下调环状RNA Hsa-circ-PVT1对子宫腺肌病异位子宫内膜间质细胞增殖、侵袭及血管生成作用机制的影响

目的:探讨环状RNA浆细胞瘤变体易位1(Hsa-circ-PVT1)对子宫腺肌病异位子宫内膜间质细胞增殖、侵袭和血管生成的影响,以及其对微小RNA145(miR-145)和丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)基因的调控机制。方法:qRT-PCR检测子宫腺肌病异位子宫内膜中Hsa-circ-PVT1、miR-145表达。双荧光素酶实验检测Hsa-circ-PVT1和miR-145的关系。生物信息数据库TargetScanHuman、miRDB、miRactDB预测miR-145的下游靶点。细胞分组:Hsa-circ-PVT1-inhibitor-NC+miR-145-antagomir-NC+si-MAPK1-NC(NC)、Hsa-circ-PVT1-inhibitor(inhibitor)、Hsa-circ-PVT1-inhibitor+miR-145-antagomir(inhibitor+antagomir)、Hsa-circ-PVT1-inhibitor+miR-145-miR-145-antagomir+si-MAPK1(inhibitor+antagomir+si)、正常细胞(normal组)。EDU检测各组细胞增殖,Transwell小室检测各组细胞侵袭能力;小管形成实验检测各组细胞血管生成能力;Western blot法检测各组细胞中MAPK1、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平。结果:子宫腺肌病异位子宫内膜中Hsa-circ-PVT1表达明显升高,miR-145表达明显下降,双荧光素酶证实Hsa-circ-PVT1靶向miR-145的表达,miR-145下游靶标为MAPK1。与normal组Y14细胞相比,inhibitor组细胞增殖、侵袭及血管新生的性能明显降低,inhibitor+antagomir组能部分逆转这一抑制作用,而inhibitor+antagomir+si组能部分恢复这一作用,差异均有统计意义(均P<0.05)。结论:子宫腺肌病异位子宫内膜中Hsa-circ-PVT1表达明显升高,Hsa-circ-PVT1能靶向miR-145调控MAPK1表达,抑制Hsa-circ-PVT1表达能明显抑制间质细胞的增殖、侵袭及血管生成。

沉默miR-6771-3p通过靶向AXIN2/Wnt信号通路调控异位子宫内膜间质细胞增殖和迁移实验研究

目的:探讨微小RNA(miRNA)miR-6771-3p在子宫内膜异位组织中的表达及其通过靶向调控AXIN2对异位子宫内膜间质细胞增殖和迁移的影响。方法:收集因子宫内膜异位症行手术治疗的患者子宫在位内膜组织和异位内膜组织34例,采用实时聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测组织中miR-6771-3p的表达水平。将异位子宫内膜间质细胞分为沉默组(转染靶向沉默miR-6771-3p的短发夹RNA载体)和空载体组(转染对照载体)。噻唑蓝(MTT)法分析转染后各组异位子宫内膜间质细胞的增殖能力,细胞划痕愈合实验分析转染后各组异位子宫内膜间质细胞的迁移能力,生物信息学技术和双荧光素酶报告基因实验验证miR-6771-3p和轴抑制蛋白2(AXIN2)的靶向关系,RT-qPCR检测转染后各组细胞AXIN2 mRNA表达水平。Western blot检测转染后各组细胞AXIN2蛋白和Wnt信号通路蛋白的表达水平。结果:子宫异位内膜组织中miR-6771-3p表达显著高于子宫在位内膜组织(P<0.01)。与空载体组异位子宫内膜间质细胞比较,沉默组异位子宫内膜间质细胞增殖能力显著降低(P<0.01),细胞划痕愈合率显著降低(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-6771-3p与AXIN2存在靶向关系(P<0.01),miR-6771-3p能够负调控AXIN2 mRNA表达(P<0.01)。与空载体组相比,沉默组细胞中AXIN2蛋白表达显著升高,Wnt信号通路蛋白表达显著降低(均P<0.01)。结论:在子宫异位内膜组织中miR-6771-3p呈高表达,miR-6771-3p通过靶向AXIN2基因影响Wnt信号通路转导,进而调控异位子宫内膜间质细胞的增殖和迁移。

