、浸润程度。采用CCK方法检测分析单核巨噬细胞系THP-1对子宫内膜癌细胞系RL952增殖和侵袭能力的影响程度。采用Transwell法来检测分析宫内膜癌细胞系RL952对单核巨噬细胞系THP-1的招募能力。采用Western blot技术检测分析单核巨噬细胞系THP-1对子宫内膜癌细胞系RL952中的Cyclin D1和MMP-2的表达水平的影响情况。结果单核巨噬细胞系THP-1的增殖、浸润数目与子宫内膜癌细胞系RL952增殖和侵袭能力呈正相关性,差异具有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜癌细胞系RL952对单核巨噬细胞系THP-1具有招募作用。随着单核巨噬细胞系THP-1的增殖、浸润数目的增加,子宫内膜癌细胞系RL952中的Cyclin D1和MMP-2表达水平随着时间增加而相应上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论单核巨噬细胞系THP-1浸润为子宫内膜癌发生的机制之一。

雌激素、孕激素对雌激素受体、孕激素受体阴性子宫内膜腺癌细胞系JEC裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的探讨一定浓度雌激素(E2)及孕激素(P)对雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)阴性的子宫内膜腺癌细胞系JEC裸鼠移植瘤的影响。方法选用人子宫内膜腺癌细胞系JEC为研究对象,Balb/c.nu裸鼠皮下注射8×105个/0.2mLJEC细胞,分别注射E2、P及NS连续一周,观察肿瘤的生长及病理学变化情况。结果各组肿瘤体积、瘤体重量及瘤细胞核的积分光密度值依次为E2组>NS组>P组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 ER和PR阴性的JEC细胞生长可受到雌激素和孕激素的调控,一定浓度的雌激素能促进瘤体的生长,而孕激素则对瘤体的生长有抑制效应。

雌激素对ER阴性的子宫内膜腺癌细胞系JEC增殖的影响

目的探讨不同浓度17-β雌激素(E2)对雌激素受体(ER)阴性的子宫内膜腺癌细胞系JEC的作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察不同浓度(10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9、10-10、10-11和10-12 mol/L)E2作用JEC1d、2d、3d、4d、5d后细胞的增殖活性。结果不同浓度的E2作用JEC细胞1d、2d、3d后,其OD值和对照组相比无明显差异;作用4d、5d后10-7、10-8和10-9 mol/L组OD值和对照组比较有差异,其中10-7mol/L组在第5天OD值与对照组比较有显著差异。结论一定浓度的雌激素能促进JEC细胞的增殖。

17β-雌二醇调控子宫内膜癌细胞孤儿核受体ERRα表达的研究

背景与目的:雌激素受体相关受体α(estrogenreceptor-relatedreceptorα,ERRα)是孤儿核受体亚家族成员之一,可与雌激素受体α(estrogenreceptorα,ERα)竞争结合同一靶基因位点,从而干扰雌激素-雌激素受体核内信号通路的转导,因而可能在子宫内膜癌的发生方面发挥一定作用。本研究旨在探讨17β-雌二醇(E2)对子宫内膜癌细胞孤儿核受体ERRα的调控作用,明确ERRα在子宫内膜癌发生中的作用及与ER信号通路的关系。方法:采用RT-PCR和Westernblot方法,检测不同浓度17β-E(210-10、10-8、10-6mol/L)作用于ERα阳性的子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞和ERα阴性的子宫内膜癌细胞系HEC-IA细胞24h、48h后ERRαmRNA水平和蛋白水平的变化,并应用完全性ER拮抗剂ICI182780同时作用细胞,观察是否可阻断E2对ERRα的调控作用。结果:不同浓度的17β-E2作用于Ishikawa细胞24h、48h后ERRαmRNA水平及蛋白水平均有不同程度的下调,以10-8mol/L作用后下调最明显。同时加入10-8mol/LE2和10-6mol/LICI182780作用于Ishikawa细胞后,E2对ERRα的下调作用被阻断。不同浓度的17β-E2作用于HEC-IA细胞24h后ERRαmRNA水平出现不同程度上调,但蛋白水平未见明显变化。当17β-E2作用细胞48h后,ERRα蛋白水平出现明显上调,以10-8mol/L作用后上调最明显。同时加入10-8mol/LE2和10-6mol/LICI182780作用于HEC-IA细胞后,E2对ERRα的上调作用无明显变化。结论:17β-E2可下调Ishikawa细胞ERRα的表达,且这种降调作用是通过ER介导完成的;17β-E2可上调HEC-IA细胞ERRα的表达,且这种上调作用不被完全性ER拮抗剂ICI182780所阻断。