GnRHa对离体培养异位、在位内膜间质细胞生长抑制及分泌VEGF的影响

目的研究GnRHa对子宫内膜异位症(简称内异症)患者离体培养异位、在位子宫内膜间质细胞生长抑制及分泌VEGF的影响。方法体外原代培养人内异症异位、在位子宫内膜间质细胞,用10-10M、10-8M和10-6M的GnRHa分别干预,用MTT法测定内膜间质细胞的生长增殖情况;用ELISA法测定其分泌的血管内皮生长因子(VEGF)浓度的变化。结果 GnRHa可抑制内异症异位及在位内膜间质细胞的生长增殖,呈剂量和时间依赖性(P<0.05),且对异位内膜间质细胞生长的抑制率明显高于在位(P<0.05);GnRHa可降低异位及在位内膜间质细胞分泌的VEGF的浓度,呈剂量依赖性(P<0.05),且高浓度(10-6M)对异位强于在位(P<0.05)。结论 GnRHa可明显抑制子宫内膜异位症患者异位、在位子宫内膜间质细胞的生长,降低其分泌VEGF的浓度。

GnRHa对子宫内膜异位症内膜间质细胞生长增殖及血管形成的影响

目的:研究GnRHa对子宫内膜异位症异位及在位内膜间质细胞增殖、凋亡及血管形成的影响。方法:体外原代培养人内异症异位及在位子宫内膜间质细胞,用不同浓度的GnRHa分别干预,四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法测定内膜间质细胞的生长增殖活力;Annexin V-FITC和PI双染、流式细胞仪(FCM)检测异位及在位内膜间质细胞凋亡及周期变化;免疫细胞化学检测血管内皮生长因子(VEGF)表达的改变。结果:GnRHa可抑制内异症异位及在位内膜间质细胞增殖且呈剂量依赖关系;GnRHa能明显增加异位及在位内膜细胞的凋亡率(P<0.05),且异位内膜细胞凋亡率明显高于在位内膜(P<0.05);不同浓度的GnRHa作用后,内膜间质细胞均发生细胞周期阻滞,G1期细胞增加,S期细胞减少,此作用随浓度增加而增强(P<0.05);免疫细胞化学测定表明,GnRHa可降低异位及在位内膜间质细胞VEGF的表达(P<0.05),且随GnRHa浓度增加而增强(P<0.05)。结论:GnRHa可明显抑制人内异症异位及在位子宫内膜间质细胞的生长并促进其凋亡,降低异位及在位内膜间质细胞VEGF的表达。

阻断Wnt/β-catenin信号通路对17β-雌二醇作用后子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞活化的影响

目的探讨17β-雌二醇(17β-E2)作用后子宫内膜异位症(内异症)患者在位子宫内膜间质细胞(endometrialstromal cell,ESC)内是否存在功能性Wnt/β-catenin信号通路的激活,以及阻断该信号通路对ESC活化的影响。方法体外分离培养内异症患者在位ESC,用0.1 nmol/L17β-E2处理ESC48 h。免疫细胞化学染色检测17β-E2作用后β-cate-nin在ESC中的表达。通过转染T细胞因子(T-cell facter,TCF)依赖的荧光素酶报告质粒(PGL3-OT)检测ESC内的Wnt/β-catenin信号,以PGL3-OF为阴性对照。将TCF的显性负性突变体(dominant negative TCF,dnTCF)表达质粒转染ESC,阻断Wnt/β-catenin信号的转导,用Western blot法检测ESC血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达变化。结果免疫细胞化学染色发现17β-E2能促进β-catenin在ESC核内的表达。17β-E2(0.1 nmol/L)作用后,转染相同量的质粒,PGL3-OT组细胞荧光活性明显高于PGL3-OF组(P<0.01)。Western blot检测结果显示17β-E2能明显促进ESC VEGF和MMP-9的表达;转染dnTCF-3阻断Wnt/β-catenin信号通路,ESC中VEGF和MMP-9的表达较转染空载体(pcDNA3)组均显著下降(均P<0.01)。结论17β-E2能促进内异症患者ESC Wnt/β-catenin信号通路的激活,阻断该信号通路可抑制ESC的活化。

CXCL12和CXCR4对骨髓干细胞向子宫内膜间质细胞趋化的影响

背景:骨髓干细胞可定植于子宫内膜损伤小鼠的子宫内膜组织,然而促进骨髓干细胞向子宫内膜迁移的分子机制目前尚不清楚。目的:探讨CXCL12和CXCR4对骨髓干细胞向子宫内膜间质细胞趋化的影响。方法:将小鼠骨髓干细胞和人子宫内膜间质细胞进行血清饥饿过夜,用雌二醇处理24 h,RT-PCR检测小鼠骨髓干细胞中CXCR4的m RNA表达,ELISA检测小鼠骨髓干细胞和人子宫内膜间质细胞中CXCL12水平,Transwell小室观察小鼠骨髓干细胞向人子宫内膜间质细胞的迁移情况。结果与结论:雌二醇预处理可增加人子宫内膜间质细胞中CXCL12的表达和小鼠骨髓干细胞中CXCR4的表达,促进小鼠骨髓干细胞迁移到人子宫内膜间质细胞条件培养基,结果表明,雌二醇能通过CXCL12/CXCR4信号通路促进骨髓干细胞迁移到子宫内膜,为子宫内膜疾病的治疗提供了新思路。

基因转染DKK1对17β-雌二醇促进子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞VEGF和MMP-9表达的影响

目的利用基因转染pcDNA3.1-DKK1阻断Wnt/-βcatenin信号通路,观察对17β-雌二醇(17-βE2)作用后子宫内膜异位症(内异症)患者在位子宫内膜间质细胞(ESCs)中血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA及蛋白表达的影响,探讨Wnt/-βcatenin信号通路在介导雌激素促进异位内膜粘附、侵袭和转移中的作用。方法体外分离培养内异症患者ESCs,利用LipofectamineTM2000,分别将pcDNA3.1-DKK1质粒,pcDNA3.1空载质粒转入ESCs。选用10-10mol/L 17β-E2处理ESCs不同时间,RT-PCR和Western blot检测转染DKK1前后ESCs VEGF、MMP-9 mRNA及蛋白表达。结果 17-βE2能明显促进内异症患者ESCs VEGF、MMP-9 mRNA及蛋白的表达,于10-10mol/L作用48 h最明显(P<0.05)。转染pcDNA3.1-DKK1质粒组内异症患者ESCs VEGF和MMP-9 mRNA及蛋白表达较空白组和空载体组均显著下降(均P<0.05)。结论阻断Wnt/-βcatenin信号通路能明显抑制17-βE2对内异症患者ESCs VEGF、MMP-9 mRNA及蛋白表达的促进作用。雌激素可能通过激活Wnt/-βcatenin信号通路促进内异症患者在位子宫内膜的异位种植。

丹莪妇康煎膏对子宫腺肌病异位子宫内膜间质细胞Y14增殖、迁移及侵袭的影响

目的:研究丹莪妇康煎膏含药血清对子宫腺肌病间质细胞Y14的细胞生物学功能的影响。方法:制备丹莪妇康煎膏含药血清,作用于间质细胞Y14,CCK-8、Transwell及流式细胞术检测细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡情况;同位素相对标记与绝对定量技术检测差异表达蛋白情况。结果:与对照组相比,丹莪妇康煎膏含药血清高剂量组作用96h,抑制细胞增殖差异显著(P<0.05);中、高剂量组细胞迁移数及侵袭数均显著下降(P<0.05);同位素相对标记与绝对定量技术检测并筛选到差异表达蛋白质共188个,其中表达上调的蛋白质81个,表达下调的蛋白质107个。结论:丹莪妇康煎膏能抑制Y14细胞的增殖、迁移及侵袭;同位素相对标记与绝对定量技术筛选出的差异表达蛋白质为进一步研究其作用机制提供了基础。