人子宫内膜腺癌细胞系的建立

目的构建人子宫内膜腺癌细胞系。方法将1例高分化子宫内膜腺癌手术切除的肿瘤组织制成单细胞悬液,用含10%胎牛血清的DMEM/F-12培养基进行原代培养,倒置显微镜下观察细胞形态,并用免疫荧光染色法检测其角蛋白。结果体外培养细胞传至50代以上,传代后细胞单层贴壁,散在生长,密度增加时见堆积现象,失去接触抑制,细胞质中角蛋白表达阳性。结论成功建立了人子宫内膜腺癌细胞系。

IFN-α1b对人子宫内膜腺癌细胞系JEC增殖的影响及机制

目的 研究 IFN-α1b对子宫内膜腺癌细胞系 JEC增殖及细胞周期的影响。方法 不同浓度的IFN-α1b作用24h后,通过细胞计数观察对 JEC的抗增殖效应,应用流式细胞技术分析细胞周期改变和细胞周期调控因子 p21,cyclin A和cyclin E的表达。结果 不同浓度的 IFN-α1b对 JEC均有抗增殖作用,其中500 U/ml抗增殖作用最强。流式细胞仪(FCM)检测显示S期细胞积累,p21的表达增加和 cy clin A表达减少,而cyclin E的表达增加。结论 IFN-α1b能够抑制子宫内膜腺癌细胞系JEC的增殖,其机理可能与 p21的表达增加和cyclin A表达减少,导致S期细胞积累有关。

甲型流感病毒H_3N_2诱导人子宫内膜腺癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨甲型流感病毒H3N2对人子宫内膜腺癌细胞系(endometrialadenocarcinomacelllines,JEC)细胞的凋亡诱导作用及机制。方法取不同血凝单位的H3N2感染JEC细胞,经HE染色、琼脂糖凝胶电泳以及流式细胞术等方法检测细胞凋亡情况,并用免疫细胞化学法检测H3N2对JEC细胞Fas、FasL及TGF-β表达的影响。结果感染后的JEC在形态上呈现凋亡变化;电泳出现梯状条带;流式细胞术显示细胞凋亡率随病毒感染时间的延长而降低,且有随着病毒浓度增加而增高的趋势。免疫细胞化学法示病毒感染后JEC细胞的Fas染色增强,TGF-β染色减弱,但FasL始终没有表达。结论甲型流感病毒H3N2能够诱导JEC细胞凋亡,此作用与病毒浓度及感染时间有一定关系,其机制可能与Fas和TGF-β的表达有关。

孕激素对孕激素受体阴性的子宫内膜腺癌细胞JEC的影响

目的探讨不同浓度的孕激素(progesterone,P)对孕激素受体(progesterone receptor,PR)阴性的子宫内膜腺癌细胞系JEC细胞增殖和细胞周期的影响及其机制。方法取JEC细胞体外培养,加入含不同浓度P的培养液,采用细胞计数法、四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术(FCM)的方法,观察JEC细胞的增殖活性和细胞周期时相变化;同时用FCM检测加入P前后JEC细胞中p21蛋白的表达;用免疫组织化学法及图像分析,检测加入P前后JEC细胞内Cyclin A的表达。结果 (1)细胞计数法和MTT法显示,P可使JEC细胞数明显减少;(2)1×10-5 mol/L的P作用72 h,可使JEC细胞G0/G1期比例增加,S期及G2/M比例减少;(3)P对JEC细胞内p21蛋白的表达无影响。(4)P可明显抑制JEC细胞内Cyclin A蛋白的表达。结论 PR阴性的JEC细胞生长可受到孕激素的调控,其作用具有剂量和时间效应.这种调控可能与Cyclin A有关,但与P21蛋白无关。