17β-雌二醇对子宫内膜间质细胞体外分泌趋化因子IL-8、MIP-1α、RANTES和I-309的影响

目的探讨17β-雌二醇对子宫内膜间质细胞分泌IL-8、MIP-1α、RANTES和I-309的调控,以解析雌激素在子宫内膜异位症发生发展中的作用机制。方法用不同浓度17β-雌二醇处理子宫内膜间质细胞48小时;此后选用10-9mol/L17β-雌二醇处理子宫内膜间质细胞12、24、36和48小时,ELISA法分析刺激前后培养上清中IL-8、MIP-1α、RANTES和I-309分泌水平。结果子宫内膜间质细胞体外高水平自然分泌IL-8,17β-雌二醇能抑制IL-8的分泌,呈剂量依赖性。RNATES和MIP-1α分泌水平较IL-8低,经雌激素刺激子宫内膜间质细胞后MIP-1α表现出与IL-8相同的分泌方式,但对RANTES分泌无明显影响。子宫内膜间质细胞经雌激素刺激前后均未检测到I-309。结论雌二醇可能参与子宫内膜白细胞和单核巨噬细胞的募集,但不是异位灶中上述趋化因子高表达的原因。

17β-雌二醇和二噁英对子宫内膜间质细胞表达趋化因子IL-8及其受体CXCR1的调控作用

解析内外环境因素对子宫内膜间质细胞表达IL-8及其自分泌作用的调控。采用免疫组化法比较子宫内膜异位症患者异位灶和在位内膜CXCR1翻译水平表达;流式细胞术分析17β-雌二醇和二噁英单独或联合作用对子宫内膜间质细胞表面CXCR1表达的调控作用;ELISA法分析17β-雌二醇和二噁英单独或联合作用对子宫内膜间质细胞分泌IL-8的影响。结果显示CXCR1在子宫内膜异位症患者异位灶组织高表达。17β-雌二醇和二噁英单独作用均抑制子宫内膜间质细胞表面CX-CR1的表达以及IL-8的分泌。二者联合作用能够上调CXCR1的表达,上调幅度与雌二醇浓度呈正相关;但进一步抑制了IL-8的分泌。雌激素与二噁英对子宫内膜间质细胞复合作用抑制其IL-8的分泌及其自分泌作用;子宫内膜异位症患者腹腔液高水平IL-8并非由内外雌激素样物质直接作用于异位灶子宫内膜间质细胞所致。

GnRH-Ⅱ对子宫内膜异位症患者离体培养的子宫内膜间质细胞分泌VEGF的影响

目的:检测体外培养的子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)患者在位和异位内膜间质细胞分泌的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的浓度,并观察不同浓度的II型促性腺激素释放激素(GnRH-Ⅱ)对在位和异位内膜间质细胞分泌VEGF的影响。方法:分别给予原代培养的EMs患者在位与异位子宫内膜间质细胞不同浓度(1×10-10～1×10-6mol/L)的GnRH-Ⅱ处理,不加GnRH-Ⅱ组作为对照,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养液中VEGF浓度并进行比较。结果:体外培养的EMs患者异位子宫内膜间质细胞分泌VEGF,培养48 h后分泌量与在位子宫内膜间质细胞比较差异无统计学意义(P(0.05)。1×10-10～1×10-6mol/L的GnRH-Ⅱ可呈浓度依赖性地抑制体外培养的在位和异位子宫内膜间质细胞分泌VEGF(P<0.01),且对异位子宫内膜间质细胞的抑制作用强于在位(P<0.01)。结论:EMs患者的异位子宫内膜间质细胞分泌VEGF的能力与在位子宫内膜的相近,这对EMs的形成和发展可能起重要作用。GnRH-Ⅱ对EMs患者体外培养的异位子宫内膜间质细胞VEGF的分泌有明显的抑制作用,且作用明显强于对在位内膜间质细胞的。

胰岛素对子宫内膜间质细胞分泌IGF-1和IGFBP-1的影响

目的 :了解胰岛素对子宫内膜间质细胞分泌胰岛素样生长因子 1(IGF 1)和胰岛素样生长因子结合蛋白 1(IGFBP 1)的影响。方法 :用含不同浓度雌二醇和胰岛素的培养液培养增生晚期人子宫内膜间质细胞 2 4h后 ,留取培养液测定IGF 1。用含不同浓度孕酮和胰岛素的培养液培养分泌晚期人子宫内膜间质细胞 2 4h后 ,留取培养液测定IGFBP 1。结果 :1.增生晚期间质细胞培养液中IGF 1的浓度 :2 0 μU ml胰岛素组为 1.39±0 .33μg L ,低于 10 0 μU ml胰岛素组 (2 .0 3± 0 .5 3μg L) (P <0 .0 1) ;10 0ng L雌二醇 + 2 0 μU ml胰岛素组为 2 .18± 0 .36 μg L ,低于 10 0g L雌二醇 + 10 0 μU ml胰岛素组 (3.4 2± 0 .75 μg L) (P<0 .0 1)。 2 .分泌晚期间质细胞液中IGFBP 1浓度 :2 0 μU ml胰岛素组为 0 .16± 0 .5 8μg L ,低于对照组 (P <0 .0 1) ,高于 10 0 μU ml胰岛素组 (0 .10± 0 .4 8μg L) (P <0 .0 1) ;10 μg L孕酮 + 2 0 μU ml胰岛素组为 2 .10± 1.17μg L ,低于 10 μg L孕酮组 (P <0 .0 1) ,高于 10 μg L孕酮 + 10 0 μU ml胰岛素组 (0 .5 0± 0 .2 8μg L) (P <0 .0 1)。 结论 :1.胰岛素促进增生期子宫内膜间质细胞分泌IGF 1;2 .胰岛素抑制分泌晚期子宫内膜间质细胞分泌IGFBP 1。

子宫内膜间质细胞肿瘤的临床病理与免疫组化研究

子宫内膜间质细胞肿瘤较少见.国外本病占所有子宫恶性肿瘤的0.2%,占子宫肉瘤25%;国内报告病例不止50例,且无免疫组织化学研究的报告.我院在近29年外检工作中遇见11例,并作了免疫组化的研究,探讨组织发生.

瘦素对体外子宫内膜间质细胞分泌IL-6的影响

目的:观察瘦素对体外培养人ESC IL-6分泌的影响,探讨瘦素对女性生殖生理的调节作用。方法:采用ELISA方法测定加入不同浓度瘦素时ESC分泌IL-6的含量。结果:在ESC细胞上清液中IL-6浓度随着瘦素浓度的增加而升高。结论:瘦素可增加离体培养人ESC分泌IL-6的浓度,并随瘦素浓度增加而增加。

异位子宫内膜间质细胞中芳香化酶的表达及意义

目的探讨芳香化酶在异位子宫内膜间质细胞中的表达情况及其意义。方法体外培养正常和异位子宫内膜间质细胞,采用RT-PCR技术检测其中芳香化酶的表达,发光免疫法检测雌二醇(E2)的表达,流式细胞仪检测凋亡细胞。结果正常子宫内膜间质细胞不表达芳香化酶及E2,细胞凋亡率为7.52%±0.62%;异位子宫内膜间质细胞芳香化酶mRNA为0.89±0.04,E2为(77.24±10.45)pmol/L,细胞凋亡率为1.20%±0.9%,其细胞凋亡率明显低于正常子宫内膜间质细胞(P<0.05)。结论异位子宫内膜间质细胞可以利用芳香化酶合成内源性E2,从而促进细胞增殖。