子宫内膜腺癌细胞JEC—9药物敏感性研究

用单层细胞培养、细胞生长抑制和集落形成试验三种方法,观察子宫内膜腺癌细胞JEC—9对九种常用抗癌药物和三种中药合剂的敏感性。结果表明,表阿霉素、顺铂和丝裂霉素对该癌细胞有高度敏感性,其中表阿霉素在1.2×10^(-6)mg/ml浓度下仍有明显的细胞毒效应。结合临床给瘤源患者用药,取得良好的治疗效果。

孕激素对孕激素受体阴性的子宫内膜腺癌细胞JEC增殖的影响

目的探讨不同浓度的孕激素(P)对孕激素受体(PR)阴性的子宫内膜腺癌细胞系JEC细胞增殖和细胞周期的影响。方法取JEC细胞进行体外培养,加入含不同浓度P的培养液,采用细胞计数法、四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术(FCM)的方法,观察JEC细胞的增殖活性和细胞周期时相变化;同时用免疫细胞化学染色及图像分析,检测JEC细胞在加入P前后细胞周期调控蛋白cyclin A表达的变化。结果①10-5、10-6、10-7、10-8mol/L的孕激素作用JEC细胞后,经细胞计数法与MTT法研究得知,P抑制JEC细胞生长而使其细胞数明显减少。②P作用JEC细胞48h及72h后,可使G0/G1期的细胞比例增加,S及G2/M期的细胞比例减少;③P可明显抑制JEC细胞内cyclinA蛋白的表达。结论PR阴性的JEC细胞生长可受到孕激素的调控,一定浓度的孕激素对JEC细胞的生长产生明显的抑制效应,其作用可能具有剂量和时间效应性。研究还提示,这种调控作用可能与cyclin A表达的变化有关。

干扰素对甲型流感病毒感染的JEC细胞增殖的影响

目的探讨干扰素-α2a(IFN-α2a)对甲型流感病毒post-infected感染的JEC细胞增殖的影响。方法采用不同浓度的IFN-α2a作用于H3N2感染0、1、4h的JEC细胞,用MTT比色法在病毒感染后24h进行检测。结果IFN-α2a作用于病毒感染0h、1h后的JEC组OD值升高,而病毒感染4h后的JEC组的OD值却降低。结论IFN-α2a可促进流感病毒H3N2感染初期JEC的增殖,但却抑制感染后期JEC的生长。

人子宫内膜癌耐醋酸甲羟孕酮细胞株的建立

目的建立人子宫内膜癌孕激素耐药细胞株Ishikawa(ISH)/醋酸甲羟孕酮(MPA),为子宫内膜癌耐孕激素的发病机制提供基础。方法采用逐步递增MPA浓度方法进行Ishikawa细胞株耐药体外诱导。采用MTS法测定药物敏感性;绘制细胞生长曲线和计算群体倍增时间。结果 (1)成功建立了MPA诱导的人子宫内膜癌耐MPA细胞株ISH/MPA,其对MPA耐药指数为3.35;(2)ISH/MPA在含MPA 10μmol/L的培养基中的细胞倍增时间与Ishikawa在普通培养基中的倍增时间比较,差异无统计学意义(P>0.05),两者生长曲线比较一致。结论成功建立人子宫内膜癌MPA耐药细胞模型ISH/MPA细胞系,为进一步研究子宫内膜癌耐孕激素机制提供了基础。