子宫内膜间质细胞来源外泌体miRNA表达谱的差异分析

探究不同来源子宫内膜间质细胞(ESC)外泌体微小RNA(miRNA)表达谱的差异。将40例子宫内膜异位症(EMs)患者(研究组)及40例子宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅲ行子宫手术患者(对照组)ESC原代培养后分离培养基中外泌体,芯片检测两组外泌体miRNA表达谱差异,qRT-PCR检测两组外泌体miR-205、miR-542-3p水平;对上调、下调倍数较高miRNA且与EMs相关靶基因进行预测。研究组与对照组ESC外泌体有39种miRNA表达差异有统计学意义(P<0.05),其中上调miRNA有14个,以miR-205上调倍数最高;下调有25个,以miR-542-3p下调倍数最高。qRT-PCR检测ESC外泌体miR-205、miR-542-3p水平与芯片检测倍数差异无统计学意义(P>0.05)。PTEN、FBN1、S100A2等与EMs相关的26种基因被预测为差异表达的miRNA靶基因。EMs患者ESC外泌体中存在多种差异表达的miRNA,且靶向多种EMs相关基因。

双氢青蒿素对TGF-β1诱导的子宫内膜间质细胞分泌MMP-9和TIMP-1的影响

目的分析双氢青蒿素(DHA)对加入转化生长因子-β1(TGF-β1)培养的人子宫内膜间质细胞的增殖活性以及分泌MMP-9和TIMP-1的影响,探讨DHA对子宫内膜纤维化的作用机理。方法消化子宫内膜组织并滤出其中的间质细胞。据不同的孵育方法细胞被设成4组,对照组:按照常规方法培养;DHA组:常规培养液中滴入DHA;TGF-β1组:常规培养液中滴入TGF-β1;TGF-β1+DHA组:常规培养液中滴入TGF-β1和DHA。通过吸光度值观察4组细胞的增殖结果;分析每组培养液中分泌的Ⅰ型胶原的含量;免疫细胞化学法衡量细胞里的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)以及其抑制剂-1(TIMP-1)值的变化。结果对照组与DHA组相比无明显差异(P>0.05);TGF-β1组与对照组相比,细胞的吸光度值(0.1299±0.0023)升高,培养液中Ⅰ型胶原(0.7246±0.0036)分泌量上升,细胞内MMP-9的含量(0.0394±0.0024)稍微升高(P>0.05),TIMP-1的含量(0.7288±0.0620)明显升高(P<0.05),MMP-9/TIMP-1的值(0.0514±0.0035)减少(P<0.05)。TGF-β1+DHA组与TGF-β1组相比,细胞的吸光度值(0.1210±0.0028)下降,培养液中Ⅰ型胶原(0.5723±0.0036)分泌量降低,细胞内MMP-9的含量(0.0812±0.0031)明显升高(P<0.05),TIMP-1的含量(0.4529±0.0433)明显降低(P<0.05),MMP-9/TIMP-1的值(0.1546±0.0195)增加(P<0.05)。结论DHA能抑制TGF-β1作用的子宫内膜间质细胞增殖,并能调节TGF-β1作用的细胞内MMP-9和TIMP-1的水平来达到拮抗子宫内膜纤维化的效果。

miR-455对子宫内膜间质细胞氧化应激的调控作用及相关机制研究

目的探讨miR-455对人子宫内膜间质细胞(HESC)氧化应激的调控作用及相关机制。方法采用不同浓度过氧化氢溶液干预HESC,细胞转染的方法使HESC过表达miR-455,CCK-8法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,实时定量PCR法检测miR-455表达水平。采用生物信息学数据库筛选出miR-455靶点为脂肪酸结合蛋白4(FABP4)。通过细胞转染的方法,抑制HESC FABP4的表达,另将miR-455模拟物和FABP4过表达载体单独或联合转染HESC,使HESC中miR-455和FABP4过表达。比较沉默FABP4的HESC与空白对照的HESC,及FABP4、miR-455联合过表达的HESC与过表达miR-455的HESC存活率、凋亡率。结果与0μmol/L浓度过氧化氢溶液处理的HESC比较,5、10、20μmol/L浓度过氧化氢溶液处理的HESC凋亡率上升,miR-455表达水平下降(均P<0.05)。20μmol/L浓度过氧化氢溶液处理后,与空白对照的HESC比较,过表达miR-455的HESC存活率上升、凋亡率下降(均P<0.05),沉默FABP4的HESC存活率上升、凋亡率下降(均P<0.05)。20μmol/L浓度过氧化氢溶液处理后,与过表达miR-455的HESC比较,FABP4、miR-455联合过表达的HESC存活率下降、凋亡率上升(均P<0.05)。结论miR-455或通过调控FABP4对HESC的氧化应激损伤发挥保护作用。

cGMP蛋白激酶1在子痫前期中的表达及其对子宫内膜间质细胞蜕膜化与滋养细胞侵袭的影响

目的探究cGMP蛋白激酶1(PKG1)在子痫前期(PE)中的表达及其对子宫内膜间质细胞(hESCs)蜕膜化和滋养细胞侵袭能力的影响。方法选取2019年2月至2021年2月于西安医学院第二附属医院产二科住院分娩的25例PE患者(PE组)和25例健康妊娠者(Normal组)作为研究对象,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western blot)法检测两组孕产妇胎盘蜕膜组织中PKG1 mRNA与蛋白的表达。体外培养hESCs,采用二丁酰环磷酸腺苷(cAMP)与醋酸甲羟孕酮-17-乙酸酯(MPA)联合诱导使hESCs发生蜕膜化,观察蜕膜化细胞的形态学改变;采用RT-PCR检测蜕膜化细胞中催乳素(PRL)和胰岛素生长因子结合蛋白(IGFBP1)的mRNA表达;采用RT-PCR、Western blot法检测PKG1在蜕膜化hESCs中的表达。将si-PKG1转染入hESCs中,并将细胞分为三组:对照组、cAMP+MPA+si-NC组与cAMP+MPA+si-PKG1组;采用RT-PCR检测各组hESCs中PRL、IGFBP1和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达;采用Transwell法检测各组hESCs对滋养层细胞系HTR-8侵袭与迁移功能的影响。结果与Normal组相比,PKG1在PE组中的表达降低(P<0.01)。hESCs经cAMP与MPA诱导后发生典型蜕膜样改变,同时细胞中PRL、IGFBP1和PKG1的表达增加(P<0.05);与对照组相比,cAMP+MPA+si-NC组和cAMP+MPA+si-PKG1组中hESCs呈明显蜕膜化改变,细胞中PRL、IGFBP1和VEGF mRNA表达升高(P<0.01),HTR-8细胞的侵袭与迁移能力增强(P<0.05),但与cAMP+MPA+si-NC组相比,cAMP+MPA+si-PKG1组的上述检测指标的变化趋势均降低(P<0.05)。结论PE患者胎盘蜕膜组织中PKG1表达降低,其可能通过影响hESCs的蜕膜化过程抑制血管生成与滋养细胞的侵袭,从而参与PE的发生发展。

沙利度胺对子宫内膜异位症患者内膜间质细胞的影响及其机制

目的探讨沙利度胺对子宫内膜异位症(EMT)患者内膜间质细胞(ESC)的增殖、迁移运动、修复及体外侵袭能力的影响及其作用机制。方法体外原代培养EMT患者的ESC,加入不同浓度沙利度胺(500.00、250.00、125.00、62.50、31.25μg/ml)分别作用24 h、48 h后,应用噻唑蓝法测定ESC的抑制率。另取ESC分为空白组(沙利度胺0μg/ml)、15μg/ml沙利度胺组、30μg/ml沙利度胺组,分别应用划痕实验、Transwell小室实验测定沙利度胺对ESC迁移运动及修复能力、体外侵袭能力的影响,流式细胞仪检测在沙利度胺作用24 h后ESC的凋亡率,酶联免疫吸附试验实验检测沙利度胺对ESC血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响。结果 15、30μg/ml沙利度胺组细胞的迁移及修复能力、穿膜细胞数较空白组下降,细胞凋亡率较空白组升高(P<0.05);细胞抑制率随沙利度胺作用的浓度升高而升高(P<0.05);15、30μg/ml沙利度胺组细胞VEGF蛋白表达量明显低于空白对照组(P<0.05)。结论沙利度胺可抑制人EMT患者ESC的增殖、迁移运动和体外侵袭能力,并可以诱导细胞凋亡,其机制可能是下调细胞VEGF蛋白分泌。